細(xì)胞工程-11講第2節(jié)-組織工程應(yīng)用

1、第五篇 細(xì)胞療法與組織修復(fù)第11講 組織工程第2節(jié) 組織工程應(yīng)用18961920198720061.組織工程牙齒2.組織工程耳3.組織工程皮膚4.組織工程腎臟人的牙齒？一 組織工程牙齒細(xì)胞：牙齒上皮細(xì)胞、間葉細(xì)胞支架：膠原蛋白凝膠培養(yǎng)基：D-MEM（Sigma），10%FCSPDL:周圍韌帶vWF:血管假性血友病因子NF-H:神經(jīng)絲蛋白補(bǔ)充文獻(xiàn)1:2013年3月4日，英國倫敦國王學(xué)院（Kings CollegeLondon）的研究人員提取成人牙齦組織細(xì)胞，將其與取自老鼠的間質(zhì)細(xì)胞結(jié)合，成功培育出一顆新牙。研究人員從成人患者的牙齦中提取上皮細(xì)胞，在實(shí)驗(yàn)室里大量培養(yǎng)，再將它們與老鼠的間質(zhì)細(xì)胞混合。

2、這種間質(zhì)細(xì)胞被培養(yǎng)出“誘導(dǎo)作用”“指示”上皮細(xì)胞開始發(fā)育成為牙齒。研究人員把這種細(xì)胞混合物移植到老鼠身上，結(jié)果長出擁有成活根部的人鼠混合牙。補(bǔ)充文獻(xiàn)2:D：牙本質(zhì)；DP：牙髓；C： 牙骨質(zhì)二 組織工程耳先以3D攝影機(jī)圍繞患者頭部拍攝耳朵照片，然后把幾何構(gòu)造圖輸入電腦，用3D打印機(jī)輸出，制成耳朵軟模型。接著再把充滿牛耳軟骨細(xì)胞的特殊膠原蛋白膠注入軟骨，形成軟骨骨架。幾周內(nèi)軟骨就會逐漸成長，取代覆蓋其外的膠原蛋白，3個月后，柔軟且具有功能的外耳就此長成。FC：纖維鞘Cartilage：軟骨EF：彈性蛋白纖維三 組織工程皮膚中國每年燒傷、潰瘍等皮膚疾病1500萬人，需要皮膚移植的約350萬，需4億立

3、方厘米。人工表皮、復(fù)合人工皮A表皮B 表皮網(wǎng)狀棘C 真皮乳頭D真皮E 皮下組織F毛發(fā)組織工程皮膚技術(shù)路線構(gòu)建步驟（1）種子細(xì)胞與培養(yǎng)液成纖維細(xì)胞：DMEM培養(yǎng)基、10%胎牛血清、青霉素、鏈霉素等。表皮角質(zhì)形成細(xì)胞：DMEM+Ham F-12培養(yǎng)基、表皮生長因子等。（2）支架材料聚羥基乙酸（PGA）。（3）構(gòu)建成纖維細(xì)胞-PGA復(fù)合物酶法消化收集真皮成纖維細(xì)胞，接種在PGA上，加入培養(yǎng)液培養(yǎng)。（4）接種表皮角質(zhì)形成細(xì)胞在前面的復(fù)合物上，更換表皮角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)5天左右。（5）雙層皮膚成熟將復(fù)合物放在可滲透膜上，進(jìn)行氣-液界面培養(yǎng)，促進(jìn)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的進(jìn)一步分化。再培養(yǎng)1周，形成含真皮和表皮兩層結(jié)構(gòu)的組織工程化皮膚。難題：1.血管化：血管生成是指內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)筑的毛細(xì)血管分支和伸展。血管生成有助于損傷組織的修復(fù)。2.毛囊、汗腺等再生。所以美容慎用。3.排異性。我國人造皮膚2007年第四軍醫(yī)大學(xué)開發(fā)成功，進(jìn)入臨床階段。四 組織工程腎臟細(xì)胞：新生大鼠腎臟細(xì)胞人臍帶靜脈上皮細(xì)胞支架材料：去除了細(xì)胞的腎臟，包含皮層、脈管、髓質(zhì)、尿管等。培養(yǎng)基：REGM、EGM2（Lonza）大鼠人、豬組織工程問題與挑戰(zhàn)1.干細(xì)胞誘導(dǎo)分化技術(shù)2.種子細(xì)胞分離與培養(yǎng)3.接種支架材料的方法4.支架材料的設(shè)計與優(yōu)化5.細(xì)胞因子的釋放、與支架材料相結(jié)合的設(shè)計，種子細(xì)胞表達(dá)6.血管化7.復(fù)雜性：多細(xì)胞協(xié)同培養(yǎng)、