藥物分析_07常見各大類藥物的分析

1、一、藥物的鑒別試驗w 藥物的鑒別是根據藥物的分子結構、理化性質，采用物理、化學、物理化學或生物學方法，判斷藥物的真?zhèn)闻袛嗨幬锏恼鎮(zhèn)?。w 藥物鑒別項目性狀檢查性狀檢查鑒別試驗鑒別試驗藥物鑒別的內容w 性狀檢查檢查藥物特有的物理性質。 包括：外觀性狀，如物態(tài)、色、臭、味 物理常數，如相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數等。w 鑒別試驗通過化學反應或儀器分析方法來鑒別藥物的真?zhèn)巍ｈb別試驗分類 鑒別試驗 一般鑒別試驗 特殊鑒別試驗一般鑒別試驗是依據某一類藥物的化學結構或理化性質的特征，通過化學反應來鑒別藥物的真?zhèn)巍CCONONC OH5C2H5C2HH

2、巴比妥CCCONONC OH5C2HH苯巴比妥CCCONONC ONaCH2CHCH2CHCH3C3H7H司可巴比妥鈉一般鑒別試驗定義w 在藥物的鑒別試驗中，具有某一類官能團或者具有某一共同理化性質的藥物可以用相同或類似的方法來測定，也就是多種藥物用同一方法進行鑒別，這樣的鑒別試驗，稱為一般鑒別試驗。有機氟化物有機氟化物無機酸根無機酸根托烷生物堿類托烷生物堿類芳香第一胺芳香第一胺無機金屬鹽無機金屬鹽有機酸鹽有機酸鹽藥品藥品一般鑒別試驗項目 有機氟化物氟氟 康康 唑唑 【鑒別】【鑒別】 (1)(1)取本品，加乙醇制成每取本品，加乙醇制成每1ml1ml中含中含200g200g的溶液，照分光光度法的

3、溶液，照分光光度法( (附錄附錄 A) A)測定，在測定，在261nm 261nm 與與267nm267nm的波長處有最大吸收，在的波長處有最大吸收，在264nm264nm的波的波長處有最小吸收。長處有最小吸收。 (2)(2)本品的紅外光吸收圖譜應與對照品的圖譜一本品的紅外光吸收圖譜應與對照品的圖譜一致。致。 (3)(3)本品顯有機氟化物的鑒別反應本品顯有機氟化物的鑒別反應( (附錄附錄)。 有機氟化物 鑒別原理：有機氟化物經氧瓶燃燒法破壞，被堿溶液吸收成為無機氟化物，與茜素氟藍、硝酸亞鈰在pH4.3溶液中形成藍紫色絡合物。 有機氟化物鑒別方法：詳見P186-187有機氟有機氟氧瓶燃燒氧瓶燃燒

4、無機氟離子無機氟離子pH4.3 茜素氟藍茜素氟藍硝酸亞鈰硝酸亞鈰藍紫色絡合物藍紫色絡合物 丙二酰脲類（巴比妥類藥物）銀鹽鑒別法：取供試品適量，加碳酸鈉試液振搖后過濾，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，生成白色沉淀，振搖即溶解，再繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。銅鹽鑒別法：取供試品適量加吡啶溶液溶解后，加銅-吡啶試液，即顯紫色或生成紫色沉淀。 托烷生物堿類氫溴酸山莨菪堿氫溴酸山莨菪堿 【鑒別【鑒別】 (1) (1) 本品顯托烷生物堿類的鑒別反應本品顯托烷生物堿類的鑒別反應（附錄（附錄）。）。 (2) (2) 本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜（光本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜（光譜集譜集28

5、7 287 圖）一致。圖）一致。 (3) (3) 本品的水溶液顯溴化物的鑒別反應（附錄本品的水溶液顯溴化物的鑒別反應（附錄）。）。 托烷生物堿類托烷生物堿水解生成莨菪酸，經發(fā)煙硝酸加熱處理，轉變?yōu)槿趸苌?，再與氫氧化鉀的醇溶液作用，轉變成醌型產物而顯深紫色。 托烷生物堿類鑒別方法：P187生物堿生物堿水解水解莨菪酸莨菪酸發(fā)煙硝酸發(fā)煙硝酸 三硝基衍生物三硝基衍生物2-3滴滴 C2H5OH 固體固體KOH紫色的醌型產物紫色的醌型產物 芳香第一胺類 氨氨 苯苯 砜砜 【鑒別【鑒別】 (1) (1) 本品顯芳香第一胺類的鑒別反應本品顯芳香第一胺類的鑒別反應（附錄（附錄）。）。 (2) (2) 取本

