細(xì)胞生物學(xué)實驗操作考核試題及評分標(biāo)準(zhǔn)

1、細(xì)胞生物學(xué)實驗操作考核試題及評分標(biāo)準(zhǔn)實驗一：顯微鏡的技術(shù)參數(shù)及特殊光鏡的演示步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1. 熟悉實驗原理。（3分）2. 明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗內(nèi)容：1.普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)及技術(shù)參數(shù)（3分）2.幾種特殊類型的光學(xué)顯微鏡（2分）5三選擇儀器和藥品：普通光學(xué)顯微鏡（2分）、暗視野顯微鏡（2分）、相差顯微鏡（2分）、熒光顯微鏡（2分）、倒置顯微鏡（2分）10四進行實驗：1、 光學(xué)系統(tǒng)及成像原理(10分)2、 機械系統(tǒng)：（從下往上）(10分)3、 顯微鏡的技術(shù)參數(shù)(10分)4、 顯微鏡的使用(15分)5、幾種特殊類型的光學(xué)顯微鏡的使用：暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微

2、鏡、倒置顯微鏡(20分)65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：1、能夠準(zhǔn)確規(guī)范的操作各種顯微鏡（2分）2、熟悉各種顯微鏡的用途（3分）5六實驗后整理：1、整理儀器并使其歸位（5分）2、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手（5分）10實驗二：測微尺的使用及細(xì)胞大小的測量步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1、 安裝并用鏡臺測微尺標(biāo)定目鏡測微尺（2分）2、然后用目鏡測微尺測量裝片細(xì)胞的大小。（3分）5三選擇儀器和藥品：普通光學(xué)顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、魚血細(xì)胞裝片、馬蛔蟲子宮細(xì)胞裝片。（10分）10四進行實驗：1、 調(diào)好顯微鏡，使其處于工作狀

3、態(tài)（10分）2、 在顯微鏡載物臺上放置鏡臺測微尺，并調(diào)整好位置（10分）3、 按照下列公式計算目鏡測微尺每格等于多少微米（10分）4、 細(xì)胞大小的測量（10分）5、 計算細(xì)胞大小（25分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：根據(jù)測量結(jié)果計算各種細(xì)胞及細(xì)胞核的體積橢球形：v4ab2/3 a長半徑， b短半徑圓球形：v4/3r3 r半徑圓柱形：vr2h r半徑， h高（5分）5六實驗后整理：1、整理儀器并使其歸位（5分）2、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手（5分）10實驗三：血涂片制備及瑞氏染色顯示白細(xì)胞步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1

4、、 采血并制備血涂片（2分）2、 瑞氏染色法顯示血涂片中的白細(xì)胞（3分）5三選擇儀器和藥品：普通光學(xué)顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、魚血細(xì)胞裝片、載玻片、采血針、酒精棉球、瑞氏染液（10分）10四進行實驗：1、 準(zhǔn)備兩張經(jīng)過脫脂的干凈載玻片。（5分）2、 2、用70酒精棉球消毒指腹或耳垂。（5分）3、用消毒過的針刺破指腹或耳垂的皮膚，擠去第一滴血不要（因含單核白細(xì)胞較多），用載玻片的一端與血滴接觸。取另一張載玻片，斜置血滴左緣，先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀，兩玻片的角度以45為宜（角度過大血膜較厚，角度小則血膜薄），輕輕將沾有血液的載玻片向前推進，速度要一致，否則血膜成波

5、浪形，厚薄不勻（初學(xué)者可把玻片放在桌上操作）。（20分）4、使涂片在空氣中自然干燥備用。制作不理想者需要重新制備。（5分）5、待血涂片干燥后加瑞氏染色液58滴覆蓋整個血膜，1min；（5分）6、直接清水沖洗，水流不宜過大，至水中無色即可。不可先倒掉染液，防止染液殘渣留在細(xì)胞中影響染色結(jié)果。（10分）7、紗布擦干或吸水紙吸干玻片下端（無細(xì)胞面）的水，然后置于載物臺上進行觀察，先用低倍鏡查找，后用高倍鏡觀察細(xì)節(jié)。（5分）8、拍照并進行結(jié)果分析：（5分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：（5分）5六實驗后整理：1、廢液倒入廢液桶，固體物回收到指定容器中（5分）2、洗滌儀器并使其歸位。（3分）3、保持臺面

6、和地面整潔，實驗后洗手。（2分）10實驗四：血細(xì)胞的計數(shù)步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1、 指尖采血（2分）2、 紅細(xì)胞進行計數(shù)。（3分）5三選擇儀器和藥品：普通光學(xué)顯微鏡、血球計數(shù)板、血蓋片（2盒）、采血針（每人1只）、75酒精、消毒棉球、10010毫米玻璃試管（25只）、試管架（4個）、吸管（25支）、血球計數(shù)板（25塊）、擦鏡紙。試劑：生理鹽水（0.9nacl液）：稱取4.5克氯化鈉，溶于500毫升蒸餾水（10分）10四進行實驗：1、準(zhǔn)備細(xì)胞稀釋液：準(zhǔn)確量取5ml生理鹽水加入試管中。（5分）2、制備血細(xì)胞稀釋液：（1）

