常用培養(yǎng)基概念及配方

1、LB培養(yǎng)基：是微生物學實驗中最常用的培養(yǎng)基，用于一般細菌培養(yǎng)，特別用于分子生物學試驗中大腸桿菌的保存和培養(yǎng)。用于培養(yǎng)大腸桿菌、枯草桿菌等細菌，分為液態(tài)培養(yǎng)基和加入瓊脂制成的固態(tài)培養(yǎng)基。加入抗生素的 LB 培養(yǎng)基可用于篩選以大腸桿菌為宿主的克隆。PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次對應(yīng)馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂的英文。宜培養(yǎng)酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。改良MC培養(yǎng)基：用于乳酸菌飲料中乳酸菌的菌落計數(shù)；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子；葡萄糖和乳糖為可發(fā)酵糖類提供碳源；乳酸菌發(fā)酵糖產(chǎn)酸使菌落周圍碳酸鈣溶解，以

2、辨別乳酸菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；中性紅為pH指示劑。MRS培養(yǎng)基：乳酸菌培養(yǎng)基，由多種成分組成，適用于乳酸菌的生長，用來分離培養(yǎng)乳酸菌的一類培養(yǎng)基，一種常用的培養(yǎng)基，宜培養(yǎng)分離乳酸菌。由于該培養(yǎng)基十分適于乳酸菌的生長，而且抑制其他菌的生長，因此具有分離乳酸菌的功能。當乳酸菌長成后在培養(yǎng)基上顯黃色，之后會變淡黑色。以此分離乳酸菌。乳酸菌：凡是能從葡萄糖或乳糖的發(fā)酵過程中產(chǎn)生乳酸的細菌統(tǒng)稱為乳酸菌。這是一群相當龐雜的細菌，目前至少可分為18個屬，共有200多種。除極少數(shù)外，其中絕大部分都是人體內(nèi)必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其廣泛存在于人體的腸道中。目前已被國內(nèi)外生物學家所證實，腸內(nèi)乳酸菌

3、與健康長壽有著非常密切的關(guān)系。乳酸菌指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。常見菌種有雙歧桿菌、保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和嗜酸乳桿菌等自配高濃度污水：葡萄糖5550 mgL+(NH4)2SO4,1170 mgL+KH2PO4，170 mgL+COD為5000 mgL。自配污水：葡萄糖555 mgL+(NH4)2SO4，117mgL+KH2PO4 17 mgL+CaC12 0，08 mgL+MgSO4，1，534 mgL+NaHCO3 5508 mgL+FeC13·6H2O025 mgL+C0D 500 mgL+氨氮為30 mgL一、LB培養(yǎng)基配制 1升LB培

4、養(yǎng)培養(yǎng)基需：蛋白胨10g/L；酵母粉5 g/L、Nacl10 g/L、單/雙去離子水、瓊脂1520g/L（配制液體培養(yǎng)基不需要加，配制固體培養(yǎng)基時加入）。pH值用5mol/L NaOH溶液調(diào)至7.2-7.4（用精密pH試紙測定）。配置完后在高壓鍋內(nèi)高壓滅菌21min。二、YPD培養(yǎng)基配制（酵母菌培養(yǎng)基）1）溶解酵母膏/酵母粉（yeast extract）10g/L、蛋白胨（peptone）20g/L于單/雙去離子水中，如制平板加入20g/L瓊脂粉(配制固體培養(yǎng)基)；2）高壓滅菌 121°C 20min；3 加入20g/L葡萄糖 (dextrose或glucose，葡糖糖溶液

5、滅菌后加入、防止與蛋白胨反應(yīng))；注：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨溶液混合后在高溫下可能會發(fā)生化學反應(yīng)，導(dǎo)致培養(yǎng)基成分變化，所以要分別滅菌后再混合。葡萄糖可以過濾除菌，也可以11515min滅菌。三、MRS培養(yǎng)基配制（乳酸菌培養(yǎng)基）蛋白胨（peptone）10g/L、牛肉膏(beef extract)10g/L、酵母菌粉(yeast extract)5g/L、醋酸鈉（乙酸鈉）5g/L、磷酸氫二鉀2g/L、檸檬酸銨2g/L、硫酸鎂0.2g/L、硫酸錳0.2g/L、瓊脂20g/L、吐溫80 1ml/L、葡萄糖20g/L（因葡萄糖與蛋白胨發(fā)生反應(yīng)因此需單獨配制）、pH值用冰乙酸調(diào)至6.26.6（用pH試紙、

6、儀器均可）250微升/L。四、瓊脂糖凝膠配制凝膠板大孔為60ml,兩小孔為30ml，梳子有5微升、10微升等瓊脂糖粉10g12g/L，TBE0.5×（Tris硼酸，是一種PCR技術(shù)中用到的緩沖液。成分及終濃度（5×） 最終pH=8.25或8.3用蒸餾水稀釋至0.5×）1）瓊脂糖凝膠的制備：稱取0.3g瓊脂糖，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE緩液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE緩液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE緩液，將該三角瓶置于微波爐加熱至瓊脂糖溶解。將冷卻至65左右的瓊脂糖凝膠液，加入溴化乙錠（凝膠染料），充分混勻。2）膠板的

7、制備：取有機玻璃內(nèi)槽，洗凈、晾干；將有機玻璃內(nèi)槽置于一水平位置模具上，安好擋板，放好梳子。吸取少量瓊脂糖溶液封固膠膜邊緣，任其凝固，在距離底板0.51.0mm的位置上放置梳子，以便加入瓊脂糖后可以形成完好的加樣孔。如果梳子距離玻璃板再近，則拔出梳子時孔底將有破裂的危險，破裂后將使樣品在凝膠與玻璃板之間滲漏；將剩余的溫熱瓊脂糖溶液倒入膠膜中，使膠液緩慢地展開，直到在整個有機玻璃板表面形成均勻的膠層。凝膠的厚度在35mm之間，檢查一下梳子的齒下或齒間是否有氣泡；室溫下靜置30min左右，待凝固完全后，輕輕拔出梳子，在膠板上即形成相互隔開的上樣孔。制好膠后將鋪膠的有機玻璃內(nèi)槽放在含有0.51

8、5;TAE（Tris-乙酸） 或TBE（Tris-硼酸）工作液的電泳槽中使用，沒過膠面1mm以上。五、培養(yǎng)基是人們對馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的簡稱，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次對應(yīng)馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂的英文。一種常用的培養(yǎng)基，宜培養(yǎng)酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 配制配方：馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂1520克、自來水1000毫升、自然PH。 配制步驟：其做法是稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切成小塊，加水煮爛（煮沸2030分鐘，能被玻璃棒戳破即可），用四層紗布過濾，再據(jù)實際實驗需要加葡萄糖和瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌混勻，稍冷卻后再補足水分至1000毫升，分裝試管，加塞、包扎，滅菌（121）20分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?其他事項： 1.培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37C溫箱培養(yǎng)24h，無菌生長者方可使用。 2.PDA培養(yǎng)基一般不需要調(diào)pH。對于要調(diào)節(jié)pH的培養(yǎng)基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用lmolLNaOH或lmolL