結(jié)核分枝桿菌傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)方法完整版

1、 藥藥敏敏試驗(yàn)試驗(yàn)的目的的目的 / 藥敏試驗(yàn)的校正藥敏試驗(yàn)的校正 獲獲得最相得最相關(guān)關(guān)的的臨臨床耐床耐藥標(biāo)藥標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn) 可能的敏感株的敏感可能的敏感株的敏感級(jí)別級(jí)別 在治在治療療反反應(yīng)變應(yīng)變化方面化方面測(cè)測(cè)定敏感性水平定敏感性水平 從從未接受未接受過(guò)過(guò)治治療療的患者的患者(PS)與與至少接受至少接受5/6個(gè)個(gè)月治月治療療的患的患 者者(PR)的的標(biāo)標(biāo)本菌株的敏感性本菌株的敏感性進(jìn)進(jìn)行比行比較較 PS = 100 菌株菌株; PR = 50 菌株菌株 Cantti G, et al. Bull WHO 1969; 41:21-43. 可能敏感菌株可能敏感菌株/ /（可能無(wú)耐藥性菌株）在不同藥（可能無(wú)

2、耐藥性菌株）在不同藥 物濃度下的抑菌分布物濃度下的抑菌分布 Minimal inhibitory concentrations (MIC) 最小抑菌最小抑菌濃濃度度 Frequency of strai ns Clinically susceptible strains (PS) Break point 1 SD 3 SD Frequency of strains Minimal inhibitory concentrations (MIC) Clinically susceptible strains (PS) Clinically resistant strains (PR) 不同不同藥藥

3、物物濃濃度下可能敏感菌株和可能耐度下可能敏感菌株和可能耐藥藥 菌株最低抑菌菌株最低抑菌濃濃度的分布度的分布 Frequency of strains Minimal inhibitory concentrations (MIC) PSPR 2 mcg/ml Break point13.1 as “R” 75.8 11.1 as “S” 可能敏感可能敏感/可能耐可能耐藥藥菌株菌株對(duì)對(duì)利福平的最小抑菌利福平的最小抑菌 濃濃度的累度的累積積分布分布（此（此試驗(yàn)試驗(yàn)采用采用 L-J 培培養(yǎng)養(yǎng)基用基用絕對(duì)濃絕對(duì)濃度法）度法） 85.8 Frequency of strains Minimal inhib

4、itory concentrations (MIC) Clinically susceptible strains (PS) Clinically resistant strains (PR) 采用采用 L-J 培培養(yǎng)養(yǎng)基基 Do not quote this data! (n=81) (n=111) 校正的乙校正的乙胺胺丁醇的丁醇的臨臨界界濃濃度度 (此試驗(yàn)采用改良羅氏培養(yǎng)基的絕對(duì)濃度法) 42% 50% In L-J Mediu m In 7H10 Mediu m 67%67% 抗抗結(jié)結(jié)核核藥藥物的最低抑菌物的最低抑菌濃濃度比平均峰度比平均峰值值 EMB ETH OFX CFX INH R

5、MP KM CPM PAS SM 推薦的臨臨界濃濃度 藥藥物L(fēng)J*7H107H11Bactec 460MGIT 960 異異煙肼肼0.20.20.20.10.1 利福平40.01.01.02.01.0 乙胺胺丁醇2.05.07.52.55.0 鏈鏈霉素4.02.02.02.01.0 吡嗪酰胺吡嗪酰胺NRNRNR100.0100.0 卡那霉素30.05.06.04.0 阿米卡星40.01.01.0 卷曲霉素40.010.010.01.252.5 環(huán)環(huán)丙沙星2.02.02.02.01.0 氧氟氧氟沙星2.02.02.02.02.0 莫西沙星0.5 0.25 加替沙星1.0 乙硫異酰胺異酰胺5.01

6、0.02.55.0 丙硫異異煙胺胺40.01.252.5 PAS1.02.08.02.0 環(huán)絲酰胺環(huán)絲酰胺40.0NRNRNRNR 氨苯氨苯硫脲脲NRNRNRNRNR 利奈唑酮唑酮1.01.0 *Proportion WHO推薦推薦藥藥敏敏試驗(yàn)試驗(yàn)的的臨臨界界濃濃度度, 2007 (4) 濃縮過(guò)程中利福平的穩(wěn)定性濃縮過(guò)程中利福平的穩(wěn)定性 抗結(jié)核藥物的儲(chǔ)存抗結(jié)核藥物的儲(chǔ)存 在密封的硅在密封的硅膠膠容器容器內(nèi)儲(chǔ)內(nèi)儲(chǔ)存存 (最好在最好在真真空下空下儲(chǔ)儲(chǔ)存存) 比例法比例法 (by Middlebrook & Cohn) Drug free Isoniazid Ethambutol Inoculum