6、品，加甲醇制成每取本品，加甲醇制成每1ml 1ml 中含中含5g5g的溶液，的溶液，照分光光度法（附錄照分光光度法（附錄 A A）測定，）測定， 在在261nm261nm與與296nm 296nm 的波長處有最大吸收。其吸收度分別為的波長處有最大吸收。其吸收度分別為0.350.350.380.38與與0.590.590.620.62。 芳香第一胺類原理：芳香第一胺與亞硝酸作用，生成重氮鹽，再與B-萘酚反應，生成橙黃色到猩紅色的偶氮化合物沉淀。鑒別方法：供試品供試品+ 稀鹽酸稀鹽酸 亞硝酸鈉亞硝酸鈉堿性堿性 - -萘酚試液萘酚試液橙黃色橙黃色到到猩紅色猩紅色 有機酸鹽a.三氯化鐵反應水楊酸的三氯

7、化鐵反應在中性或弱酸性條件下，水楊酸與試液生成配位化合物，在中性時呈紅色，弱酸性時呈紫色。COOHCOOOHOFeFe+ 4FeCl3 ( )2 3+ 12HCl6 有機酸鹽苯甲酸鹽的中性溶液，與三氯化鐵試液可生成堿式苯甲酸鐵鹽的赭色沉淀。 有機酸鹽b.酒石酸鹽的銀鏡反應取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀溶液數滴，水浴加熱，銀游離并附在試管內壁形成銀鏡。反應原理： 無機金屬鹽鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋇鹽、鋰鹽的焰色反應 無機金屬鹽顯色或沉淀反應 中國藥典收載的無機陽離子鹽的鑒別方法見P188-189.銨鹽的鑒別： 無機陰離子中國藥典附錄收載的無機陰離子鹽有氯化物、溴化物、碘化物、硫酸鹽

8、、硝酸鹽等等。氯化物的鑒別： 供試液+硝酸+硝酸銀白色 白色+氨試液沉淀溶解+硝酸白色原理： Cl- + Ag+ AgCl 乳白色 Ag+ + 2NH3 Ag(NH3 )2+ 沉淀溶解 無機陰離子鹽酸妥卡尼 【鑒別】(1)(1)取本品約取本品約50mg50mg，加水，加水4ml4ml溶解后，加溶解后，加鹽酸溶液鹽酸溶液(9100)1ml(9100)1ml、重氮對硝基苯胺試液、重氮對硝基苯胺試液2ml2ml、氫、氫 氧化鈉試液氧化鈉試液4ml4ml與正丁醇與正丁醇2ml2ml，振搖，靜置俟分層，正，振搖，靜置俟分層，正丁醇層顯紅色。丁醇層顯紅色。 (2)(2)本品的水溶液顯氯化物的鑒別反應本品的

9、水溶液顯氯化物的鑒別反應( (附錄附錄) 無機陰離子硫酸鹽的鑒別： 供試液+氯化鋇白色 白色+硝酸（鹽酸）沉淀不溶反應式： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色白色硝酸鹽的鑒別：棕色環(huán)法：取供試品溶液，加濃硫酸和硫酸亞鐵溶液，在濃硫酸和上層溶液的交界處出現棕色環(huán)。 3Fe2+ + NO3- + 4H+ 3Fe3+ + NO+4H2O Fe2+ + NO Fe(NO) 2+ 棕色 亞硝酰合鐵離子影響鑒別試驗的因素）溶液的濃度 被鑒別藥物的濃度）溶液的溫度）溶液的pH值 生成物穩(wěn)定和易于觀察）反應時間）干擾成分 專屬性更高的鑒別方法2. 一般雜質檢查 一般一般雜質是指在自然界分布較廣泛，在多

10、種雜質是指在自然界分布較廣泛，在多種藥物的生產和貯藏過程中容易引入的雜質，如酸、藥物的生產和貯藏過程中容易引入的雜質，如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、砷鹽、重金屬堿、水分、氯化物、硫酸鹽、砷鹽、重金屬等。等。w 藥物中雜質的檢查多數采用限量檢查，該檢查不要求測定雜質的含量，而只檢查其是否超過限量。(%) =100%雜質最大允許量雜質限量供試品量2. 一般雜質檢查 氯化物檢查法氯化物檢查法 原理：中國藥典是利用氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定標準氯化鈉溶液在相同的條件下生成的氯化銀渾濁液比較，濁度不得更大。 Cl-+Ag+AgCl 氯化物檢查法氯化物檢查法方法

