醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)10頁(yè)

1、無(wú)菌檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)1目的通過(guò)無(wú)菌檢驗(yàn)，確保滅菌后產(chǎn)品能夠達(dá)到無(wú)菌的要求。2 適用范圍適用于滅菌后醫(yī)療器械產(chǎn)品電凝鑷的無(wú)菌檢驗(yàn)。3 檢驗(yàn)依據(jù)3.1、產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)3.2、中國(guó)藥典（2010年版）3.3、GB14233.2-2005 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第二部分：生物試驗(yàn)方法3.4、GB15980-1995 一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)4 儀器、設(shè)備百級(jí)層流超凈工作臺(tái)、電熱干燥箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、電子天平、PH計(jì)、冰箱、酒精燈、三角燒瓶，接種環(huán)、無(wú)菌棉簽、鑷子，試管架，大試管若干等。5 無(wú)菌檢驗(yàn)室的環(huán)境要求5.1 無(wú)菌檢驗(yàn)應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部百級(jí)的

2、單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。5.2 緩沖區(qū)與外界環(huán)境、無(wú)菌檢驗(yàn)室與緩沖區(qū)之間空氣應(yīng)保持正壓，陽(yáng)性對(duì)照室與緩沖區(qū)之間空氣應(yīng)保持負(fù)壓。無(wú)菌檢驗(yàn)室與室外大氣之間靜壓差應(yīng)大于10Pa。無(wú)菌檢驗(yàn)室的室溫應(yīng)保持1826，相對(duì)濕度：4565%。5.3 無(wú)菌檢驗(yàn)室的單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的監(jiān)測(cè)。每年至少檢測(cè)一次。5.4 無(wú)菌檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)同時(shí)檢查超凈工作臺(tái)單向流空氣中的菌落數(shù)：每次操作時(shí)在層流空氣所及臺(tái)面的左中右置3個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，暴露30min，于3035培養(yǎng)48小時(shí)，菌落數(shù)平均應(yīng)不超過(guò)1cfu/平板。6

3、無(wú)菌檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備6.1 器具滅菌、消毒6.1.1 滅菌：試驗(yàn)過(guò)程中與供試品接觸的所有器具必須采用可靠方法滅菌?？山?jīng)電熱干燥箱160以上干烤2小時(shí)，或置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121蒸汽滅菌30分鐘后使用（根據(jù)滅菌效果驗(yàn)證決定滅菌參數(shù)）。所有的滅菌物品不應(yīng)超過(guò)2周即用畢，否則應(yīng)重新滅菌。6.1.2 消毒：凡檢驗(yàn)中使用的器材無(wú)法滅菌處理的，使用前必須經(jīng)消毒處理。如無(wú)菌檢驗(yàn)室的試管架、電子天平、工作臺(tái)面、工作人員的手、橡膠吸頭等?？刹捎孟緞┙莼虿潦谩Ｏ緞?yīng)每月更換，以防止產(chǎn)生耐藥菌株。6.1.3 標(biāo)識(shí)：器具的滅菌、消毒后必須做好標(biāo)識(shí)，標(biāo)明滅菌、消毒時(shí)間和使用有效期。6.2 人員、物料進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室6.

4、2.1 開(kāi)啟紫外線燈或臭氧發(fā)生器進(jìn)行空間滅菌處理，消毒時(shí)間不得少于30min。6.2.2 物料進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室流程6.2.2.1 脫包：進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室的物品若有雙重包裝的，需將外包裝在傳遞窗/緩沖間拆除后，傳入試驗(yàn)室。6.2.2.2 消毒：進(jìn)入無(wú)菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試品等的外表都應(yīng)采用適用的方法進(jìn)行消毒處理，以避免將外包裝污染的微生物帶入無(wú)菌檢驗(yàn)室。6.2.2.3 傳遞：查看所有進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室的器具上的滅菌、消毒標(biāo)識(shí)，是否在有效期內(nèi)。符合要求的經(jīng)傳遞窗傳入無(wú)菌檢驗(yàn)室。6.2.3 人員進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室流程6.2.3.1 更鞋脫衣：在一更區(qū)脫去一般區(qū)工作鞋，穿上無(wú)菌檢驗(yàn)室工作鞋；脫去一般區(qū)工作服。