7、media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml 10-3 + + 3 10-5 26 9 0 % resistant 34.6 0.1 Interpretation Resistant Susceptible 藥藥敏敏試驗(yàn)結(jié)試驗(yàn)結(jié)果果-1 1 . If use nichrome wire (0.7 mm wire/ 3 mm of internal diameter), inoculate one loopful of bacterial suspension of 10-2 / or if use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-3 / of bact

8、erial suspension 2. If use nichrome wire, inoculate one loopful of 10-4 / bacterial suspension or if use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-5 /. DrugNoneINHRIFSMEMBPNB Concentrations (/) 00.240.04.02.0500.0 Tube NoC1H1R1S1E1PB Inoculum (10-4 )13+2+11870 Tube NoC2H2R2S2E2 Inoculum (10-6 )2282000 Interpr

9、etation R (7.1) (2 /28x100) S (0.03) (1/2800 x 100) S (0.6) (18/2800 x100) S (0.3) (7/2800 x 100) MTB 藥藥敏敏試驗(yàn)結(jié)試驗(yàn)結(jié)果果-2 1 . If use nichrome wire (0.7 mm wire/ 3 mm of internal diameter), inoculate one loopful of bacterial suspension of 10-2 / or if use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-3 / of bacterial s

10、uspension 2. If use nichrome wire, inoculate one loopful of 10-4 / bacterial suspension or if use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-5 /. DrugNoneINHRIFSMEMBPNB Concentrations (/) 00.240.04.02.0500.0 Tube NoC1H1R1S1E1PB Inoculum (10-4 )14+2+21+3+0 Tube NoC2H2R2S2E2 Inoculum (10-6 )22+50010 Interpretati

11、on?S?MTB 藥藥敏敏試驗(yàn)結(jié)試驗(yàn)結(jié)果果-3 1 . If use nichrome wire (0.7 mm wire/ 3 mm of internal diameter), inoculate one loopful of bacterial suspension of 10-2 / or if use pipette, inoculate 0.1 m l of 10-3 / of bacterial suspension 2. If use nichrome wire, inoculate one loopful of 10-4 / bacterial suspension or i

12、f use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-5 /. DrugNoneINHRIFSMEMBPNB Concentrations (/) 00.240.04.02.0500.0 Tube NoC1H1R1S1E1PB Inoculum (10-4 )13515000 Tube NoC2H2R2S2E2 Inoculum (10-6 )200000 InterpretationRR?MTB 17個(gè)個(gè)跨跨國(guó)參國(guó)參比比實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室網(wǎng)絡(luò)網(wǎng)絡(luò)第第14輪輪熟熟練練度度測(cè)試結(jié)測(cè)試結(jié)果果 （數(shù)數(shù)據(jù)據(jù)來(lái)來(lái)源于源于Armand Van Deun 2007年）年） 敏感性敏感性特特異

13、異性性效能效能可重可重復(fù)復(fù)性性 Isoniazid 異異煙煙肼肼 S敏感敏感=13 R耐耐藥藥=17 Average (%)99999998 100%13141114 95%4313 Rifampicin利福平利福平 S敏感敏感=10 R耐耐藥藥=17 Average (%)99999998 100%14141214 95%3323 Streptomycin S敏感敏感=11 R耐耐藥藥=16 Average (%)97919594 100%121179 95%5688 Ethambutol S敏感敏感=17 R耐耐藥藥=4 Average (%)88979697 100%1113811 95

14、%6476 藍(lán)色數(shù)字表示實(shí)驗(yàn)室數(shù)量藍(lán)色數(shù)字表示實(shí)驗(yàn)室數(shù)量 51個(gè)國(guó)個(gè)國(guó)家（或地家（或地區(qū)區(qū)）參參比比實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室利福平和室利福平和 異異煙煙肼藥肼藥敏敏試驗(yàn)結(jié)試驗(yàn)結(jié)果的一致性果的一致性 （世界（世界衛(wèi)衛(wèi)生生組織組織第四期全球耐第四期全球耐藥報(bào)藥報(bào)告，告，2008） % Agreement一致性一致性Isoniazid異異煙煙肼肼Rifampicin利福平利福平 10038 (77.6)37 (72.5) 95-996 (12.2)9 (17.6) 90-944 (8.2)5 (9.8) 901 (2.0)0 Total number of labs 合合計(jì)計(jì) 49 (100.0)51 (100.0) Test Drug 藥藥物 敏感性 (%) 特異異性 (%) 患病情況況下的耐藥結(jié)藥結(jié)果預(yù)測(cè)值預(yù)測(cè)值(%) 1%15%110%130%1 KM2100909.234.552.681.1 CPM21009620.056.873.591.5 OFX21009725.064.178.793.5 ETH279918.232.049.479.0 二二線線抗抗結(jié)結(jié)核核藥藥物耐物耐藥預(yù)測(cè)值藥預(yù)測(cè)值 1 Prevalence rates 2 Results of SLDST proficiency tests done once in 2004 (coordin