7、用消毒干棉球醮75酒精消毒左手無名指或耳垂邊緣，待酒精揮發(fā)后用采血針刺入皮膚約23mm深，讓血液自然流出。（10分）2）用消毒干棉球拭去第1滴血液，待流出第2滴血成大滴時，用采血管吸血至20mm3刻度處。（10分） （3）將吸管內(nèi)血液放入盛有生理鹽水的小試管底部。（5分）3、滴片：將血細(xì)胞計數(shù)板擦干凈，先蓋好血蓋片，然后用吸管吸取已稀釋的細(xì)胞懸液，滴在血蓋片邊緣，讓細(xì)胞液自動流入計數(shù)室內(nèi)。靜止片刻，待細(xì)胞下沉后可計數(shù)。（10分）4、計數(shù)：將計數(shù)板放在載物臺上，在低倍鏡下按一定方向逐格數(shù)出細(xì)胞數(shù)。（10分）5、計算：算出每立方毫米的細(xì)胞數(shù)。（15分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：白細(xì)胞：白細(xì)胞個

8、數(shù)/mm3 =四角的4個大方格（共416中格）內(nèi)細(xì)胞數(shù) /4 10稀釋倍數(shù)（2分）紅細(xì)胞：紅細(xì)胞數(shù)/mm3 =中央大方格中的四角和中央的中方格（共5個中方格）內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù) /5 2510稀釋倍數(shù)（3分）5六實驗后整理：1、廢液倒入廢液桶，固體物回收到指定容器中（5分）2、洗滌儀器并使其歸位。（3分）3、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手。（2分）10實驗五：線粒體的超活染色與觀察步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1、 取口腔上皮細(xì)胞（2分）2、 采用詹納斯綠染色法顯示細(xì)胞中的線粒體。（3分）5三選擇儀器和藥品：光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋

9、玻片、培養(yǎng)皿、消毒牙簽、吸水紙、擦鏡紙。詹納斯綠b染液、生理鹽水。（10分）10四進行實驗：（一）口腔粘膜上皮細(xì)胞涂片的制作：1、將載玻片刷洗干凈，用紗布擦干，置于實驗臺的適當(dāng)位置；（10分）2、蒸餾水漱口，將牙簽粗的一端放入自己口腔中；（10分）3、用力適當(dāng)?shù)脑诳谇活a內(nèi)刮幾下（用力輕重適宜，以獲得活力旺盛的細(xì)胞，又不損傷）（10分）4、將刮下的白色粘性物薄而均勻地涂在載玻片上（可用生理鹽水，細(xì)胞容易展開；可不用，不用的容易貼壁）；（10分）（二）染色：5、在載玻片中央滴一滴中性紅詹納斯綠b（janus green b）染液，均勻涂于染液中，染色0.51 min，加蓋玻片后立即觀察。（10分）

10、6、拍照并對圖片進行標(biāo)注。（15分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：5六實驗后整理：1、廢液倒入廢液桶，固體物回收到指定容器中（5分）2、洗滌儀器并使其歸位。（3分）3、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手。（2分）10實驗六：brachet染色法顯示rna步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1、取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞（2分）2、采用brachet染色法顯示細(xì)胞中的rna及dna。（3分）5三選擇儀器和藥品：藥品：甲基綠（2%）-哌洛寧（1%）混合染料 （1：9）（5分）儀器：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、剪刀等（5分）10四進行實驗：1、

11、取材：用鑷子撕取一小塊洋蔥內(nèi)表皮，剪成45mm2的小塊，置于載玻片上。（10分）2、染色：用吸管吸取1滴甲基綠-哌洛寧混合染料（unna 染料），滴在表皮上，染色30-40mins。（15分）3、沖洗：清水沖洗表皮至水無色即可，并用吸水紙吸干。（10分）4、觀察：蓋上蓋玻片后鏡檢。（15分）5、拍照并描述結(jié)果（15分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：（10分）5六實驗后整理：1、廢液倒入廢液桶，固體物回收到指定容器中（5分）2、洗滌儀器并使其歸位。（3分）3、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手。（2分）10實驗七：pas法顯示多糖步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)?/p>

