中藥8類十味降糖丸(濃縮丸)藥學研究綜述

1、中藥注冊分類8 藥學研究資料7藥學研究資料綜述 (十味降糖丸（濃縮丸）)課題名稱 十味降糖丸（濃縮丸）研究單位 xxxx制藥有限公司申報單位 xxxx制藥有限公司聯 系 人 聯系方式 Tel: Fax: 藥學研究資料綜述一、工藝研究資料及文獻資料 （一）藥材的分揀去雜質及質量驗收處方各中藥材，經分揀去雜質，按中國藥典20xx年版一部有關規(guī)定檢驗; 其余各原輔料藥按中國藥典20xx年版二部有關規(guī)定檢驗，符合規(guī)定者備用。（二）配料與摻混符合規(guī)定的藥材根據生產批量大小，按處方稱量配伍，將擬用不同方法提取的藥材及粉碎的藥材分別摻混，分開放置。（三）粉碎根據生產工藝需要，將需粉碎藥材用中藥粉碎機粉碎，過

2、100目篩，備用。經對三批中試產品粉碎工藝考查，結果表明常規(guī)粉碎方法即可符合本品生產需要。（四）提取工藝選擇試驗 根據處方中各藥材所含主要成份的理化性質選擇不同的提取方法，葛根、五味子適宜乙醇溶液提取，其余黃芪等六味適宜水提取。（1）葛根、五味子的提取工藝提取藥材葛根、五味子。根據各藥味所含成分的理化性質，適宜采用乙醇溶液提取，故采取正交試驗優(yōu)化乙醇溶液提取工藝條件。取提取藥材，按原處方量配伍，制備工藝正交試驗用樣品。每正交試驗樣品藥材重525g，其中葛根300g、五味子225g。 表1、 因素水平表 L9（34）正交表頭水平因素因 素A加溶劑量（倍） B濃度（） C提取次數（次） D提取時間

3、（小時） 12310 95 3 3 8 75 2 2 6 50 1 1 表2、正交試驗設計表試驗號因 素A加溶劑量（倍） B濃度（） C提取次數（次） D提取時間（小時） 12345678910 95 3 3 10 75 2 210 50 1 18 95 2 18 75 1 38 50 3 26 95 1 26 75 3 16 50 2 3取每正交試驗樣品525g，依表2設計加溶劑量、回流時間、回流次數，分別提取，放冷，濾過，合并濾液，靜置，取上清液濃縮，干燥至恒重后以干膏與葛根素的積作為評價指標。表3、 正交試驗數據表實驗號干膏量(g)出膏率葛根素含量(mg/g)葛根素總量(mg)132.9

4、6.2712.64415.86241.17.839.78401.96325.74.99.79251.60421.94.214.42315.80523.24.412.90299.28650.29.66.65333.83720.13.812.32247.63825.24.811.12280.22933.16.38.32275.39表4、正交試驗結果評價表試驗號因 素評價指標A加溶劑量（倍） B濃度 C提取次數（次）D提取時間（小時）葛根素總量(mg)12345678910 95% 3 310 75% 2 210 50% 1 18 95% 2 18 75% 1 38 50% 3 26 95% 1 2

5、6 75% 3 16 50% 2 3415.86401.96251.60315.80299.28333.83247.63280.22275.39K1K2K31069.42 979.29 1029.91 990.53948.91 981.46 993.15 983.42 803.24 860.82 798.51 847.62k1k2k3356.47 326.43 343.30 330.18316.30 327.15 331.05 327.81267.75 286.94 266.17 282.54R88.72 40.21 77.13 47.64由上述極差分析數據表明：加溶劑量為顯著因素，其次為回流

6、次數、回流時間、溶劑濃度，因此最佳提取方法為A1B2C1D1，由于C1 和C2、D1和D1 、B1和B2相差甚微，考慮到實際生產的能源問題，采用加75%乙醇溶液10倍量，回流提取二次，每次2小時。 確證實驗：取兩份確證實驗樣品，每份樣品中葛根300g、五味子225g，適當破碎，加10倍量75%乙醇溶液回流提取二次，每次2小時，濾過，合并濾液，靜置，取上清液濃縮，烘至恒重，稱量。按質量標準測定干膏中葛根素含量。由兩份確證實驗數據表明：加75%乙醇溶液10倍量，回流提取二次，每次2小時的提取方法與最優(yōu)方法相當，且重復性良好。（2）黃芪等六味藥的提取工藝提取藥材黃芪、地骨皮、知母、山藥、天花粉、雞內

