[精品]瘢痕患者免疫功能狀態(tài)研究

1、瘢痕患者免疫功能狀態(tài)研究瘢痕患者免疫功能狀態(tài)研究摘耍目的：通過比較不同程度瘢痕患者和健康對照組的細(xì)胞 免疫和體液免疫的差異，分析瘢痕患者免疫功能狀態(tài)，探討瘢痕可能 的免疫學(xué)發(fā)生機(jī)制。方法:101例瘢痕患者分為三組：輕度瘢痕組、 中度瘢痕組和重度瘢痕組。選擇健康體檢者50例做為正常對照組。 測定t細(xì)胞亞群比例和cd8t淋巴細(xì)胞的殺傷活性，同時，檢測cd8t 淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中tnf-b水平。分別采用生物學(xué)活性法和elisa 測定瘢痕患者和正常對照ifn-y和il-4分泌水平。結(jié)果：不同組別 cd8t細(xì)胞亞群比例比較結(jié)果和cd4t細(xì)胞相似，即在對照組和輕度瘢 痕組，中度瘢痕組和重度瘢痕組差異不具

2、有顯著性，其余各組間差異 具有顯著性。血清中ifn-y在各組間差異均具有顯著性；上述各組 血清中il-4表達(dá)水平除在輕度和中度瘢痕組間差異不具有顯著性外, 其它各組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。cd8t淋巴細(xì)胞殺傷效應(yīng)在效靶 比為5:1時，除輕度瘢痕和中度瘢痕組間差異不具有顯著性外，其余 各組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。cd8t細(xì)胞培養(yǎng)上清中tnf-i3水平在 各組間差異均具有顯著性。結(jié)論：同對照組比較，瘢痕患者適應(yīng)性免 疫出現(xiàn)以細(xì)胞免疫功能升高，伴隨體液免疫功能降低的趨勢，并且隨 著瘢痕程度的加重，這種變化漸趨明顯。提示，瘢痕組織的形成可能 與機(jī)體細(xì)胞免疫功能異常升高和體液免疫功能水平降低有關(guān)。關(guān)鍵詞

3、瘢痕；thl型細(xì)胞因子；th2型細(xì)胞因子；cd8t細(xì)胞 中圖分類號r619+. 6r320.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼a 文章編號1008-6455 (2011) 02-0247-05study on the adoptive immunity of patients with scaryan gui-chun, an xin, zhang hai-yong, wang rui-hai, pei yin-hui, yu bo(department ofplastic surgery, kailuan hospital, tangshan063000, hebei, china)abstract:objec

4、tiveby comparing the differencesof cellular and humoral immunity betweencaseandcontrol group,the immunity of patients with scar was assessed, so thepossible immunity mechanism of the formation scar was presumedmethodslol cases of patients with scar were divided into 3 groups (mild, middle and heavy

5、group) , 50 ones who have physical examined were served ascontro1. t lymphocytesubtypes and cyotoxicity of cd8 t lymphocyte were detected,and the concentration of tnf-b secreted by cd8 tlymphocyte was determined too. serum was collected fo the detections of infr and il-4, bio-activity method and eli

6、sa were performed for that purposerespectively. resultsthe differences of the percentage of cd4 t subtype in mild, middle, heavy scar group and control were significant except the comparisons between controland mild scar group, middle scar group and heavy scar group, so didthat in cd8 t subtype the

7、concentraion of infr was significantly different among all the groups the expressions of il-4 were different except the comparion ofmild andmiddle scar group about the cytotoxicity of cd8 t lymphocyte, thedifferences were significant except the comparision of mildand middlescar group under the ratio

8、 of effect and target cell was 5:1. therewere significant differences among all the groups about the level of tnf- b . conclusioncompared to the control group, the adoptive immunit ofpatients with scar wasseen to be in an abnormal state, namely, the cellular immunity increased while the humoral immu

9、nity decreased, andthistrend becomes more obviously with the more serious of scar tissue thisindicated that the formation of scar tissue might be related to theincreasment of cellular immunity and the decreasment of humoral immunitykey words: scar;th 1 cytokine ;th2 cytokime ;cd8 t lymphocyte瘢痕（scar

