唾液淀粉酶活性的觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板

1、公司絕密唾液淀粉酶活性的觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板篇一:唾液淀粉酶活性觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告2 唾液淀粉酶活性觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解環(huán)境因素對(duì)酶活性的影響及酶的高效性;2.掌握酶定性分析的方法和注意事項(xiàng)。二基本原理1.酶是生物催化劑,具有極高的催化效率,其催化效率比一般催化劑高1061013.在生物體內(nèi)過(guò)氧化氫酶能催化h2o2分解成h2o和o2,鐵粉地h2o2分解也有催化作用,但其效率遠(yuǎn)低于酶。2.酶的活性受溫度的影響。在一定的溫度范圍內(nèi),溫度升高,酶的活性也會(huì)增大。當(dāng)?shù)搅俗畲笾岛?此時(shí)溫度為酶的最適溫度,由于溫度過(guò)高,酶開(kāi)始失活,導(dǎo)致酶的效率降低,最后完全失活。3.酶的活性受ph值的影響。酶在一定范圍的

2、ph值下才有活性,高于或低于最適ph,都會(huì)使酶的活性降低。4.酶活性常受到某些物質(zhì)的影響。有些物質(zhì)能使酶的活性增加,稱(chēng)為激活劑,有些物質(zhì)能使酶的活性降低,稱(chēng)為抵制劑。5.碘液指示淀粉水解程度的不同色變化:淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶紅色糊精淀粉酶麥芽糖+少量葡萄糖 加碘后:藍(lán)色 紫紅色 暗褐色紅棕色 黃色三試劑與器材篇二:唾液淀粉酶活性的測(cè)定影響唾液淀粉酶活性的研究摘要:討論了不同條件下唾液淀粉酶的活性差異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,影響唾液淀粉酶活性的因素很多,必須在適宜的條件下,才能發(fā)揮最佳催化作用;淀粉酶具有高度專(zhuān)一性,其活性受溫度ph值激活劑及抑制劑酶濃度以及作用時(shí)間等多種因素的影響;每

3、個(gè)人產(chǎn)生唾液淀粉酶的量不同,活性強(qiáng)弱也有差異。關(guān)鍵詞:淀粉酶;活性;溫度;抑制劑;激活劑;專(zhuān)一性2影響唾液淀粉酶的活性的因素(一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察淀粉在水解過(guò)程中遇碘后溶液顏色的變化。觀察溫度ph激活劑與抑制劑對(duì)唾液淀粉酶活性的影響。(二)實(shí)驗(yàn)原理人唾液中淀粉酶為-淀粉酶,在唾液腺細(xì)胞中合成。在唾液淀粉酶的作用下,淀粉水解,經(jīng)過(guò)一系列被稱(chēng)為糊精的中間產(chǎn)物,最后生成麥芽糖和葡萄糖。變化過(guò)程如下:淀粉紫色糊精紅色糊精麥芽糖葡萄糖淀粉紫色糊精紅色糊精遇碘后分別呈藍(lán)色紫色與紅色麥芽糖和葡萄糖遇碘不變色。淀粉與糊精無(wú)還原性,或還原性很弱,對(duì)班氏試劑呈陰性反應(yīng)。麥芽糖與葡萄糖是還原性糖,與班氏試劑共熱后生成紅

4、棕色氧化亞銅的沉淀。唾液淀粉酶的最適溫度為37-40c,最適ph為6.8.偏離此最適環(huán)境時(shí),酶的活性減弱。低濃度的cl-離子能增加淀粉酶的活性,是它的激活劑。cu2+等金屬離子能降低該酶的活性,是它的抑制劑。(三)器材及試劑1器材:試管酒精燈燒杯恒溫水浴鍋量筒冰浴玻璃棒試管夾白磁板試管架鐵三腳架唾液淀粉酶2試劑:1%淀粉溶液碘液班氏試劑0.4%hcl溶液0.1%的乳酸溶液1%nacl溶液1%cuso4溶液0.1%淀粉溶液(四)操作步驟1淀粉酶活性的檢測(cè):取一只試管,注入1%淀粉溶液5ml與稀釋的唾液0.5-2ml?；靹蚝蟛迦?支玻璃棒,將試管連同玻璃棒置于37c水浴中。不是的用玻璃棒從試管中取

