T線不均勻,劃膜不均勻,解決方法poctNC膜

1、關(guān)于包被T線在NC膜上層析出來的條帶不均勻，要如何解決?上下線解決方案1、上下線的主要原因序號(hào)主要分類主要原因可信度影響度1包被抗原、抗體氨基酸片段結(jié)合力過強(qiáng)r更可靠:最主要2包被NC膜NC膜包被結(jié)合力過強(qiáng)特殊次要3包被的工藝與體系1、包被液緩沖體系2、包被濃度參數(shù)3、包被干燥參數(shù)序號(hào)大致類別如何使上下線嚴(yán)重如何使上下線盡量避免1包被液緩沖體系包被液緩沖體系使抗體抗原與NC 膜反應(yīng)過強(qiáng)（包被不均勻）、或者 過弱（滑線現(xiàn)象）適中反應(yīng)包被體系2包被濃度參數(shù)濃度過高濃度適中3包被干燥參數(shù)干燥溫度與時(shí)間不徹底，造成滑線 現(xiàn)象建議不同的項(xiàng)目做溫度與時(shí)間 包被梯度實(shí)驗(yàn)，確定最佳工藝總結(jié)上表的信息可以得到下

2、面的綜合性表格:分類主要分類序號(hào)可信度影響度備注1包被原料部分r 1包被抗原、抗體兩者之間的結(jié)合能力、 效率過強(qiáng)2包被NC膜2包被的工藝1包被濃度設(shè)計(jì)包被濃度過高r 2包被寬度設(shè)計(jì)包被寬度過高3包被溫度不詳，建議自測(cè)本人未做進(jìn)一 步深入研究！4包被濕度不詳，建議自測(cè)本人未做進(jìn)一 步深入研究！r 5干燥溫度達(dá)到徹底的干燥，即包被 NC 膜與包被原料完全結(jié) 合，不再出現(xiàn)后期變強(qiáng)的 現(xiàn)象后面的一些章 節(jié)我再細(xì)說6干燥濕度7干燥時(shí)間8包被機(jī)器噴膜與滑膜我不知道。自己 驗(yàn)證一下3包被液體系1JK包被液系統(tǒng) 緩沖液體系1、緩沖液種類2、緩沖液離子強(qiáng)度3、緩沖液PH2JK外鹽系統(tǒng)糾正體1、外鹽種類系2、外鹽

3、離子強(qiáng)度r 3JK保護(hù)與糾正系統(tǒng)1、蔗糖/海藻糖4JK去穩(wěn)定性系統(tǒng) （共沉劑、變性劑）1、甲醇等蛋白變性劑暫時(shí)不建議 使用5JK表活強(qiáng)化系統(tǒng)1、種類：SDSTX-100T-20未做進(jìn)一步 驗(yàn)證2、添加比例:看項(xiàng)目6JK包被NC膜調(diào)線 系統(tǒng)1、調(diào)線系統(tǒng)種類:如BSA, 水解酪蛋白鈉等2、添加比例r看項(xiàng)目我個(gè)人實(shí)事求是的說啊，我藍(lán)色劃線的地方是我大致可以想到的影響方面，其 中有一些我自己也沒有嘗試過，但是我先大概給大家一個(gè)框架，許多問題需要 你們自己再進(jìn)一步的用自己的雙手去驗(yàn)證！那么我們上面的表格中去掉，我們暫不考慮的參數(shù)與變量，得到以下表格:分類主要分類序號(hào)可信度影響度備注1包被原料部分1包被抗

4、原、抗體兩者之間的結(jié)合能力、 效率過強(qiáng)調(diào)整部分2包被NC膜2包被的工藝1包被濃度設(shè)計(jì)包被濃度過高調(diào)整部分2包被寬度設(shè)計(jì)包被寬度過高3包被溫度+濕度參考37 45相對(duì)濕度可能有錯(cuò)5干燥溫度+時(shí)間參考50 ,3個(gè)小時(shí)4 -IV.參考6干燥濕度30%f對(duì)濕度7包被機(jī)器噴膜與滑膜說明一下3包被液體系1JK包被液系統(tǒng) 緩沖液體系1、緩沖液種類調(diào)整部分2、緩沖液離子強(qiáng)度3、緩沖液PH2JK外鹽系統(tǒng)糾正體 系1、外鹽種類調(diào)整部分2、外鹽離子強(qiáng)度3JK保護(hù)與糾正系統(tǒng)1、蔗糖/海藻糖參考0.5%6JK包被NC膜調(diào)線 系統(tǒng)1、調(diào)線系統(tǒng)種類:如BSA, 水解酪蛋白鈉等調(diào)整部分2、添加比例好，以上就是我們講解這個(gè)解決