10、）是皮膚創(chuàng)傷修復(fù)和愈合過程的產(chǎn)物。目前有關(guān)瘢痕 組織的適應(yīng)性免疫學(xué)發(fā)山機(jī)制研究尚缺乏系統(tǒng)性，不能從整體水平闡 述瘢痕的免疫學(xué)發(fā)生機(jī)制1。本研究通過研究瘢痕患者適應(yīng)性免疫 功能狀態(tài)，探討瘢痕的發(fā)山與機(jī)體適應(yīng)性免疫應(yīng)答功能z間的關(guān)系, 從而為瘢痕的免疫學(xué)防治奠定理論依據(jù)。1臨床資料自2008年2月2009年9月于我科就診的瘢痕患者101例為病 例組，根據(jù)瘢痕病情嚴(yán)重程度分類的積分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分組：瘢痕顏色 深淺：赤紅或鮮紅伴毛細(xì)血管擴(kuò)張者計3分；淡紅，按壓后可消失計 2分；不紅，甚至有些灰暗計1分；顯示為正常皮膚顏色計0分； 瘢痕高度：高度在8mm以上計3分；48mm計2分；l4mm計1分； 平坦或略

11、有凹陷計0分；瘢痕硬度：堅(jiān)硬如軟骨計3分；硬度似橡 皮計2分；稍軟計1分；柔軟如正常皮膚計0分；瘙癢感：劇烈或 持續(xù)性瘙癢伴搔抓痕計3分；吋常有但不太劇烈，可以忍受計2分; 偶爾出現(xiàn)計1分;無瘙癢癥狀計0分;觸疼覺：很強(qiáng)烈的痛覺過敏， 輕觸時拒按計3分；中等強(qiáng)度的過敏性疼痛，按壓吋有疼痛感但可以 忍受計2分；有時有疼痛感，按壓吋疼痛不明顯計1分；感覺如正常 皮肪沒有異常疼痛感計0分。按此積分標(biāo)準(zhǔn)，積分為1511分為重 度，106分為中度，5-1分為輕度2。臨床病例分為三組：輕度瘢 痕組38例（年齡37. 2±13.5歲），中度瘢痕組31例（年齡32. 5±16.8 歲）和重

12、度瘢痕組32例（年齡41.8±9.5歲）。選擇同期健康體檢者 50例（年齡46.5±12. 7歲）做為正常對照組。2方法通過t細(xì)胞亞群檢測，血清中thl型細(xì)胞因了（ifn-y ）測定, 血清中th2型細(xì)胞因子（il-4）檢測，cd8型細(xì)胞因子（tnf-b ） 檢測，cd8細(xì)胞殺傷活性測定，應(yīng)用spss11.5軟件對資料進(jìn)行統(tǒng)計 學(xué)處理，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，兩組以上均數(shù)比較應(yīng)用方差分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)取雙側(cè)a二0.05。3結(jié)果3. 1 t細(xì)胞亞群檢測結(jié)果：見表13。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)，cd4t淋巴細(xì)胞比率在各組間差異具有顯著性。 在總體趨勢上，隨著瘢痕嚴(yán)重程度加劇，cd4t淋巴細(xì)胞比

13、率逐漸降 低。進(jìn)一步通過組間兩兩比較的q檢驗(yàn)結(jié)果表明，除輕度瘢痕組與對 照組、中度瘢痕組與重度瘢痕組差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義外（p值分別 為0. 688>0. 322）,其余兩兩組間差異具有顯著性（p值均小于0. 05）, 說明中度瘢痕和重度瘢痕組cd4t淋巴細(xì)胞比率均低于輕度瘢痕組和 正常對照組，而中度瘢痕組和重度瘢痕組間、輕度瘢痕組和正常對照 組間cd4t淋巴細(xì)胞比率相同。而在對各組cd8t淋巴細(xì)胞的測定中， 表現(xiàn)為相反的情況，即在總體趨勢上，隨著瘢痕程度的加重，cd8t 淋巴細(xì)胞比率逐漸升高。經(jīng)方差分析，各組間差異具有顯著性，說明 cd8t淋巴細(xì)胞在不同組間存在差異；進(jìn)一步通過q檢驗(yàn)進(jìn)

14、行兩兩組 間比較顯示出同cd4t淋巴細(xì)胞同樣的情況，即在輕度瘢痕組與對照 組、中度瘢痕組與重度瘢痕組差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義外（p值分別為 0.725、0.579）,其余兩兩組間差杲具有顯著性（p值均小于0. 05）, 說明中度瘢痕和重度瘢痕組cd8t淋巴細(xì)胞比率均高于輕度瘢痕組和 正常對照組，而中度瘢痕組和重度瘢痕組間、輕度瘢痕組間和正常對 照組間cd4t淋巴細(xì)胞比率相同。3.2血清中thl型細(xì)胞因子（ifn-y ）測定：見圖1、表4。通過對正常對照組和輕度、中度及重度瘢痕患者血清中ifn-y 進(jìn)行檢測,其表達(dá)水平分別為106.99±54. 12ug/mk 150. 26±6