7、金。根據各藥味所含成分的理化性質，適宜采用水提取，故采取正交試驗優(yōu)化水提取工藝條件。取提取藥材適當破碎，按處方量配伍，制備工藝正交試驗用樣品。每正交試驗樣品藥材重2325g，其中黃芪450g、地骨皮750g、知母300g、山藥300g、天花粉375g、雞內金150g。 表1、因素水平表 L9（34）正交表頭 水平因 素A煎煮時間（小時） B加水量（倍） C煎煮次數（次）1232 10 11.5 8 21 6 3表2、正交試驗設計表試驗號因 素A（小時） B（倍） C（次）1234567892 10 1 2 8 22 6 3 1.5 10 2 1.5 8 31.5 6 11 10 3 1 8 1

8、 1 6 2取每正交試驗樣品2325g，依表2設計加水量，煎煮時間，次數，分別煎煮，放冷，濾過，合并濾液，靜置，取上清液濃縮，干燥至恒重后以干膏量作為評價指標。表3、正交試驗結果分析試驗號因 素評價指標A(小時) B(倍) C(次)干膏量(g)1234567892 10 12 8 22 6 31.5 10 21.5 8 31.5 6 11 10 31 8 11 6 2326.91510.34488.07556.24490.96258.74469.03256.36351.22K1K2K3 1325.32 1352.18 842.01 1305.94 1257.66 1417.80 1076.61

9、 1098.03 1448.06R248.71 254.15 606.05 由極差分析結果可得出，其中因素C (次數)為顯著因素，其次為B（加水量），而A（時間）影響最小，即C> B > A。最優(yōu)條件為A1B1C3；由于煎煮三次與二次相差較小，煎煮2小時與1.5小時差別也不大，又考慮到時間因素及實際生產因素，確定提取工藝為10倍加水量，提取2次，每次1.5小時。正交結果確證實驗 取兩份樣品，每確證實驗樣品藥材重2325g，其中黃芪450g、地骨皮750g、知母300g、山藥300g、天花粉375g、雞內金150g，適當破碎，加10倍量水，提取2次，每次1.5小時，流水冷卻，濾過，合

10、并濾液，靜置，取上清液濃縮，干燥至恒重，評價。實驗結果重復性及穩(wěn)定性均好。干膏量與正交表中最優(yōu)者相當。說明正交選定的工藝可以在生產中采用。 （五）成型工藝條件的選定1.格列本脲混合方法的選擇處方中格列本脲屬于低含量原料，采用將格列本脲用等量遞增法與藥粉混勻，再與其它原料混勻。經此方法混合后的藥粉，對格列本脲進行含量測定，混合均勻，可以滿足要求。2.制丸工藝研究 制丸 常規(guī)的方法是將藥粉與稠膏混勻制成軟材，用制丸機制丸，由于本品稠膏量太大，無法制成軟材；故將稠膏與人參細粉及適量淀粉混勻，干燥，用純化水制成軟材，制丸，結果能制出理想的丸劑。干燥 取2份樣品，采用微波干燥，置70溫度下分別在18分鐘

11、、20分鐘、22分鐘、24分鐘、26分鐘、28分鐘、30分鐘、32分鐘，取樣送檢，測量水分、溶散時限。結果干燥24分鐘即能使水分、溶散時限符合要求，硬度適中。包衣、打光 采用藥用炭和明膠為包衣材料，按照常規(guī)的方法包衣打光，結果藥丸色澤均勻，光亮，可以符合生產需要。(六) 中試生產取處方十倍量藥材，在中試設備上試驗，考核工藝穩(wěn)定性，三批數據表明，工藝穩(wěn)定，具可重復性和再現性。二、質量研究資料及文獻資料十味降糖顆粒收載于國家藥品監(jiān)督管理局國家中成藥標準匯編（中成藥地方標準上升國家標準部分 內科 氣血津液分冊），十味降糖丸（濃縮丸）是根據十味降糖顆粒改變劑型的中藥8類新藥（減免臨床研究），現將質量標

