牛奶中成分分析

1、牛奶中部分成分的分析一、實驗?zāi)康?1)學(xué)習(xí)利用等電點沉淀法從牛奶中制備酪蛋白(2)掌握雙縮月尿法測定蛋白質(zhì)的原理和方法(3)熟悉可見光分光光度計的操作(4)加強(qiáng)對沉淀、抽濾、溶液配制等基本操作的鍛煉(5)分析牛奶中蛋白質(zhì)與鈣的含量。(6)掌握配位滴定法測定液體食品中鈣含量的原理和方法(7)通過與牛奶包裝上注明的含量比較，對實驗分析結(jié)果進(jìn)行客觀評價二、實驗原理牛乳中的主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量名為35g/l。酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物，等電點為4.7。利用等電點時溶解度最低的原理，加入醋酸將牛乳的ph調(diào)至4.7時，使酪蛋白沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂類雜質(zhì)，抽濾、純化后便可得到純酪蛋白

2、。雙縮月尿(nh2conhconh 2)在堿性溶液中與硫酸銅反應(yīng)生成紫紅色化合物，稱為雙縮月尿反應(yīng)，蛋白質(zhì)分子中含有許多肽鍵在堿性溶液中也能與cu2+反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色化合物。在一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。因此，可以利用比色法測定蛋白質(zhì)濃度。雙 縮月尿法是測定蛋白質(zhì)濃度的常用方法之一。操作簡便、迅速、受蛋白質(zhì)種類性質(zhì)的影響較小，但靈敏度較差，而且特異性不高。除-conh-有此反應(yīng)外，-conh2、-ch2nh2、-cs-nh2等基團(tuán)也有此反應(yīng)。鈣與身體健康息息相關(guān)， 鈣除成骨以支撐身體外， 還參與人體的代謝活動，它是細(xì)胞的主要陽離子，還是人體最活躍的元素之一，缺鈣可導(dǎo)致兒童佝僂病，

3、青少年發(fā)育遲緩，孕婦 高血壓，老年人的骨質(zhì)疏松癥。缺鈣還可引起神經(jīng)病，糖尿病，外傷流血不止等多種過敏性 疾病。補(bǔ)鈣越來越被人們所重視。 牛奶中含有易被人體吸收得鈣，有些牛奶產(chǎn)品中還特地加鈣而成為鈣奶。對于液體牛奶中鈣白含量，可采用 edta法進(jìn)行直接測定?？紤]到牛奶中含有fe3+、al3+等干擾離子，可以加入少量三乙醇胺以消除它們的，調(diào)節(jié)ph-1213,以銘藍(lán)黑r作指 示劑，指示劑與鈣生成紅色的絡(luò)合物，當(dāng)用 edta滴定至計量點時，游離出指示劑，溶液 呈現(xiàn)藍(lán)色。三、材料、試劑與儀器（一）材料新鮮牛奶、加鈣牛奶（二）試劑95%乙醇、無水乙醛、醋酸、醋酸鈉、naoh、cus04 5h2o、酒石酸鉀

4、、碘化鉀、牛血清蛋白（bsa）、edta、基準(zhǔn)物質(zhì)caco3、hcl、三乙醇胺、銘藍(lán)黑 r、鹽酸羥胺、鄰二氮 菲（鄰菲啰咻）、濃硝酸、硫代硫酸鈉、甲基紅、氨水1.、0.2 mol l-1 ph4.7醋酸-醋酸鈉緩沖液先配a液與b液。a液：0.2mol/l醋酸鈉溶液。b液：0.2mol/l醋酸溶液。取醋酸鈉固體 1.64g加水溶解并稀釋至100ml,取冰醋酸 1.37ml加水稀釋至120ml,取a液94.79ml, b液105.21ml,混合即得ph4.7的醋酸一一醋酸鈉緩沖液 200ml。2、乙醇一乙醛混合液：乙醇：乙醛=1:1 （v/v）3、naoh （6mol l-1）：稱取12g氫氧化鈉

5、溶于50ml水中。4、雙縮月尿試劑：稱取 cus04 5h2o 3.0g,酒石酸鉀9.0 g和碘化鉀5.0g,分別溶解后混勻，力口 6 mol l-1naoh l00ml ,最后加水至1000ml,貯于棕色瓶中，避光，可長期保存。5、0.9%nacl6、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（10mgml-1）,用小燒杯稱取干燥的牛血清蛋白100.0mg ,以少量生理鹽水溶解后倒入10ml容量瓶中，淋洗小燒杯數(shù)次，一并倒入容量瓶中，最后加生理鹽水至 刻度線。7、待測蛋白樣本：將牛奶樣品用生理鹽水準(zhǔn)確配制成一定濃度的溶液后再測定；將制得的酪蛋白用生理鹽水準(zhǔn)確配制成一定濃度的溶液后再測定。（如若不能溶解，滴加幾滴6mol/