5、出1滴溶液,滴加在白磁板上,隨即滴加1滴碘液,觀察溶液呈現(xiàn)的顏色。此實(shí)驗(yàn)延續(xù)至溶液僅表現(xiàn)碘被稀釋后的微黃色為止。記錄淀粉在水解過(guò)程中,遇碘后溶液顏色的變化。向上面的剩余溶液中加2ml班氏試劑,放入沸水中加熱10分鐘左右,觀察現(xiàn)象2ph對(duì)酶活性的影響:取4支試管,分別加入0.4%鹽酸0.1%乳酸蒸餾水與1%碳酸鈉各2ml,再向以上四支試管中各加2ml1%淀粉溶液及2ml淀粉酶試劑,在沸水浴中加熱,根據(jù)生成紅棕色沉淀的多少,說(shuō)明淀粉水解的強(qiáng)弱。3溫度對(duì)酶活性的影響:取3支試管,各加3ml1%淀粉溶液;另取3支試管,各加1ml淀粉酶液。將此6支試管分為3組,每組中盛淀粉溶液與淀粉酶液的試管各1支,三

6、組試管分別置于0c37c與70c的水浴中。5分鐘后,將各組中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中,繼續(xù)維持原溫度條件5min后,立即加2滴碘液,觀察溶液顏色的變化。根據(jù)觀察結(jié)果說(shuō)明溫度對(duì) 酶活性的影響。 4激活劑與抑制劑對(duì)酶活性的影響:取3支試管,按下表加入各種試劑。混勻后,置于37c水浴中的保溫。從1號(hào)試管中用玻璃棒取出1滴溶液,置于白磁板上用碘液檢查淀粉的水解程度。待1號(hào)試管內(nèi)的溶液遇碘不再變色后,立即取出所有的試管,各加碘液2滴,觀察溶液顏色的變化,并解釋之。1.加入班氏試劑后2.ph值對(duì)酶活性影響:1號(hào)深紅色,2號(hào)為紅棕色,3號(hào)為磚紅色,4號(hào)為偏藍(lán)。因?yàn)閜h=1時(shí),超出了淀粉酶有效ph范圍,使得酶

7、完全失活,淀粉沒(méi)有被分解。2號(hào)是因?yàn)閜h=5時(shí),不是淀粉酶的最適范圍。3號(hào)是因?yàn)閜h=7時(shí),為淀粉酶分解的最適ph,淀粉被酶迅速分解生成麥芽糖和葡萄糖。而4號(hào)則是因?yàn)閜h=9超出了淀粉酶的適宜ph,活性受到或者是部分失活,使淀粉分解較慢。3.溫度對(duì)酶的影響:1號(hào)顯紫紅色,2號(hào)為淡黃色,3號(hào)為深藍(lán)色。當(dāng)溫度為0度時(shí),蛋白質(zhì)分子的熱運(yùn)動(dòng)減慢,即酶分子的活性受到了抑制,使酶的活性降低了,淀粉分解減慢,生成紫紅色的糊精;2號(hào)處于37度,接近人體溫度,酶的活化性能較高,淀粉被分解成麥芽糖和葡萄糖就越快,所以是淡黃色,而當(dāng)溫度為70度時(shí),由于酶是蛋白質(zhì),遇到高溫時(shí)會(huì)失活,所以淀粉沒(méi)有被分解。4.激活劑和抑

8、制劑對(duì)酶的影響:3號(hào)作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)組,顯紅棕色,1號(hào)顯淺黃色,2號(hào)顯深藍(lán)色。因?yàn)樵?號(hào)溶液中,nacl對(duì)酶的活性在增加作用,激活了淀粉酶,淀粉酶迅速把淀粉分解成麥芽糖和葡萄糖,滴加碘液時(shí),溶液顯淺黃色,而對(duì)照組顯示紅棕色,表明淀粉被分解成了糊精,在1號(hào)中,溶液中的淀粉沒(méi)有被分解遇碘變藍(lán),通過(guò)對(duì)比1和3號(hào),2和3號(hào),由顏色的變化,判斷淀粉水解程度為132,說(shuō)明了nacl具有激活作用,cuso4具有抑制作用。結(jié)論:酶催化特定化學(xué)反應(yīng)的蛋白質(zhì)rna或其復(fù)合體。是生物催化劑,能通過(guò)降低化學(xué)反應(yīng)的活化能加快反應(yīng)速率,但不改變反應(yīng)的平衡點(diǎn)。絕大多數(shù)酶的化篇三:淀粉酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)報(bào)告淀粉酶活性的測(cè)定一研究背景