12、準起草說明報告如下：【名稱】 十味降糖丸（濃縮丸） 【處方】除輔料外，與原劑型標準一致。【制法】除成型工藝外，與原劑型標準一致?！拘誀睢?以三批中試產品的實際性狀描述。 【鑒別】 (1)為處方中人參的顯微鑒別。 三批中試產品均檢出。與原劑型標準一致。（2）為處方中人參和黃芪的薄層鑒別，經與人參皂苷Rb1、Re、Rg1對照品、黃芪甲苷對照品；缺人參陰性對照樣品、缺黃芪陰性對照樣品對照，斑點顯色清晰，Rf值適宜，專屬性強。予以采用。本鑒別項與原劑型標準一致。（3）為處方中五味子的薄層鑒別，經與五味子甲素對照品、缺五味子陰性對照樣品對照，斑點顯色清晰，Rf值適宜，專屬性強。予以采用。與原劑型標準一致

13、。 （4）還進行了天花粉的薄層鑒別試驗：取本品6g，研細，加稀乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取瓜氨酸對照品，加稀乙醇溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照層色譜法（中國藥典20xx年版一部附錄VIB）試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液各5l，點于同一硅膠G薄層板，分別以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水（8：2：2：3）和正丁醇-冰醋酸-水（5：2：3）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以茚三酮試液，在105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，與瓜氨酸對照品、缺天花粉陰性對照樣品對照，陰性樣品、樣品、瓜氨酸對照品在相同位置均有相同顏色斑點，本品中天花粉尚未找到具特

14、異性的薄層鑒別方法?！緳z查】依照中國藥典20xx年版一部附錄(D)的有關規(guī)定對三批中試產品檢查（重量差異、崩解時限、微生物限度），均符合藥典有關規(guī)定。重金屬 依中國藥典20xx年版一部(附錄 E第二法)檢查，三批中試產品重金屬均低于百萬分之五，暫不設定重金屬檢查項。砷鹽檢查 依中國藥典20xx年版一部(附錄 F第二法)檢查,三批中試產品砷鹽均低于百萬分之二，暫不設定砷鹽檢查項?！竞繙y定】采用高效液相色譜法（中國藥典20xx年版一部附錄VI D）測定。1.葛根的含量測定原標準收載了葛根的含量測定方法，經驗證，原方法樣品制備合理，且峰形對稱，分離度好，陰性無干擾，故采用原標準收載的方法作為含量測

15、定方法。葛根素 中國藥品生物制品檢定所 752-20xxxx儀器與試劑高效液相色譜儀 xx xxxx 型高壓恒流泵xxxx紫外可見波長檢測器伊利特色譜數據工作站色譜柱 xxxxkromasil C18 5um 4.6×250mm柱號譜甲醇 天津四友磷酸、三乙胺為分析純標準曲線:精密稱取葛根素對照品適量,加甲醇制成每1ml含100g的溶液,作為對照品溶液。以100g/ml的對照品溶液為母液，分別配制成50g/ml、25g/ml、5g/ml、2.5g/ml的對照品溶液 。分別精密吸取上述各對照品溶液10l,注入液相色譜儀,測定,計算，即得?；貧w曲線為Y(峰面積)

16、=26.050X(濃度)+26.995 r=0.99987線性范圍為2.5100g/ml,標準曲線近似過圓點,采用外標一點法定量。供試品溶液制備方法的選擇1. 取本品適量，研細，取1g，精密稱定，加甲醇40ml，回流30分鐘，放冷，濾過，濾液置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。2.取本品適量，研細，取1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，即得。經試驗方法較方法重現性好且方法簡單，故采用此方法制備供試品。精密度 同一樣品連續(xù)進樣測定5次，相對標準偏差為1.81%,小于3.0%。穩(wěn)定性 同

17、一樣品,制備后在30分鐘、1小時、6小時、12小時、24小時后分別測定，相對標準偏差為2.10%，小于5.0%,樣品放置24小時內穩(wěn)定。重現性 同一樣品，取5份，各約1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。取上述供試品溶液各10µl，注入液相色譜儀，測定。相對標準偏差為1.85%，小于5.0%。加樣回收率 取已知含量的樣品5份(約1g),精密稱定，分別置50ml量瓶中,各精密加入每1ml含0.1mg的葛根素對照品溶液3ml，蒸干，精密加甲醇50ml，稱定重量，超聲處理3