15、5. 47ng/mk 199. 20±95. 67yg/mk 247. 42±35. 7 82 u g/mlo經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)，各組間差異具有顯著性，表明ifn-y在 正常人群和不同程度瘢痕患者屮表達(dá)量不同。進(jìn)一步應(yīng)用q檢驗(yàn)對兩 兩組間的差異進(jìn)行分析，各兩兩組間比較結(jié)果均顯示具有統(tǒng)計學(xué)意義 （p 均 v0 05）o3.3血清中ii-4的測定結(jié)果：見圖2、表5。研究結(jié)果表明，對照組和輕度、中度和重度瘢痕組血清中il-4 表達(dá)水平分別為 89. 19±1. 87pg/l, 75. 22±2. 15pg/l, 73.84±2.38pg/l, 40. 56

16、±2. 34pg/l,方差分析結(jié)果表明，il-4 在各 組間表達(dá)差弄具有顯著性，進(jìn)一步通過q檢驗(yàn)結(jié)果顯示，除輕度和屮 度瘢痕組間差杲不具有顯著性外，其它各組間差杲均具有統(tǒng)計學(xué)意義。 提示，il-4表達(dá)水平降低與瘢痕組織的形成有關(guān)。3.4 cd8t淋巴細(xì)胞分泌tnf測定結(jié)果：見圖3、表6。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常對照組和輕度、中度和重度組cd8t淋巴細(xì) 胞表達(dá) tnf-b 水平分別為 54. 14±10. 07iu/ml,122. 59±11. 55iu/ml, 306. 95±12. 79iu/ml, 431. 32±12. 59iu/ml,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)

17、處理，各組間 差異具有顯著性，cd8t細(xì)胞表達(dá)tnf-b在正常對照組，輕度，中度 和重度組呈逐漸升高的趨勢，提示瘢痕組織的發(fā)&與cd8t淋巴細(xì)胞 分泌tnf水平升高有關(guān)。3.5 cd8t淋巴細(xì)胞殺傷活性測定結(jié)果：見圖4、表7。統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果表明效靶比為5:1時，除輕度瘢痕和中度瘢痕組 間差異不具有顯著性外(p>0. 05),其余各組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意 義(p<0.05),其殺傷百分率在輕度，中度，重度瘢痕組和對照組中 分別為 7. 54%±0. 31%, 7. 84%±0. 35%,9. 16%±0. 34%,6. 54%±0. 2

18、7%。 效靶比為10:1時各組間差異不具有顯著性(p0.05)。4討論瘢痕是人體皮膚組織受到外界各種創(chuàng)傷之后，傷口愈合之處的皮 膚纖維結(jié)締組織大量增牛，最終形成的堅(jiān)硬而不規(guī)則狀腫塊，并常伴 有瘙癢、疼痛等臨床癥狀3。近二十年來，隨著對傷口愈合機(jī)制的 不斷認(rèn)識和研究技術(shù)的不斷提高，人們對瘢痕組織的發(fā)生機(jī)制也進(jìn)行 了深入探討。這些研究將為最終揭示瘢痕發(fā)生的奧秘、尋求瘢痕有效 的治療手段奠定基礎(chǔ)。在正常的傷口愈合過程中，膠原的合成代謝與 降解代謝之間維持著平衡狀態(tài)。一日這種止常的平衡被破壞，膠原的 合成明顯超過降解，最終導(dǎo)致膠原的大量堆積，瘢痕組織開始形成 4-6o研究表明，多種因素參與了瘢痕組織的

19、形成。這些因素主要包括 遺傳、感染和免疫等7。瘢痕組織的免疫學(xué)發(fā)牛機(jī)制目前尚缺乏系 統(tǒng)的基礎(chǔ)研究，本研究從細(xì)胞免疫和體液免疫方面進(jìn)行了較為系統(tǒng)的 探討。t淋巴細(xì)胞按照其細(xì)胞表面cd分子不同分為兩個亞群，即cd4t 細(xì)胞亞群和cd8t細(xì)胞亞群。前者接受抗原提成細(xì)胞呈遞的抗原肽后 被活化，然后再向不同方向分化，分別參與細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫 應(yīng)答。后者是參與細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要效應(yīng)細(xì)胞，通過分泌致死性細(xì) 胞因子發(fā)揮特異殺傷活性8 o正常情況下cd4和cd8t細(xì)胞亞群的比 例維持在動態(tài)平衡中，一旦這種平衡被打破，會導(dǎo)致機(jī)體免疫功能出 現(xiàn)異常，繼而引發(fā)機(jī)體出現(xiàn)免疫無能或免疫亢奮狀態(tài)，出現(xiàn)與免疫相 關(guān)的臨

