2013實驗11 植物的組織培養(yǎng)

1、2021/6/161實驗實驗11 植物的組織培養(yǎng)植物的組織培養(yǎng)2021/6/162大多綠色開花植物靠種子繁殖（有性繁殖），大多綠色開花植物靠種子繁殖（有性繁殖），不用種子繁殖（不用種子繁殖（無性繁殖無性繁殖）的方法有：）的方法有： 組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)營養(yǎng)繁殖營養(yǎng)繁殖扦插扦插嫁接嫁接壓條壓條 無性繁殖無性繁殖2021/6/163組織培養(yǎng)就是取一部組織培養(yǎng)就是取一部分植物組織（分植物組織（外植體外植體），），如葉、芽、莖、根、花瓣如葉、芽、莖、根、花瓣或花粉等，在或花粉等，在無菌無菌條件下條件下接種在三角瓶中的接種在三角瓶中的瓊脂培瓊脂培養(yǎng)基養(yǎng)基上，給予一定的上，給予一定的溫度溫度和光照和光照，使之

2、產(chǎn)生，使之產(chǎn)生愈傷組愈傷組織織，或進而，或進而生根發(fā)芽生根發(fā)芽。一、組織培養(yǎng)概述一、組織培養(yǎng)概述1.概念概念2021/6/1642、植物組織培養(yǎng)的原理是什么？、植物組織培養(yǎng)的原理是什么？ 植物細胞具有植物細胞具有全能性全能性，即生物體的細胞，具，即生物體的細胞，具有使后代細胞形成完整個體的能力。有使后代細胞形成完整個體的能力。3.植物組織培養(yǎng)的基本過程植物組織培養(yǎng)的基本過程:離體離體的植物的植物器官、組織、器官、組織、細胞細胞脫分化脫分化愈愈傷傷組組織織再分化再分化根根芽芽植植物物體體生長發(fā)育生長發(fā)育2021/6/165植物組織培養(yǎng)過程示意圖植物組織培養(yǎng)過程示意圖 煙草植株煙草植株根細胞根細胞

3、培養(yǎng)培養(yǎng)形成愈形成愈傷組織傷組織發(fā)育成發(fā)育成幼胚幼胚長成長成幼苗幼苗成熟植株成熟植株2021/6/1664.植物組織培養(yǎng)條件植物組織培養(yǎng)條件: 含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、空氣、無菌環(huán)境、適合的空氣、無菌環(huán)境、適合的PH、適時光照等。、適時光照等。細胞分裂素多，生長素少細胞分裂素多，生長素少誘導芽的生成誘導芽的生成細胞分裂素少，生長素多細胞分裂素少，生長素多誘導根的生成誘導根的生成細胞分裂素適中，生長素少細胞分裂素適中，生長素少愈傷組織只生長不分化愈傷組織只生長不分化細胞分裂素生長素比例合適細胞分裂素生長素比例合適誘導根芽的分化誘導根芽的分化20

4、21/6/167二、實驗二、實驗培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制外植體的選取外植體的選取消毒接種消毒接種培養(yǎng)培養(yǎng)移栽和栽培等。移栽和栽培等。2021/6/1681、實驗材料、實驗材料（1）MS培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：大量元素：大量元素：C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg微量元素：微量元素：Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、I、Co有機成分：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、有機成分：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖蔗糖等等（3）發(fā)）發(fā)芽芽培養(yǎng)基：培養(yǎng)基： MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基+BA+NAA+瓊脂瓊脂+蒸餾水蒸餾水（2）萘乙酸）萘乙酸NAA、芐基腺嘌呤、芐基腺嘌呤BA（4）生）生根根培養(yǎng)基：培養(yǎng)基： MS培養(yǎng)基培養(yǎng)