9、及目的酶是高效催化有機(jī)體新陳代謝各步反應(yīng)的活性蛋白,幾乎所有的生化反應(yīng)都離不開(kāi)酶的催化,所以酶在生物體內(nèi)扮演著極其重要的角色,因此對(duì)酶的研究有著非常重要的意義。酶的活力是酶的重要參數(shù),反映的是酶的催化能力,因此測(cè)定酶活力是研究酶的基礎(chǔ)。酶活力由酶活力單位表征,通過(guò)計(jì)算適宜條件下一定時(shí)間內(nèi)一定量的酶催化生成產(chǎn)物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷鍵的一類(lèi)酶的總稱(chēng),按照其水解淀粉的作用方式,可分為-淀粉酶和-淀粉酶等。-淀粉酶和-淀粉酶是其中最主要的兩種,存在于禾谷類(lèi)的種子中。-淀粉酶存在于休眠的種子中,而-淀粉酶是在種子萌發(fā)過(guò)程中形成的。-淀粉酶活性是衡量小麥穗發(fā)芽的一個(gè)生理指標(biāo),-淀粉酶活性低的品種

10、抗穗發(fā)芽,反之則易穗發(fā)芽。目前,關(guān)于-淀粉酶活性的測(cè)定方法很多種,活力單位的定義也各不相同,國(guó)內(nèi)外測(cè)定-淀粉酶活性的方法常用的有凝膠擴(kuò)散法3 ,5-二硝基水楊酸比色法和降落值法 。這3 種方法所用的材料分別是新鮮種子萌動(dòng)種子和面粉,獲得的-淀粉酶活性應(yīng)該分別是延二實(shí)驗(yàn)原理萌發(fā)的種子中存在兩種淀粉酶,分別是-淀粉酶和-淀粉酶,-淀粉酶不耐熱,在高溫下易鈍化,而-淀粉酶不耐酸,在ph3.6下則發(fā)生鈍化。本實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)利用-淀粉酶不耐熱的特性,在高溫下(70)下處理使得-淀粉酶鈍化而測(cè)定-淀粉酶的酶活性。酶活性的測(cè)定是通過(guò)測(cè)定一定量的酶在一定時(shí)間內(nèi)催化得到的麥芽糖的量來(lái)實(shí)現(xiàn)的,淀粉酶水解淀粉生成的麥芽

11、糖,可用3,5-二硝基水楊酸試劑測(cè)定,由于麥芽糖能將后者還原生成硝基氨基水楊酸的顯色基團(tuán),將其顏色的深淺與糖的含量成正比,故可求出麥芽糖的含量。常用單位時(shí)間內(nèi)生成麥芽糖的毫克數(shù)表示淀粉酶活性的大小。然后利用同樣的原理測(cè)得兩種淀粉酶的總活性。實(shí)驗(yàn)中為了消除非酶促反應(yīng)引起的麥芽糖的生成帶來(lái)的誤差,每組實(shí)驗(yàn)都做了相應(yīng)的對(duì)照實(shí)驗(yàn),在最終計(jì)算酶的活性時(shí)以測(cè)量組的值減去對(duì)照組的值加以校正。在實(shí)驗(yàn)中要嚴(yán)格控制溫度及時(shí)間,以減小誤差。并且在酶的作用過(guò)程中,四支測(cè)定管及空白管不要混淆。三材料試劑與儀器實(shí)驗(yàn)材料:萌發(fā)的小麥種子(芽長(zhǎng)1厘米左右) 儀器:722光柵分光光度計(jì)(編號(hào)990695)dk-s24型電熱恒溫