5、 T線不均勻的提綱，我們一個(gè)個(gè)講一下，提供 一個(gè)思路，不見得解決問題，希望起到拋磚引玉的作用。2、包被原料部分2.1、 其實(shí)，這個(gè)是比較重要的一個(gè)部分，一般的情況下：NC膜選擇粒徑比較大 一些的NC膜，可以緩解，2.2、同時(shí)選擇抗體的時(shí)候，如果包被抗體是多克隆抗體，該現(xiàn)象也會(huì)被緩解， 因?yàn)槎嗫寺】贵w與NC膜的結(jié)合表位相比單克隆要多一些，同時(shí)，即使同是單克 隆抗體，不同廠家也是有很大區(qū)別的。2.3、但是這里注意一個(gè)問題，這個(gè)解決方案，是在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)起始階段要考慮的， 這種更換是一種很大的改動(dòng)了，另外很多其他的性能均會(huì)被影響。2.4、希望大家特別注意！3、包被的工藝3.1、首先我們確定包被溫度+濕度

6、參考37 45相對(duì)濕度干燥溫度+時(shí)間參考50 ,3個(gè)小時(shí)干燥濕度30%f對(duì)濕度3.2、包被濃度+寬度設(shè)計(jì)3.2.1、 當(dāng)你選中了可以滿足一個(gè)項(xiàng)目的主要性能指標(biāo)的NC膜、包被抗體以后，剩下的問題是要把他們以一個(gè)合適的濃度與寬度進(jìn)行包被，而每個(gè)NC膜對(duì)抗體有特定的抗體載荷量，因此不建議過度包被，3.2.2、以我個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)，低抗體濃度，適當(dāng)提高包被寬度可以緩解這個(gè)現(xiàn)象， 但是要配合包被液體系。3.2.3、但注意，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)的綜合性指標(biāo)有所影響，還需要針對(duì)項(xiàng)目具體調(diào)整， 這個(gè)也是提供一個(gè)思路。3.3、包被機(jī)器：我在這個(gè)方面最沒有話語權(quán)了，因?yàn)檫@個(gè)我沒有做過，但是聽人說噴膜與滑膜最后對(duì)于上下線會(huì)有影響，具

7、體我就不知道了，有機(jī)會(huì)與條件的人可以試一下。4、包被液體系這個(gè)是比較重要的，我給幾個(gè)配方你們?cè)囈幌?，看看手否可以緩解把?、NC膜：賽多利斯CN95包被液體系01JK包被液系統(tǒng)1、緩沖液種類PB-參照緩沖液體系2、緩沖液離子強(qiáng)度10mM3、緩沖液PH7.42JK外鹽系統(tǒng)糾正 體系1外鹽種類NACL2、外鹽離子強(qiáng)度0.9%3JK保護(hù)與糾正系統(tǒng)1蔗糖/海藻糖0.5%包被液體系11JK包被液系統(tǒng) 緩沖液體系1、緩沖液種類PB2、緩沖液離子強(qiáng)度10mM3、緩沖液PH7.42JK外鹽系統(tǒng)糾正 體系1、外鹽種類NACL2、外鹽離子強(qiáng)度1.8%3JK保護(hù)與糾正系統(tǒng)1、蔗糖0.5%包被液體系21JK包被液系統(tǒng) 緩沖液體系1、緩沖液種類PB2、緩沖液離子強(qiáng)度10mM3、緩沖液PH7.42JK外鹽系統(tǒng)糾正 體系1、外鹽種類NACL2、外鹽離子強(qiáng)度2.7%3JK保護(hù)與糾正