5、6.2.3.2 洗手：首先用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水連續(xù)沖洗20秒，洗凈泡沫。6.2.3.3 更衣：在二更區(qū)按照從上到下的順序穿戴無(wú)菌工作服（包括衣、帽、口罩等），要求褲子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有頭發(fā)。6.2.3.4 手消毒：用消毒液浸泡雙手5秒以上或用浸過(guò)消毒液的棉球擦拭雙手。消毒液可用洗必泰、新潔爾滅、碘伏、75%酒精等。6.2.3.5 人員進(jìn)入：經(jīng)緩沖間進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室。6.2.4 人員進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室后，進(jìn)一步用消毒液擦拭工作臺(tái)面，戴無(wú)菌手套。7 無(wú)菌檢驗(yàn)操作要求7.1 全過(guò)程必須嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，防止微生物污染。7.2 使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放，避免破損，以防培

6、養(yǎng)物擴(kuò)散。7.3 所有操作均應(yīng)在近火焰區(qū)進(jìn)行，且不得有大幅度或快速動(dòng)作，以免攪動(dòng)空氣中的塵埃微粒。7.4 使用金屬接種器具時(shí)，用前、用后均需灼燒滅菌。7.5 在接種培養(yǎng)物時(shí)，動(dòng)作應(yīng)輕、準(zhǔn)，防止培養(yǎng)物濺出，產(chǎn)生汽溶膠，造成污染。7.6 操作過(guò)程中所有的帶菌物品，用后均應(yīng)作消毒、滅菌處理。可在檢驗(yàn)過(guò)程中隨用隨時(shí)放入消毒液缸內(nèi)浸泡或消毒桶內(nèi)，或在檢驗(yàn)完成后經(jīng)傳遞窗傳至一般區(qū)，立即用壓力蒸汽滅菌鍋121滅菌30分鐘。 8對(duì)照菌液制備8.1 無(wú)菌檢驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5代。8.2取金黃色葡萄球的普通瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種一白金耳至營(yíng)養(yǎng)肉湯或者營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，在3035培養(yǎng)1824h后備用，同時(shí)制

7、備0.9%氯化鈉溶液加入在6支小試管內(nèi)，每支試管內(nèi)加9.0ml的0.9%氯化鈉溶液，在壓力鍋內(nèi)經(jīng)121滅菌30min備用。將已配好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)菌液取1.0ml加入第一支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:10的菌液；取第一支試管內(nèi)1.0m l菌液加入第二支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:100的菌液，同法稀釋成濃度1:106（每ml含菌量100CFU）即可。8.3 采用平皿計(jì)數(shù)法測(cè)定活菌數(shù)。9無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)溫度硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，置3035培養(yǎng)。改良馬丁培養(yǎng)基，置2328培養(yǎng)。10 無(wú)菌檢驗(yàn)10.1 抽樣根據(jù)各自的產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)和相應(yīng)產(chǎn)品出廠檢驗(yàn)規(guī)程的規(guī)定，對(duì)成品庫(kù)內(nèi)的產(chǎn)品進(jìn)行抽樣。一般同一個(gè)滅菌批產(chǎn)品檢驗(yàn)

8、3個(gè)單位供試品。10.2供試液準(zhǔn)備優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)的方法，如供試品不適宜直接投放，可按下列方法制備供試液，應(yīng)使浸提介質(zhì)充分洗提供試品的浸提表面，供試液制備應(yīng)按無(wú)菌操作法進(jìn)行，在制備后2小時(shí)內(nèi)使用。根據(jù)供試品具體特性選擇下列方法：a) 管類(lèi)器具：按管內(nèi)表面積每10cm2流過(guò)管內(nèi)腔1ml浸提介質(zhì)，流量約為10ml/min，收集到無(wú)菌的容器內(nèi)。b) 容器類(lèi)器具：按容器內(nèi)表面積每10cm2加入浸提介質(zhì)1ml的比例，振搖數(shù)次。 c) 實(shí)體類(lèi)器具：實(shí)體類(lèi)器具按表面及每10cm2加入浸提介質(zhì)1ml，振搖數(shù)次。收集上述沖洗液或浸提介質(zhì)于無(wú)菌容器中。10.3 接種薄膜過(guò)