5、基+NAA+瓊脂瓊脂+蒸餾水蒸餾水2021/6/1692、步驟步驟1.取外植體取外植體超凈臺上將超凈臺上將無菌無菌幼苗幼苗(無菌水沖洗無菌水沖洗)切段，每段切段，每段至少至少1張葉片張葉片2.生芽培養(yǎng)生芽培養(yǎng)生芽培養(yǎng)基中，放入生芽培養(yǎng)基中，放入1-3段切段（莖一部分插段切段（莖一部分插入培養(yǎng)基），蓋上封口膜。日光燈下保持入培養(yǎng)基），蓋上封口膜。日光燈下保持1825的溫度培養(yǎng)，每天光照不少于的溫度培養(yǎng)，每天光照不少于14.5h。3.生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)23周后，將叢狀苗在無菌條件下轉(zhuǎn)入生根周后，將叢狀苗在無菌條件下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)。2021/6/

6、16105.定植定植將苗轉(zhuǎn)移到土中培養(yǎng)。將苗轉(zhuǎn)移到土中培養(yǎng)。4.適應(yīng)鍛煉適應(yīng)鍛煉將苗轉(zhuǎn)移至草炭土或蛭石中繼續(xù)生長，用玻將苗轉(zhuǎn)移至草炭土或蛭石中繼續(xù)生長，用玻璃罩或塑料布保持璃罩或塑料布保持80以上的濕度，以上的濕度，23天天后打開減低濕度進行鍛煉，直到將罩全部打后打開減低濕度進行鍛煉，直到將罩全部打開處于自然濕度下為止。開處于自然濕度下為止。2021/6/1611幼苗幼苗外植體外植體叢芽叢芽生根生根鍛苗鍛苗消毒消毒 接種接種愈傷愈傷組織組織胚狀體胚狀體定植定植 植株植株生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)生芽培養(yǎng)生芽培養(yǎng)2021/6/16121.不同植物、不同組織的生根和生芽是否都可使不同植物、不同組織的生根和生

7、芽是否都可使用與本實驗相同的生長素和細胞分裂素濃度？用與本實驗相同的生長素和細胞分裂素濃度？2.本實驗用人工合成的激素，而不用植物中存在本實驗用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，為什么？的天然激素，為什么？不相同不相同天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，所以使用時天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，所以使用時間短，而人工合成的，沒有分解酶，作用時間長，間短，而人工合成的，沒有分解酶，作用時間長，效果顯著。效果顯著。課后題課后題2021/6/1613微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)，培養(yǎng)基則需提供大量

8、無機營養(yǎng)，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。量元素兩大類。4. 同同LB培養(yǎng)基相比，培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？顯的不同？3.如果在自然界取植物樣本進行組織培養(yǎng)，你認為如果在自然界取植物樣本進行組織培養(yǎng)，你認為應(yīng)采取什么措施保證樣本不被污染應(yīng)采取什么措施保證樣本不被污染?（1）操作環(huán)境清潔（）操作環(huán)境清潔（2）植物樣本的潔凈）植物樣本的潔凈（3）操作敏捷迅速）操作敏捷迅速2021/6/16142021/6/1615 脫分化：脫分化：將來自已分化組織的已停止分裂的細胞從將來自已分化組織的已停止分

9、裂的細胞從植物體部分的抑制性影響下解脫出來，恢復細胞的植物體部分的抑制性影響下解脫出來，恢復細胞的分裂活性。分裂活性。 再分化再分化:經(jīng)脫分化的組織或細胞在一定的培養(yǎng)條件下經(jīng)脫分化的組織或細胞在一定的培養(yǎng)條件下可有轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同細胞類型的能力?？捎修D(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同細胞類型的能力。愈傷組織愈傷組織2021/6/16161、外植體帶菌、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔、環(huán)境不清潔污染途徑污染途徑2021/6/1617污染的預防措施污染的預防措施（一）防止外植體帶菌（一）防止外植體帶菌（二）保證培養(yǎng)基及接種器具徹底滅菌

10、（二）保證培養(yǎng)基及接種器具徹底滅菌（三）操作人員嚴格遵守無菌操作規(guī)程（三）操作人員嚴格遵守無菌操作規(guī)程（四）保證接種與培養(yǎng)環(huán)境清潔（四）保證接種與培養(yǎng)環(huán)境清潔2021/6/16182021/6/1619思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？2021/6/16201、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈、接種的無菌操作（酒精、酒精燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌無菌環(huán)境的？環(huán)境的？2021/6/1621