6、l naoh溶液、分別用10ml容量瓶定容）8、edta（0.01mol l-1）:稱取2.0g edta二鈉鹽，用溫?zé)崴芙夂?，稀釋?500ml,儲存于 聚乙烯塑料瓶中。9、caco3標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.01 mol l-1)：準(zhǔn)確稱取基準(zhǔn)物質(zhì) caco30.1g左右，先以少量水潤濕,以水稀再逐滴小心加入 6 mol l-1hc1 ,至caco3完全溶解，定量車專人100ml容量瓶中,釋至刻度,算其濃度。10、naoh (5 mol l-1)11、hcl (6 mol l-1)12、三乙醇胺(200g l-1).13、銘藍(lán)黑r(5 g l一1)乙醇溶液(三)儀器錐形瓶、試管、移液管(1ml、5m

7、l、20 ml)、 l0ml容量瓶、燒杯、表面皿、250ml60ml分液漏斗1000ml棕色試劑瓶、25ml具塞比色管、試管架、塔竭、水浴箱、可見光分光光度計、離心機(jī)、抽濾裝置、精密ph試紙(可測ph4.7),酸度計、電爐、溫度計 四、操作步驟(一)牛奶中酪蛋白的提取1、酪蛋白的粗提40c、ph4.7的醋酸緩沖液 50ml50ml鮮牛奶加熱至 40 co在攪拌下慢慢加入預(yù)熱至用精密ph試紙或酸度計調(diào)ph至4.7。將上述懸浮液冷卻至室溫。離心15分鐘( 3000 r min-1)。棄去清液，得酪蛋白粗制品。2、酪蛋白的純化用水洗滌沉淀 3次，離心10分鐘(3000rmin-1),棄去上清液。在沉

8、淀中加入 30ml乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾。用乙醇一乙醛混合液洗沉淀 2次。最后用乙醛洗沉淀 2次，抽干。將沉淀攤開在表面皿上，風(fēng)干；得酪蛋白純品。3、準(zhǔn)確稱重，計算含量和得率含量：酪蛋白g/(100 ml)牛乳得率提取得到的含量真實含量100%（二）酪蛋白含量的測定1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與樣品的測定取試管8支，按下表操作。123456測定管1測定管2蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（ml）一0.200.400.600.801.00一一待測蛋白樣品（ml）一一一一一一1.001.000.9%nacl(ml)1.000.80.600.400.20-一一雙縮月尿試劑（ml）4.004.004.00

9、4.004.004.004.004.00吸光度a各管混勻、放置 37c水浴中保溫20min。540nm比色，以空白管調(diào)零點，讀取各管吸光度值。2、計算在電腦上以吸光度值為縱坐標(biāo)， 以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查 出待測樣本的蛋白質(zhì)濃度 （g/l）,并求出牛奶中蛋白質(zhì)濃度。由此濃度計算出100ml鮮牛奶中酪蛋白的真實含量。（三）鈣含量的測定1、edta溶液濃度的標(biāo)定準(zhǔn)確移取20.00ml caco 3標(biāo)準(zhǔn)溶液3份分另于250ml錐形瓶中，力口入2ml naoh溶液， 銘藍(lán)黑r指示劑34滴，用edta溶液滴定至溶液由紅色變?yōu)樗{(lán)色即為終點，根據(jù)滴定用 去edta毫升數(shù)和caco3標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，計算 edta溶液的濃度。2、鈣制劑鈣含量的測定準(zhǔn)確移取一定量的鮮牛奶和鈣奶，分別轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確移取上述試液 20.00ml,加入三乙醇胺溶液 5ml, 5mol l-1naoh 4ml ,加入水 20ml ,搖勻，加銘藍(lán)黑r34滴，用0.01mol l；1edta標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，接近終點時再補(bǔ)加 2 3滴銘藍(lán)黑r,當(dāng)溶液由紅色變?yōu)樗{(lán)色即為終點，根據(jù)消耗edta的體積，計算出鮮奶和鈣奶中鈣的含量（g/100 ml）,并與包裝上注明的含量作比較。3、注意事項23滴指示劑。量取鮮奶和鈣奶的量視鈣含量多