實(shí)驗(yàn)八絨毛細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察

1、實(shí)驗(yàn)八 絨毛細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 初步掌握絨毛細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察。2. 了解人類染色體的形態(tài)和計(jì)數(shù)分析方法。 實(shí)驗(yàn)原理 人類細(xì)胞染色體標(biāo)本制備常用的材料為外周血淋巴細(xì)胞、培養(yǎng)的體細(xì)胞和骨髓細(xì)胞等。而 絨毛組織細(xì)胞具有活躍的增殖力， 取材后不需經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)的無(wú)菌處理， 此時(shí)用有絲分裂阻斷劑 秋水仙素處理細(xì)胞，可使正在分裂的細(xì)胞停止在中期，再經(jīng)低滲、 固定等處理， 便可得到較多可 供分析的中期染色體。絨毛細(xì)胞是在受精卵分裂胚胎發(fā)育過(guò)程中形成的，其遺傳物質(zhì)與胎兒相同。在孕4555天絨毛細(xì)胞具有較高的分裂活性，可用其自然分裂細(xì)胞制備染色體標(biāo)本，具有早期、快速、簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確的

2、優(yōu)點(diǎn)。適用于臨床的細(xì)胞遺傳學(xué)的產(chǎn)前診斷研究等。 實(shí)驗(yàn)用品 1. 材料：絨毛組織。5ml 離心管、吸管、試管0.075mol/l kcl 溶液、無(wú)2. 器材：顯微鏡、離心機(jī)、恒溫水浴箱、眼科鑷子、眼科剪子、 架、玻璃筆、載玻片、吸水紙。3. 試劑：培養(yǎng)皿、rpmi-1640 培養(yǎng)液、秋水仙素（2卩g /ml ）、菌生理鹽水、檸檬酸鈉、60%冰乙酸、甲醇：冰乙酸（3 : 1）固定液、giemsa染液、磷酸緩沖液ph6.8 ) 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 1. 秋水仙素處理：選取分芽多、末端粗鈍的絨毛枝 23枝剪下、用生理鹽水漂洗、再將絨毛枝放入含有終濃度2卩g/ml秋水仙素的5ml rpmi-1640培養(yǎng)液或

3、hanks液的離心管中、37 C溫育處理約 30 分鐘。2. 吸去培養(yǎng)液，加入 37C預(yù)熱的1%檸檬酸鈉和0.075mol/l kcl （1 : 1）低滲液4ml 37 C 下處理 1015分鐘。3. 加入 1ml 固定液混勻后吸去上清液。4. 加入 3ml 固定液固定 30 分鐘，（甲醇:冰乙酸 3: 1）。5. 吸去上清液，加 60%冰乙酸 1ml 解離 1.52分鐘再加入 3ml 甲醇，處理 2分鐘，吸出 絨毛枝。6. 以 800r/min 離心 5 分鐘，棄上清液。7. 加 5 滴固定液，混勻制成細(xì)胞懸液，冰濕片滴片、干燥。8. giemsa 染色68分鐘。9. 鏡下觀察25個(gè)分裂相并進(jìn)行染色體計(jì)數(shù)及性別鑒定。 注意事項(xiàng) 1. 絨毛組織取出后應(yīng)立即放入固定液中。1）2. 觀察標(biāo)本時(shí)，應(yīng)選擇成株的絨毛絲或分散的合體細(xì)胞進(jìn)行檢查。3. 可記數(shù)細(xì)胞應(yīng)是胞漿、 胞核著色清晰， 如標(biāo)本胞漿不透明或胞核腫脹， 可能是由于：酒精濃度不夠，脫水不徹底；（2）酸化、堿化不當(dāng)；（ 3）細(xì)胞本身已退變。4. 胞核染色不正常，而呈藍(lán)色或黑色，則是染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。5. 如果胞漿著色不鮮艷，可能是染液配制不合適。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告與思考題 繪圖繪制染色體