12、水浴鍋(編號(hào)l-304056)離心機(jī)(tdl-40b)容量瓶:50ml1,100ml1 小臺(tái)秤 研缽具塞刻度試管:15ml6 試管:8支 移液器 燒杯 試劑: 1%淀粉溶液(稱(chēng)取1克可溶性淀粉,加入80ml蒸餾水,加熱熔解,冷卻后定容至100ml); ph5.6的檸檬緩沖液:a液(稱(chēng)取檸檬酸20.01克,溶解后定容至1l) b液(稱(chēng)取檸檬酸鈉29.41克,溶解后定容至1l)取a液5.5mlb液14.5ml混勻即為ph5.5檸檬酸緩沖液; 3,5-二硝基水楊酸溶液(稱(chēng)取3,5-二硝基水楊酸1.00克,溶于20ml 1m氫氧化鈉中,加入50ml蒸餾水,再加入30克酒石酸鈉,待溶解后,用蒸餾水稀釋至

13、100ml,蓋緊瓶蓋保存); 麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)液(稱(chēng)取0.100克麥芽糖,溶于少量蒸餾水中,小心移入100ml容量瓶中定容); 0.4m naoh四實(shí)驗(yàn)步驟1. 酶液的制備稱(chēng)取2克萌發(fā)的小麥種子與研缽中,加少量石英砂,研磨至勻漿,轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中用蒸餾水定容至刻度,混勻后在室溫下放置,每隔數(shù)分鐘振蕩一次,提取15-20分鐘,于3500轉(zhuǎn)/分離心20分鐘,取上清液備用。 2.-淀粉酶活性的測(cè)定 取4支管,注明2支為對(duì)照管,另2支為測(cè)定管 于每管中各加酶提取液液1ml,在70恒溫水浴中(水浴溫度的變化不應(yīng)超過(guò)0.5)準(zhǔn)確加熱15min,在此期間-淀粉酶鈍化,取出后迅速在冰浴中徹底冷卻。 在試管中各

14、加入1ml檸檬酸緩沖液 向兩支對(duì)照管中各加入4ml 0.4m naoh,以鈍化酶的活性 將測(cè)定管和對(duì)照管置于40(0.5)恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫15min再向各管分別加入40下預(yù)熱的淀粉溶液2ml,搖勻,立即放入40水浴中準(zhǔn)確保溫5min后取出,向兩支測(cè)定管分別迅速加入4ml 0.4m naoh,以終止酶的活性,然后準(zhǔn)備下步糖的測(cè)定。 3. 兩種淀粉酶總活性的測(cè)定取上述酶液5ml于100ml容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度(稀釋倍數(shù)視樣品酶活性大小而定,一般為20倍)。混合均勻后,取4支管,注明2支為對(duì)照管,另2支為測(cè)定管,各管加入1ml稀釋后的酶液及ph5.6檸檬酸緩沖液1ml,以下步驟重復(fù)-淀粉酶

15、測(cè)定的第及第的操作。4. 麥芽糖的測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取15ml具塞試管7支,編號(hào),分別加入麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)液(1mg/ml)00.10.30.50.70.91.0毫升,用蒸餾水補(bǔ)充至1.0ml,搖勻后再加入3,5-二硝基水楊酸1ml,搖勻,沸水浴中準(zhǔn)確保溫5min,取出冷卻,用蒸餾水稀釋至15ml,搖勻后用分光光度計(jì)于520nm波長(zhǎng)下比色,記錄消光值,以消光值為縱坐標(biāo),以麥芽糖含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 樣品的測(cè)定取15ml具塞試管8支,編號(hào),分別加入步驟2和3中各管的溶液各1ml,再加入3,5-二硝基水楊酸1ml,搖勻,沸水浴中準(zhǔn)確煮沸5min,取出冷卻,用蒸餾水稀釋至15ml,搖勻后用分光光度

16、計(jì)于520nm波長(zhǎng)下比色,記錄消光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。五數(shù)據(jù)整理及計(jì)算上表中前4行數(shù)據(jù)為實(shí)驗(yàn)的原始數(shù)據(jù)。以表中前兩行數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)下頁(yè)),計(jì)算上表中第4行數(shù)據(jù)(各樣品的od值)均值,填入上第5行中,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程,計(jì)算第5行od值所對(duì)應(yīng)的麥芽糖濃度,填入最后一行,如上表。根據(jù)以上的數(shù)據(jù)整理的結(jié)果,結(jié)合以下公式計(jì)算兩種淀粉酶的活性:淀粉酶活性(毫克麥芽糖克1鮮重分鐘1)(a-a)樣品稀釋總體積樣品重(g)5(b-b)樣品稀釋總體積淀粉酶活性(毫克麥芽糖克 1鮮重分鐘1)樣品重(g)5a-淀粉酶測(cè)定管中的麥芽糖濃度a-淀粉酶對(duì)照管中的淀粉酶的濃度b(-+-)淀粉酶總活性測(cè)定管中