20、床病理性表現(xiàn)。通過對正常對照組和輕度、中度及重度瘢痕患 者外周血中t細(xì)胞亞群檢測，在總體趨勢上，隨著瘢痕嚴(yán)重程度加劇， cd4t淋巴細(xì)胞比率逐漸降低。而cd8t淋巴細(xì)胞在總體趨勢上，隨著 瘢痕程度的加重，cd8t淋巴細(xì)胞比率逐漸升高。cd4t淋巴細(xì)胞活化 后向th2方向分化，通過其分泌的細(xì)胞因了作用于b淋巴細(xì)胞，b淋 巴細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞合成并分泌抗原特異性免疫球蛋白，參 與機(jī)體的體液免疫應(yīng)答過程。而cd8t淋巴細(xì)胞被活化后，通過分泌 多種細(xì)胞因子發(fā)揮其殺傷靶細(xì)胞效應(yīng)，即通過這種細(xì)胞免疫清除異物。 無論是細(xì)胞免疫還是體液免疫，在免疫細(xì)胞活化，甚至是在免疫介質(zhì) 發(fā)揮效應(yīng)的過程中，一方面可以

21、行使清除抗原性杲物的免疫防御功能, 另一方面，不可避免的會造成自身組織的免疫損傷。因此，細(xì)胞免疫 應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答應(yīng)該維持在適當(dāng)?shù)乃? o研究結(jié)果提示， cd8t淋巴介導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能界常增高以及由于cd4t淋巴細(xì)胞比例 降低所造成的體液免疫功能降低在瘢痕的形成過程中可能發(fā)揮重要 作用：由于具有殺傷活性的cd8t淋巴細(xì)胞比率升高，可能導(dǎo)致其在 炎癥局部大量聚集，通過其合成和分泌的大量炎性介質(zhì)，引起正常組 織的嚴(yán)重?fù)p傷，在組織損傷修復(fù)過程中出現(xiàn)膠原纖維的過度沉積，從 而促使瘢痕組織形成。cd4t淋巴細(xì)胞接受抗原信息后，分別向兩個 方向活化，thl和th2o前者通過分泌ifn-y和il-2 （

22、thl型細(xì)胞因 了）參與細(xì)胞免疫過程，后者則通過分泌il-4、6、10 （th2型細(xì)胞 因了）等參與b細(xì)胞合成并分泌抗體的過程。thl型細(xì)胞因了對體液 免疫應(yīng)答過程發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用；同樣，th2型細(xì)胞因子抑制細(xì)胞免疫 應(yīng)答過程10-12 o il-4表達(dá)水平降低與瘢痕組織的形成有關(guān)。瘢痕 組織的發(fā)生與cd8t淋巴細(xì)胞分泌tnf水平升高有關(guān)。研究結(jié)果表明， 在低效靶比時，隨著瘢痕程度的加重，cd8t淋巴細(xì)胞殺傷活性有逐 漸升高的趨勢，說明瘢痕組織的形成與ctl殺傷活性增強(qiáng)有關(guān)。5結(jié)論研究結(jié)果表明：瘢痕患者適應(yīng)性免疫出現(xiàn)以細(xì)胞免疫功能升高, 伴隨體液免疫功能降低的趨勢，并且隨著瘢痕程度的加重，這種變

23、化 漸趨明顯。因此，瘢痕組織的形成可能與機(jī)體細(xì)胞免疫功能杲常升高 和體液免疫功能水平降低有關(guān)。參考文獻(xiàn)1 閆貴春，裴銀輝瘢痕發(fā)生機(jī)制研究進(jìn)展j 中國美容醫(yī) 學(xué)，2010, 19(8) : 1251-1253.2 郭建輝，曹毅瘢痕治療的研究進(jìn)展j.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué) 報,2007,31 (3):402-404.3 borondof, wisniackida, verginieg, et al. the scar mechanism revisitedj. europ physi j,2008,65(12):93-101.4 jaquet k, krause kt,denschel jr,et al

24、. eduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism? stem cells and development, 2005, 14(3) :299-309.5 drobnik j, karbownik-lewinska m, szczepanowska a, et al. regulatory influenee of melatonin on collagen accumulation in the infarcted heart scarj. j pineres, 2008, 45(3):285-2906 tabel gm, whittaker p, vlachonassios k, et al. collagen fiber morphology determines echogenicity of myocardial scar: implications for ima