9、濾法：優(yōu)先采用封閉式薄膜過(guò)濾器（集菌器），也可使用開(kāi)放式薄膜過(guò)濾器。濾膜孔經(jīng)不大于0.45µ。濾器和濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌，或直接采用無(wú)菌集菌器。a、如采用封閉式薄膜過(guò)濾器，取一副三聯(lián)式集菌器，將供試液通過(guò)集菌儀過(guò)濾，使通過(guò)每只培養(yǎng)管的量基本均勻。然后通過(guò)集菌儀一只加120ml改良馬丁培養(yǎng)基，另兩只分別加入120ml硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（其中一只做陽(yáng)性對(duì)照，內(nèi)加金黃色葡萄球菌液1ml）。另取一副二聯(lián)集菌器，用同批的沖洗液或浸提介質(zhì)120ml通過(guò)集菌儀過(guò)濾（每只約50ml），同法一只加硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基120ml，另一只加改良馬丁培養(yǎng)基120ml分別作陰性對(duì)照。b、如用一般薄膜過(guò)濾器

10、，將供試液過(guò)濾后取出濾膜，將其剪成3等份，分別置于含50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基的容器中，其中兩份作檢驗(yàn)，一份作陽(yáng)性對(duì)照。10.4培養(yǎng)、觀察上述含培養(yǎng)基的容器分別置規(guī)定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中，除陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)4872小時(shí)外，其余管培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生產(chǎn)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天，觀察是否再出現(xiàn)渾濁或斜面有無(wú)菌生長(zhǎng)；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢判斷是否有菌。10.5結(jié)果判斷培養(yǎng)結(jié)束后，陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)有菌

11、生長(zhǎng)，陰性對(duì)管應(yīng)澄清。否則，就判結(jié)果無(wú)效。所有供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定。若供試品管中任何1管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)判供試品不符合規(guī)定。以一次檢出為準(zhǔn)，不得復(fù)試。當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效；1）無(wú)菌檢驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢驗(yàn)法的要求；2）回顧無(wú)菌實(shí)驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；3）陰性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)；4）供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌檢驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的；11 相關(guān)表單無(wú)菌檢驗(yàn)原始記錄 菌種外購(gòu)、轉(zhuǎn)種記錄 培養(yǎng)基制備記錄 實(shí)驗(yàn)中廢棄的帶菌物品滅菌處理記錄 實(shí)驗(yàn)用稀釋液、沖

12、洗液、緩沖液制備記錄 濃菌液制備使用記錄 無(wú) 菌 檢 查 原 始 記 錄 產(chǎn)品名稱(chēng)檢驗(yàn)日期生產(chǎn)批號(hào)規(guī) 格完成日期滅菌批號(hào)效期檢驗(yàn)者生產(chǎn)單位或產(chǎn)地檢品數(shù)量校對(duì)者檢驗(yàn)依據(jù) 培養(yǎng)天數(shù)菌別 1234567891011121314需氣菌厭氣菌3035薄膜法樣品陽(yáng)性直接法1236陽(yáng)性陰性真 菌2328薄膜法直接法789陰性培養(yǎng)基： 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 配制批號(hào)： 改良馬丁培養(yǎng)基 配制批號(hào)： 稀釋液、沖洗液： 0.1%蛋白胨水溶液 PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液 0.9無(wú)菌氯化鈉溶液配制批號(hào)： 對(duì)照菌： 對(duì)照菌菌液： 取上述對(duì)照菌新鮮培養(yǎng)物1ml，用9ml0.9無(wú)菌氯化鈉溶液10倍系列稀釋?zhuān)∠♂屢?ml作為對(duì)照用菌液。 第 代培養(yǎng)物，稀釋級(jí)別 計(jì)數(shù)結(jié)果 CFU/ml設(shè)備編號(hào)： 隔水式恒溫培養(yǎng)箱： 霉菌培養(yǎng)箱： 集菌儀：無(wú)菌室菌落培養(yǎng)（3035） 時(shí)間 碟號(hào)123（應(yīng)1CFU/平板）24小時(shí)菌落數(shù)結(jié)果 符合 不符合48小時(shí)菌落數(shù)平均菌落數(shù)檢 驗(yàn) 結(jié) 果無(wú)菌檢查結(jié)果判斷： 符合規(guī)定 不符合規(guī)定 菌種外購(gòu)、轉(zhuǎn)種記錄菌種名稱(chēng)； 金黃色葡萄球菌菌種編號(hào)：來(lái)源： 購(gòu)進(jìn)數(shù)量（支）：1支購(gòu)進(jìn)時(shí)間：驗(yàn)收人員簽名：復(fù)蘇日期轉(zhuǎn)種日期菌種代數(shù)培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度及時(shí)間轉(zhuǎn)種數(shù)量管號(hào)操作人簽名營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