17、的麥芽糖濃度 b(-+-)淀粉酶總活性對(duì)照管中的麥芽糖濃度 計(jì)算結(jié)果如下:-淀粉酶活性(毫克麥芽糖克-1鮮重分鐘-1)(-+-)淀粉酶活性(毫克麥芽糖克-1鮮重分鐘-1) -淀粉酶活性-1鮮重分鐘-1)六結(jié)果分析七思考題1酶活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)的總體設(shè)計(jì)思路是什么?實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵你認(rèn)為是什么?為什么? 答:利用酶的專(zhuān)一性或酶活力的影響因素抑制除待測(cè)酶以外的其它酶活性,通過(guò)測(cè)酶促反應(yīng)的產(chǎn)率推算酶活力大小。關(guān)鍵在于抑制其它酶的活力而不影響測(cè)定酶,這樣可以減小或避免其它酶產(chǎn)物給測(cè)定結(jié)果帶來(lái)的誤差。2本實(shí)驗(yàn)最易產(chǎn)生對(duì)結(jié)果有較大誤差影響的操作是哪些步驟?為什么?怎樣的操作策略可以盡量減少誤差?答:浸提步驟。70

18、溫度或15min時(shí)間控制不嚴(yán)格不準(zhǔn)確則可能導(dǎo)致淀粉酶未完全鈍化使測(cè)得活性偏大。應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間。70水浴后需要立即冰浴,否則淀粉酶復(fù)性使測(cè)得淀粉酶活性結(jié)果偏大。向測(cè)定管中加入naoh時(shí)應(yīng)迅速,否則酶與底物繼續(xù)反應(yīng)使結(jié)果偏大。3-淀粉酶活性測(cè)定時(shí)70水浴為何要嚴(yán)格保溫15分鐘?保溫后為何要立即于冰浴中驟冷?答:由于-淀粉酶不耐熱,在70下處理一定時(shí)間可以鈍化,嚴(yán)格保溫15分鐘可以達(dá)到理想的鈍化效果,時(shí)間過(guò)長(zhǎng),-淀粉酶活性也會(huì)受到影響;時(shí)間不足,-淀粉酶鈍化不完全。保溫后立即驟冷是為了通過(guò)劇烈的溫變改變-淀粉酶的結(jié)構(gòu)以防止在隨后的反應(yīng)中復(fù)性,這樣就保證了在隨后的40溫浴的酶促反應(yīng)中-淀粉酶不會(huì)

19、再參與催化反應(yīng)。此外我認(rèn)為冰浴使酶迅速降溫,便于嚴(yán)格控制高溫處理時(shí)間的長(zhǎng)短。4ph5.6檸檬酸緩沖液的作用?各管于40水浴準(zhǔn)確保溫15分鐘的作用?答:酶實(shí)驗(yàn)體系的ph值變化或變化過(guò)大,會(huì)使酶活性下降甚至完全失活。加入ph5.6的緩沖液調(diào)至酶促反應(yīng)的最適ph,同時(shí)穩(wěn)定溶液的ph不至于在反應(yīng)過(guò)程中大幅波動(dòng)。 40水浴準(zhǔn)確保溫15分鐘為調(diào)整酶促反應(yīng)的最適溫度5眾多測(cè)定淀粉酶活力的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中一般均采取鈍化-淀粉酶的活力而測(cè)-淀粉酶和測(cè)總酶活力的策略,為何不采取鈍化-淀粉酶活力去測(cè)-淀粉酶活力呢?這種設(shè)計(jì)思路說(shuō)明什么?答:淀粉酶與淀粉酶的催化特性是有差異的。淀粉酶主要作用于直鏈淀粉的-1,4-糖苷鍵,而且僅從淀粉分子外圍的非還原性末端開(kāi)始,切斷至-1,6-鍵的前面反應(yīng)就停止了;而淀粉酶則無(wú)差別地作用于直鏈淀粉與支鏈淀粉的-1,4-糖苷鍵,所以淀粉酶需要淀粉酶淀粉支鏈的-1,4-糖苷鍵后才能完全體現(xiàn)其催化能力。