梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測課件解析PPT幻燈片課件

1、梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷1病原體為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(Treponema pallidum subspecies pallidum) 蒼白亞種 梅毒 蒼白螺旋體 地方亞種 地方性梅毒 極細(xì)亞種 雅司病密螺旋體屬 品他螺旋體 品他病2梅毒螺旋體的生物學(xué)特性1、直徑、直徑 0.100.15m，有，有814個(gè)致密而規(guī)則的個(gè)致密而規(guī)則的 小螺旋，兩端尖直。小螺旋，兩端尖直。2、原生質(zhì)圓柱體上緊繞著、原生質(zhì)圓柱體上緊繞著34根周漿鞭毛，故運(yùn)根周漿鞭毛，故運(yùn) 動活躍，運(yùn)動方式多樣。動活躍，運(yùn)動方式多樣。3、G-，但不易著色。，但不易著色。Fantana鍍銀染色呈棕褐色。鍍銀染色呈棕褐

2、色。4、在無活細(xì)胞的人工培養(yǎng)基中難培養(yǎng)，生長慢。、在無活細(xì)胞的人工培養(yǎng)基中難培養(yǎng)，生長慢。5、抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感；對青霉、抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感；對青霉 素、四環(huán)素、紅霉素等抗生素敏感。在干燥條件下不易素、四環(huán)素、紅霉素等抗生素敏感。在干燥條件下不易生存。肥皂水和一般消毒劑以及加溫生存。肥皂水和一般消毒劑以及加溫42以上均極易將其以上均極易將其殺滅。殺滅。3梅毒螺旋體4傳播途徑 性接觸是主要的傳染途徑 未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性 隨著病期的延長，傳染性越來越小 到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性母嬰傳播 在妊娠7周時(shí)，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療

3、者，雖已無性傳播（病期2年），但妊娠時(shí)仍可傳染給胎兒病期越長，傳染性越小;輸血傳染間接傳播：日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑（接觸部位附有梅毒螺旋體） 。5梅毒的分期6梅毒的診斷梅毒的診斷早期梅毒（一期、二期和早期隱性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隱性梅毒）必須依靠病史、癥狀及實(shí)驗(yàn)檢查進(jìn)行綜合分析 梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果對診斷有決定性意義7常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測方法病原學(xué)檢測病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測血清學(xué)檢測8病原學(xué)檢查取材方法一期、二期梅毒時(shí)，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液暗視野顯微鏡、鍍銀染色法和直接熒光法在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒

4、螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動方式進(jìn)行檢測。白色發(fā)光，螺旋整白色發(fā)光，螺旋整齊，運(yùn)動規(guī)律（齊，運(yùn)動規(guī)律（旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行運(yùn)運(yùn)動）動）9病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。 螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。 如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。10梅毒血清學(xué)檢測方法梅毒血清學(xué)檢測方法11梅毒血清學(xué)檢測分類梅毒血清學(xué)檢測分類1. 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （非特異性梅毒抗體）2. 梅毒螺旋體抗原

5、血清學(xué)試驗(yàn) （特異性梅毒抗體）12非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理原理（抗心磷脂抗體）：人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放出來的一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。主要是IgM和IgG混合抗體?？贵w產(chǎn)生時(shí)間 感染3周-4周，硬下疳出現(xiàn)1周-2周一般在感染后57周（或硬下疳出現(xiàn)后23周）產(chǎn)生。 抗體作用無保護(hù)作用，治療監(jiān)測。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。13原理和方法反應(yīng)原理反應(yīng)原理抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見抗原基本成分抗原基本成分心磷脂、卵磷脂和膽固醇方法包括：方

6、法包括：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)不加熱血清反應(yīng)素(USR) 甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)等。14四種非特異性試驗(yàn)方法比較四種非特異性試驗(yàn)方法比較VDRLVDRLUSRUSRRPRRPRTRUSTTRUST抗原成分抗原成分心磷脂、卵磷心磷脂、卵磷脂、脂、 膽固醇膽固醇同前同前+EDTA+EDTA+氯氯化膽堿化膽堿同前同前+EDTA+EDTA+氯氯化膽堿化膽堿+ +活性活性炭炭同前同前+EDTA+EDTA+氯化膽堿氯化膽堿+ +甲苯胺紅甲苯胺紅抗原穩(wěn)定性抗原穩(wěn)定性不穩(wěn)定不穩(wěn)定,1,1天天穩(wěn)定穩(wěn)定4 4 8 8 保存保存1212個(gè)月個(gè)月穩(wěn)定穩(wěn)定4 4

7、 8 8 保存保存1212個(gè)月個(gè)月穩(wěn)定穩(wěn)定4 4 8 8 保存保存1212個(gè)月個(gè)月血清試驗(yàn)前處理血清試驗(yàn)前處理需滅活需滅活不需滅活不需滅活不需滅活不需滅活不需滅活不需滅活反應(yīng)板及結(jié)果反應(yīng)板及結(jié)果判斷判斷玻片，肉眼或玻片，肉眼或顯微鏡顯微鏡玻片，肉眼或玻片，肉眼或顯微鏡顯微鏡紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼注釋注釋唯一用于檢查腦唯一用于檢查腦脊液的試驗(yàn)，診脊液的試驗(yàn)，診斷神經(jīng)梅毒斷神經(jīng)梅毒結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷一期敏感性一期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）74%-87%74%-87%77%-88%77%-88%77%-99%77%-99%77%-99%77