11、：比濁法lgAgNO.33,CAHNOA產生稀取一定量供試品產生渾濁同上處理液取一定量標準la.CNB如A濁度比B小則合格？加入稀硝？加入稀硝酸的作用酸的作用加HNO 3 目的： A、AgCl 不溶于HNO3，可加速AgCl沉淀的產生； B、在HNO3中產生較好的乳化渾濁； C、避免弱酸銀鹽Ag2O，Ag3PO4，Ag2CO3沉淀的干擾。若供試品有色：若供試品有色： 可采用可采用內消色法內消色法，按中國藥典附錄規(guī)定的方法處理。，按中國藥典附錄規(guī)定的方法處理。供試品供試品+ AgNO3放置放置10min10min澄清溶液澄清溶液+ +標準標準NaClNaCl+ +水水對照溶液對照溶液供試品供試品

12、+ AgNO3+ +水水供試品溶液供試品溶液暗處放置暗處放置5min5min后比后比較較樣品的前處理氯離子的存在狀態(tài)w溶于水的藥物直接測定w不溶于水的藥物加水振搖，過濾，取濾液檢查；也可采用超聲，加熱等方法使Cl-溶解，取濾液或上清液檢查w有機氯有機破壞后測定 硫酸鹽檢查法原理：藥物中存在的微量硫酸鹽與氯化鋇在鹽酸酸性介質中生成硫酸鋇白色渾濁，與一定量標準硫酸鉀溶液在相同條件生成的渾濁比較，濁度不得更大。SO42-+Ba2+Ba SO4 方法：比濁法 依法處理依法處理A、供試品一定量、供試品一定量 產生產生BaSO4 的渾濁的渾濁 HCl，25% BaCl 2 同上同上B、取一定量、取一定量K

13、2SO4標準液標準液 同上同上 硫酸鹽檢查法注意事項注意事項 （1）加適量HCI，防止BaCO 3 ，Ba 3（PO 4 ）2 等 的生成。 （2）適宜比濁的濃度為0.10.5 mgSO4 2- /50 ml。 （3）供試液如需濾過，應先用鹽酸使成酸性的蒸餾水洗凈濾紙中硫酸鹽。 （4）有色供試品溶液的處理及其他注意事項與氯化物檢查法相同。 氟化物檢查有機氟有機氟氧瓶燃燒氧瓶燃燒無機氟離子無機氟離子pH4.3 茜素氟藍茜素氟藍硝酸亞鈰硝酸亞鈰藍紫色絡合物藍紫色絡合物 分光光度法，比較氟對照溶液和供試品溶液在610nm波長的吸光度。 鐵鹽檢查法原理：中國藥典采用硫氰酸銨法。鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫

14、氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子，再與一定量標準鐵溶液用同法處理后所呈的顏色比較，顏色不得更深。 Fe3+6SCN-Fe(SCN)63-（紅色）方法：供試液 vs 標準液注意： 1）加稀鹽酸防止鐵鹽水解； 2）加過硫酸銨 (NH4)2S2O8 氧化劑，氧化供試品中 Fe2+生成 Fe3+ 。 3）當供試液管與對照溶液管色調不一致，可分別移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。 重金屬檢查法 重金屬是指在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質，如銀、鉛、汞、銅、鉍、錫、鋅、鈷與鎳等。 鉛為重金屬的代表，以鉛的限量表示重金屬限度。 中國藥典（2005年版）收錄了四種

15、重金屬檢查方法。 重金屬檢查法（） 第一法第一法 硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法 原理 硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5 醋酸鹽緩沖液）條件下水解，產生硫化氫，與微量重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物均勻混懸液，與一定量標準鉛溶液經同法處理后所呈現顏色比較，顏色不得更深顏色不得更深。CH3CSNH2H20 CH3CONH2H2SH2S Pb2 PbS 2H 此法適用于易溶于水、稀酸和乙醇的藥物，為最常用的方法。pH值的影響 金屬離子與硫化氫的呈色受pH值影響較大。當pH3.0-3.5時，硫化鉛沉淀較完全。酸度增大，呈色顏色變淺，甚至不顯色。w 因此，供試品若用強酸溶解或處理后，在加入硫代乙酰胺試液前，