18、0分鐘，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。取上述供試品溶液各10l,注入液相色譜儀，測定,平均回收率為99.94%。樣品測定 對三批中試產品,采用原標準的含量測定方法測定，其結果如下?！竞繙y定】 葛根 照高效液相色譜法(中國藥典20xx年版一部附錄 D)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇磷酸鹽(1：4)為流動相；檢測波長為250nm；理論板數按葛根素峰計算應不低于7000。對照品溶液的制備 取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含10g的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml

19、，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各lOl，注入液相色譜儀，測定，即得。原劑型標準十味降糖顆粒每袋6g，規(guī)定每袋含葛根以葛根素(C21H2009)計，不得少于2.0mg。新標準十味降糖丸（濃縮丸）每袋6g，根據原劑型標準規(guī)定及三批中試含量測定數據確定每1g含葛根以葛根素(C21H2009)計，不得少于0.35mg。2.格列本脲的含量測定原標準收載了格列本脲的含量測定方法，經試驗，原方法峰形分離不好，格列本脲峰沒有回到基線，調整流動相為甲醇磷酸鹽(12：8)，結果峰形對稱，分離度好，

20、格列本脲峰能回到基線，陰性樣品無干擾，故采用修定過的方法作為含量測定方法。儀器與試劑高效液相色譜儀 xx xxxx 型高壓恒流泵xxxx紫外可見波長檢測器伊利特色譜數據工作站色譜柱 xxxxkromasil C18 5um 4.6×250mm柱號譜甲醇 天津四友磷酸、三乙胺為分析純標準曲線:精密稱取在105烘干至恒重的格列本脲對照品適量,加甲醇制成每1ml含308µg的溶液,作為對照品溶液。以308µg/ml的對照品溶液為母液，分別配制 154µg/ml、77µg/ml、38.5µg/ml、15.4µ

21、;g/ml、7.7µg/ml的對照品溶液。分別精密吸取上述各對照品溶液10µl,注入液相色譜儀,測定,計算，即得?；貧w曲線為Y(峰面積)17.0366X(濃度)3.1799 r0.99979 線性范圍為7.7154µg/ml，標準曲線近似過圓點,采用外標一點法定量。 供試品溶液制備方法的選擇1取本品，研細，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用加甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。2. 取本品，研細，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，用加甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，濾液作

22、為供試品溶液。同一樣品按上述兩種方法，每種方法制備三個供試品，分別取上述溶液各10l，注入液相色譜儀，測定，經比較三種方法測定得的含量基本一致，第一種方法重現性好，操作簡單，故選用第一種供試品溶液制備方法。精密度 同一樣品連續(xù)進樣測定5次，相對標準偏差為1.07%，小于3.0%。穩(wěn)定性 同一樣品，制備后在30分鐘、1小時、4小時、12小時、24小時后分別測定，相對標準偏差為1.51%，小于5.0%，表明樣品放置24小時內穩(wěn)定。重現性 同一樣品，取5份，各約1g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用加甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。取上述供試品溶

23、液各10µl，注入液相色譜儀，測定。相對標準偏差為1.63%，小于5.0%。加樣回收率 取已知含量的樣品5份(約1g)，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，各精密加入每1ml含38.5g的格列本脲對照品溶液5.0ml，蒸干，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用加甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。取上述供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，測定，平均回收率為99.81%。樣品測定 對三批中試產品，采用新制訂的含量測定方法測定，其結果如下?！竞繙y定】照高效液相色譜法(中國藥典20xx年版一部附錄 D)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為

24、填充劑：甲醇磷酸鹽(12：8)為流動相；檢測波長為300nm。理論板數按格列本脲峰計算應不低于5000。對照品溶液的制備 取格列本脲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含20g的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，即得。 測定法 分別精密吸取上述溶液各10l，注入液相色譜儀，測定，即得。原劑型標準十味降糖顆粒每袋6g，每袋相當于格列本脲1.5mg，規(guī)定每袋格列本脲應為1.2mg1.8mg，新標準十味降糖丸（濃縮丸）每袋6g，每袋相當于格列本脲1.5mg，根據原劑型標準規(guī)定及三批中試含量測定數據確定本品每1g含格列本脲應為0.2mg0.3mg?！竟δ苤髦?/p>