細(xì)胞培養(yǎng)縮減版

1、實(shí)驗(yàn)六 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生物教研室生物教研室 朱力宇朱力宇 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 一、一、 什么是細(xì)胞培養(yǎng)？什么是細(xì)胞培養(yǎng)？ 體外培養(yǎng)（體外培養(yǎng)（in vitro）* 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) ： 指從體內(nèi)取出組織、細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無(wú)菌、指從體內(nèi)取出組織、細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無(wú)菌、適當(dāng)溫度和一定的營(yíng)養(yǎng)條件下，使之生存和生長(zhǎng)，并維持其結(jié)適當(dāng)溫度和一定的營(yíng)養(yǎng)條件下，使之生存和生長(zhǎng)，并維持其結(jié)構(gòu)和功能特性。構(gòu)和功能特性。 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：直接取材于有機(jī)體組織的直接取材于有機(jī)體組織的細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：將培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新的容將培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新的容器中，以器中，以1：2

2、的比例繼續(xù)培養(yǎng)的比例繼續(xù)培養(yǎng)。制備游離細(xì)胞懸液制備游離細(xì)胞懸液胰蛋白酶、膠原酶、胰蛋白酶、膠原酶、edta，破壞細(xì)胞間連接破壞細(xì)胞間連接分離出不同分離出不同類型的細(xì)胞類型的細(xì)胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞分離細(xì)胞分離1、離心、離心2、利用細(xì)胞自身的黏附力、利用細(xì)胞自身的黏附力3、抗體吸附、抗體吸附4、流式細(xì)胞儀（、流式細(xì)胞儀（fcm）5、其他、其他 貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞 懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞 二、培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式及類型二、培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式及類型成纖維樣細(xì)胞成纖維樣細(xì)胞上皮樣細(xì)胞：上皮樣細(xì)胞：都可連成單層都可連成單層懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞三、培養(yǎng)

3、細(xì)胞的條件三、培養(yǎng)細(xì)胞的條件132生生 存存 環(huán)環(huán) 境境溫度溫度氣相氣相ph儀器及耗材儀器及耗材細(xì)胞培養(yǎng)室細(xì)胞培養(yǎng)室超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái) co2培養(yǎng)箱 co2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為為 37，5co2 。提供的提供的3個(gè)環(huán)境：個(gè)環(huán)境： 溫度，氣體，濕度溫度，氣體，濕度 co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)倒置相差顯微鏡倒置相差顯微鏡 倒置顯微鏡倒置顯微鏡培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板培養(yǎng)基及試劑培養(yǎng)基及試劑消化液消化液培養(yǎng)基培養(yǎng)基血清血清掃描電鏡法顯示支原體，附于細(xì)胞表面眾多的圓形顆粒為支原體污染問(wèn)題污染問(wèn)題 1.支原體污染支原體污染2.細(xì)菌污染細(xì)菌污染: 能改變培養(yǎng)液的能改變培養(yǎng)液的ph值值，使

4、培養(yǎng)液變混濁。，使培養(yǎng)液變混濁。 細(xì)菌生長(zhǎng)迅速細(xì)菌生長(zhǎng)迅速，能消耗營(yíng)養(yǎng)液和產(chǎn)生毒素。，能消耗營(yíng)養(yǎng)液和產(chǎn)生毒素。 抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，毒性大的細(xì)菌可很快，毒性大的細(xì)菌可很快導(dǎo)致導(dǎo)致細(xì)胞崩解死亡。細(xì)胞崩解死亡。細(xì)菌細(xì)菌細(xì)胞細(xì)胞3.真菌污染真菌污染實(shí)例實(shí)例干預(yù)因素：干預(yù)因素：藥物、藥物、毒物、毒物、物理因素、物理因素、生物作用、生物作用、相互作用、相互作用、其他其他直接分離的細(xì)胞直接分離的細(xì)胞原代培養(yǎng)的細(xì)胞原代培養(yǎng)的細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞可能的結(jié)果可能的結(jié)果1、2、3、例如：三氧化二砷對(duì)白血病細(xì)胞的作用例如：三氧化二砷對(duì)白血病細(xì)胞的作用各種實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求報(bào)告要求實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)材料和器材：實(shí)驗(yàn)材料和器材：實(shí)驗(yàn)流程（或