16、應先加氨水至溶液對酚酞指示劑顯中性，再加pH3.5醋酸鹽緩沖液調節(jié)溶液的酸度。注意事項：1. 本法適合的酸度為pH3.0-3.5。2. 供試品溶液有色：在對照管中加少量稀焦糖溶液（也可加其他無干擾的指示劑等），使兩管色調一致，如果外消色法不能消除干擾，可采用內消色法。3. 供試品含有微量Fe3+：會氧化H2S析出S，可加VitC 0.5-1.0g，使Fe3+ Fe2+，同時在對照管中加等量的VitC，再依法測定。 重金屬檢查法（） 第二法第二法 熾灼后的硫代乙酰胺法熾灼后的硫代乙酰胺法 適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及在水、稀酸及乙醇中難溶的有機藥物，如安乃近及鹽酸氟奮乃靜中重金屬的檢查。 原理：將供試

17、品熾灼破壞后 ，加硝酸加熱處理，使有機物分解，破壞完全后，再按第一法進行檢查。 依一法檢查氯化物殘渣置坩堝中樣品：緩沖液左右調節(jié)至、熾灼殘渣 mlS0 . 25 . 3pHpH7.0OHNHOHHClHNO6005002323依一法檢查對照：空坩堝緩沖液溶液）（標準、 ml0 .25 .3pHNOPbOHOHNHHClHNOSOH23223342操作方法： 重金屬檢查法（ ）第三法第三法 硫化鈉法硫化鈉法 適用于能溶解于堿性水溶液而難溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的藥物，如磺胺類、巴比妥類藥物等。 原理 在堿性介質中，以硫化鈉為顯色劑，使Pb2+ 生成PbS 微粒的混懸液，與一定標準鉛溶液經同法

18、處理后所呈顏色比較不得更深。 方法 比色法 重金屬檢查法（ ）第四法第四法 微孔濾膜法微孔濾膜法 適用于重金屬限量低的藥物（含25g重金屬）的檢查。 原理 使重金屬生成的硫化物富集于微孔濾膜上形成色斑，比較供試品和一定量的標準鉛溶液同法處理后產生的色斑深淺，確定重金屬是否超過限量 。微孔濾膜法檢查重金屬含量裝置圖 砷鹽檢查法 砷鹽多由藥物生產過程中所使用的無機試劑引入，為毒性雜質，必須嚴格控制其限量。砷中毒事件砷中毒事件 1900年英國曼徹斯特因啤酒中添加含砷的糖，造成6000人中毒和71人死亡。 1955-1956年日本發(fā)生的森永奶粉（含As2O3 ）中毒事件，12100多人中毒，約130人

19、死亡。 2009年報道的孟加拉國的砷污染被WHO稱為“歷史上一國人口遭遇到的最大的群體中毒事件”，有兩百萬人集體中毒，且已造成多人喪命。 砷鹽檢查法 ChP采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀Ag(DDC)法檢查藥物中微量的砷鹽。 (一）古蔡（Gutzeit）法 原理 金屬鋅與酸作用產生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產生黃色至棕色的砷斑黃色至棕色的砷斑，與一定量標準砷溶液所生成的砷斑比較，顏色不得更深。涉及的反應：As3+ + 3Zn + 3H+ 3Zn+ +AsH3 AsO33- + 3Zn + 9H+ 3Zn+ + 3H2O + AsH3 AsH3 +

20、 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3 (黃色黃色) 2As(HgBr)3 + AsH3 3 AsH(HgBr)2 (棕色棕色) As(HgBr)3 + AsH3 3HBr + As2Hg3 (棕黑色棕黑色) 測定裝置與試劑試劑：標準砷溶液試劑：標準砷溶液 碘化鉀試液碘化鉀試液 酸性氯化亞錫試液酸性氯化亞錫試液 鋅粒鋅粒 溴化汞試紙溴化汞試紙供試品溶液經同法處理后，生供試品溶液經同法處理后，生成的砷斑與標準砷斑比較，不成的砷斑與標準砷斑比較，不得更深得更深。注意：KI-SnClKI-SnCl2 2：還原作用，將：還原作用，將AsAs5+5+還原成還原成AsAs3+3+； 去極化作用。

