黃曲霉毒素B1（AFB1）ELISA檢測試劑盒說明書

1、.黃曲霉毒素B1（AFB1）ELISA檢測試劑盒說明書一、概要黃曲霉毒素是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產(chǎn)物，它們具有很強(qiáng)的致癌性，主要存在于谷物、堅果、棉籽以及一些和人類血液，動物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。其中黃曲霉毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染頻率均居于首位。而使用黃曲霉毒素B1 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素B1殘留。參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.22-2003。黃曲霉毒素B1檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代真菌毒素檢測產(chǎn)品，操作時間短于60min，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。二、試驗原理黃曲霉毒素B1檢測試劑盒采用間接競爭ELI

2、SA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原，樣本中黃曲霉毒素B1和此抗原競爭黃曲霉毒素B1抗體，同時黃曲霉毒素B1抗體與酶標(biāo)二抗相結(jié)合，經(jīng)TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的黃曲霉毒素B1成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中黃曲霉毒素B1的含量。三、適用范圍黃曲霉毒素B1檢測試劑盒可定性、定量檢測玉米、大米、麥類、豆類、花生、花生醬、飼料、食用油等樣本中的黃曲霉毒素B1。四、測定前應(yīng)須知：1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（2025）。2、使用之后立即將所有試劑放回28。3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作

3、是ELISA測定程序中的要點。4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。5、黃曲霉毒素B1可致癌，應(yīng)戴手套操作。五、操作步驟：1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（2025）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于28。不要冷凍。3、洗滌工作液在使用前也需回溫。4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50ml到對應(yīng)的微孔中，加入AFB1酶標(biāo)物50ml/孔，再加入AFB1抗試劑

4、50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應(yīng)30min。6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300ml/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。7、顯色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應(yīng)1520min。8、測定：加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進(jìn)行判定)。六、檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度試劑

5、盒靈敏度：0.1ppb回收率：花生、玉米等谷物：9015%曲奇餅干：9015%蜂蜜蛋糕：8515%飼料：8515%食用油：9015%醬油：8515%醋：9015%葡萄酒：9015%干黃醬：80%10%火鍋底料：95%10%精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%七、注意事項1、室溫低于20或試劑及樣本沒有回到室溫（2025）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。3、每加一種試劑前需將其搖勻。4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。6、儲存條件 保存試劑盒于28，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。7、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為1520min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到30min（或更長）。反之，則減短反應(yīng)時間。9、濃縮洗滌液如有結(jié)晶屬正?，F(xiàn)象