8、%-99%二期敏感性二期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）100%100%100%100%100%100%100%100%晚期敏感性晚期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）98%98%99%99%98%98%99%99%15RPR/TRUST檢測流程檢測流程試驗(yàn)前期準(zhǔn)備RPR儀儀(水平旋轉(zhuǎn)儀器水平旋轉(zhuǎn)儀器) 必須滴！必須滴！試劑 50l移液器、吸頭 記號筆、廢物缸 工作服 一次性手套、口罩、帽子 生物安全柜16梅毒自動旋轉(zhuǎn)儀梅毒自動旋轉(zhuǎn)儀17測速:100轉(zhuǎn)/MIN （2轉(zhuǎn)）18檢測流程（定性）加樣：加樣：吸取50l血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)。 加抗原加抗原：將抗原輕輕搖勻，用試劑盒提

9、供的針頭加1滴抗原。 反應(yīng)反應(yīng)：將卡片置梅毒自動旋轉(zhuǎn)儀8分鐘立即在亮光下觀察結(jié)果。19檢測流程（定量）稀釋液準(zhǔn)備：稀釋液準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50l生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。 加樣加樣：吸取50l血清(漿)與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布滿整個(gè)圈內(nèi)。 重復(fù)定性試驗(yàn)后兩步。重復(fù)定性試驗(yàn)后兩步。20凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級：3+4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的紅色絮狀物，液體清亮。2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到大的紅色絮狀物，液體較清亮。1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的紅色絮狀物，液體渾濁。：圓圈內(nèi)僅見紅色集中于中央一點(diǎn)或均勻分散。21RPR定量試驗(yàn)定量試驗(yàn)中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和

10、3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性2223臨床意義早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后3個(gè)月，VDRL試驗(yàn)抗體滴度下降2個(gè)稀釋度，6個(gè)月下降4個(gè)稀釋度。 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。24假陽性問題假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性技術(shù)性假陽性技術(shù)性假陽性由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯(cuò)誤所造成。生物學(xué)假陽性生物學(xué)假陽

11、性是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性25急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病風(fēng)疹風(fēng)疹水痘水痘傳染性單核細(xì)胞增多癥傳染性單核細(xì)胞增多癥傳染性肝炎傳染性肝炎上呼吸道感染上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎病毒性肺炎牛痘疹牛痘疹26慢性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡 自身免疫性溶血性貧血自身免疫性溶血性貧血盤狀紅斑狼瘡盤狀紅斑狼瘡 結(jié)節(jié)性多動脈炎結(jié)節(jié)性多動脈炎 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 橋本氏甲狀腺炎橋本氏甲狀腺炎風(fēng)濕性心臟病風(fēng)濕性心臟病干燥綜合征干燥綜合征毒品癮者毒品癮者 慢性腎炎慢性腎炎肝硬化肝硬化老年老年 麻風(fēng)麻風(fēng) (是唯一產(chǎn)生慢是唯一產(chǎn)

12、生慢性生物學(xué)假陽性的感染性生物學(xué)假陽性的感染性性 疾病疾病)27妊娠的假陽性反應(yīng)妊娠的假陽性反應(yīng)這是一種生理情況下的生物學(xué)假陽性這是一種生理情況下的生物學(xué)假陽性 假陽性發(fā)生率較低有報(bào)告為假陽性發(fā)生率較低有報(bào)告為0.4%，滴度低。，滴度低。28假陽性問題梅毒假陽性反應(yīng)的處理梅毒假陽性反應(yīng)的處理 技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯(cuò)誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗(yàn)即可除外。 對急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做TPHA（TPPA）等試驗(yàn)進(jìn)行排除。29前帶現(xiàn)象原理原理指二期梅毒患者非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果。處理處理將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)。30血

13、清固定耐血清性（血清固定）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時(shí)期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。31梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)32試驗(yàn)原理試驗(yàn)原理檢測血中特異性抗梅毒螺旋體特異蛋白為抗原的抗體（ IgG 和IgM ）。特異性IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測出。33實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS） 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋體蛋

14、白印跡試驗(yàn)（WB）34TPPA/TPHA原理原理TPPA試驗(yàn)原理與TPHA試驗(yàn)基本相同TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒TPHA試驗(yàn)中梅毒螺旋體致敏羊紅細(xì)胞特點(diǎn)梅毒螺旋體(Nichols株)全抗原35操作步驟1. 試劑準(zhǔn)備：試驗(yàn)前將試劑和待檢標(biāo)本恢復(fù)到室溫。 2. 加稀釋液：每份樣本做4孔，加標(biāo)本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100微升，第24孔各25微升。3. 樣本稀釋：取血清25微升加至第1孔，混勻后取25微升至第2孔，混勻后取25微升至第3孔，混勻后取25微升至第4孔，混勻后棄去25微升。4. 加對照液：第3孔加未致敏顆粒25微升，第4孔加致敏顆粒25微升。5. 混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30秒。6.反應(yīng)：置有蓋濕盒，孵育2 h，或放4冰箱過夜觀察結(jié)果。36結(jié)果判斷1.觀察加未致敏顆粒的第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗(yàn)。 2. 觀察凝集反應(yīng)強(qiáng)度：分級如下。 4+：顆粒光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊。 3+： 顆粒光滑覆蓋大部分孔底。 2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)。 1+： 顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明