21、去極化作用。醋酸鉛棉花醋酸鉛棉花的作用是消除鋅粒及供試品中少量的作用是消除鋅粒及供試品中少量硫化物的干擾。硫化物的干擾。S S2-2-在酸性條件下產生在酸性條件下產生H H2 2S S，與溴化汞作用，與溴化汞作用，生成生成HgSHgS，干擾，干擾測定。測定。 砷鹽檢查法（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法 簡稱Ag (DDC)法 本法為ChP和USP收載的方法。不僅可用于砷鹽的限量檢查，也可用作微量砷鹽的含量測定。 原理 金屬鋅與酸作用，產生新生態(tài)的氫，與微量砷鹽反應，生成具有揮發(fā)性的砷化氫；砷化氫遇二乙基二硫代氨基甲酸銀使其還原產生紅色的膠態(tài)銀，用目視比色法或在510nm 波長處測定吸收度，再以一

22、定量標準砷溶液用同法處理后得到的有色溶液進行比較。注意事項：本反應可逆，可加入有機堿使與HDDC結合，有利于反應向右進行完全。常用有機堿：-吡啶（USP）-三乙胺-氯仿溶液（ChP）3332AsHAsOHHClZn3HDDC6Ag(DDCAs 6Ag(DDC)AsH33紅色）檢砷裝置圖藥典收錄的其他雜質檢查項目w 干燥失重檢查w 易碳化物檢查w 溶液顏色檢查w 熾灼殘渣檢查w 殘留溶劑測定 干燥失重檢查 干燥失重系指藥品在規(guī)定的條件下，經干燥后所減少的干燥失重系指藥品在規(guī)定的條件下，經干燥后所減少的量，以百分率表示。干燥失重主要檢查藥品中的量，以百分率表示。干燥失重主要檢查藥品中的水分水分，也

23、包，也包括其它括其它易揮發(fā)性成分易揮發(fā)性成分。w常壓恒溫干燥法 本法適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。w干燥劑干燥法 本法適用于受熱分解、或易于揮發(fā)的供試品。 干燥劑:（1）硅膠 (使用方便, 價廉, 可以反復使用） （2）硫酸（吸水次于硅膠之，較便宜） （3）五氧化二磷（吸水力強，但價高）w減壓干燥法 本法適用于熔點低、受熱不穩(wěn)定或難驅除水分的藥物。 易碳化物檢查法 易碳化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸易碳化或易氧化而呈色的微量有機雜質。這類雜質多數結構未知，用硫酸呈色的方法可以簡便地控制他們的總量。w 方法：目視比色法甲：規(guī)定對照溶液乙：硫酸溶液(95%)w 判斷：乙管中所顯顏色不得較甲管更深。+供試品

24、，振搖對比觀察 溶液顏色檢查法w 有色雜質可能在藥物的生產過程中引入，也可能由貯藏過程產生。對溶液顏色進行檢查，可控制藥物中有色雜質的含量。w中國藥典采用的檢查方法有三種。 （一）目視比色法 （二）分光光度法 （三）色差計法標準比色液：重鉻酸鉀氯化鈷硫酸銅按一定的比例配成不同色調的標準比色液通過色差計直接測定溶液的透射三刺激值，通過比較色差值來判斷。 熾灼殘渣檢查法 中國藥典和美國藥典對熾灼殘渣（residue on ignition ）的定義：有機藥物經碳化或揮發(fā)性無機藥物加熱分解后，高溫熾灼，所產生的非揮發(fā)性無機雜質的硫酸鹽。 英國藥典稱其為硫酸灰分（sulphated ash）。 熾灼殘

25、渣檢查用于控制有機藥物和揮發(fā)性無機藥物中存在的非揮發(fā)性無機雜質。 方法 重量分析法，限量一般控制在01-0.2%，取樣量為1-2g。殘留溶劑測定法 藥品中的殘留溶劑是指在合成原料藥，輔料或制劑生產的過程中使用的，但在工藝中未能完全除去的有機溶劑。w 主要檢查藥物在生產過程中引入的有害的有機溶劑(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等）。殘留溶劑測定法 中國藥典（2005年版）規(guī)定殘留溶劑的檢查方法為GC，可采用填充柱，也可采用毛細管柱。檢測器通常使用火焰離子化檢測器（FID），對含鹵素的殘留溶劑如三氯甲烷等，采用ECD檢測器。色譜系統(tǒng)性試驗的要求： (1) 填充柱N1000，毛細管柱N5000；