12、標(biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1、 培養(yǎng)草履蟲（2分）2、 采用過碘酸-希夫反應(yīng)顯示細(xì)胞質(zhì)中的多糖成分（3分）。5三選擇儀器和藥品：儀器：離心機2臺、離心管812支、顯微鏡、擦鏡紙、量筒、染色缸812只、紗布等；（5分）藥品：0.5%過碘酸（hio4）溶液、schiff試劑、10%偏重亞硫酸鈉（na2s2o5）水溶液、1n鹽酸、1%甲基綠水溶液，二甲苯、95%酒精、100%酒精。（5分）10四進行實驗：1、取草履蟲培養(yǎng)液適量，紗布過濾稻草后，離心無稻草的草履蟲培養(yǎng)液1400轉(zhuǎn)/分5min，取沉淀12滴滴于載玻片上；（15分）2、95%酒精固定10min，此過程中要防止酒精完全揮發(fā)干，要不斷補充

13、酒精；（10分）3、滴加幾滴0.5% hio4 作用15min；（5分）4、滴加schiff試劑（暗處室溫）作用3045min；（5分）5、亞硫酸水漂洗三次（除去多余的無色品紅），每次2min；（10分）6、清水沖洗約1min后擦干玻片鏡檢。（10分）7、拍照并描述結(jié)果。（10分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：細(xì)胞內(nèi)的糖元呈紅色-紫紅色顆粒。顯色深淺與細(xì)胞中乙二醇基含量成正比，多時呈深紫紅色。（5分）5六實驗后整理：1、廢液倒入廢液桶，固體物回收到指定容器中（5分）2、洗滌儀器并使其歸位。（3分）3、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手。（2分）10實驗八：染色體玻片標(biāo)本的制作步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則

14、滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1、阻斷小鼠股骨骨髓細(xì)胞到分裂中期（2分）2、采用低滲滴片法制備染色體玻片標(biāo)本，利用顯微鏡觀察中期分裂相。（3分）5三選擇儀器和藥品：注射器、解剖器具(剪刀、鑷子、解剖刀)、離心管、吸管、試管、水浴鍋、載玻片、離心機、顯微鏡；秋水仙素(0.01)、乙醇、冰醋 酸、生理鹽水，0.075m kcl低滲液、giemsa染料（10分）10四進行實驗：1、前處理：取骨髓細(xì)胞前58小時向小鼠腹腔內(nèi)注射秋水仙素（5g/g)。（將有絲分裂阻斷在中期，增加中期分裂相的比例）（10分）2、取材：處死小鼠剖出股骨（注意不要將股骨剪斷，否則

15、容易造成骨髓細(xì)胞的流失），將股骨上的肌肉擰擦干凈后，取骨髓細(xì)胞。先剪去股骨兩端，再用注射器和針頭吸取生理鹽水溶液，將針頭插入骨髓腔，以生理鹽水將骨髓細(xì)胞沖入離心管中(獲得有絲分裂細(xì)胞，注意沖出骨髓細(xì)胞的動作要快，沖擊量大，細(xì)胞多，并要求預(yù)溫藥液至25)。生理鹽水用量大約6ml。（10分）3、染色體制備：（1）低滲：800-1000rpm離心8mins，去除上清液，加入6ml預(yù)溫至25的0.075m 的kcl溶液，用吸管輕輕吹散細(xì)胞，置25條件下低滲20分鐘。（使細(xì)胞膨脹，利于滴片時染色體分散）（5分）（2）預(yù)固定： 800-1000rpm離心8mins，去除上清，加入6ml新制的carnoys

16、固定液（甲醇：冰乙酸=3：1），用吸管輕輕將細(xì)胞吹散，固定10mins。（15分）（3）固定：離心，去上清，加入6ml新制的carnoys固定液（甲醇：冰乙酸=3：1），混勻，固定10mins, (此步重復(fù)兩次)。離心，去上清后，加入約0.5ml新carnoys固定液，用滴管輕輕將細(xì)胞吹散，制成細(xì)胞懸液。（5分）4、滴片：（15分）取出預(yù)冷的干凈載玻片 以60-75cm的高度滴片 自然干燥 giemsa染料染色10mins流水沖洗12mins 鏡檢5、拍照并描述結(jié)果。（10分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：5六實驗后整理：1、廢液倒入廢液桶，固體物回收到指定容器中（5分）2、洗滌儀器并使其歸位

17、。（3分）3、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手。（2分）10實驗九：植物細(xì)胞骨架的光鏡觀察步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1、 取洋蔥內(nèi)表皮（2分）2、 用光鏡觀察細(xì)胞骨架的形態(tài)與分布。（3分）5三選擇儀器和藥品：水浴鍋、5-10ml塑料離心管、鑷子、剪 刀、載玻片、蓋玻片、吸管、吸水紙等；6 mm 磷酸緩沖液pbs、1% triton x- 100 （去垢劑）、3% 戊二醛、咪唑緩沖液、0.2% 考馬斯亮蘭r250染料；洋蔥（10分）10四進行實驗：1、取材：撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮5mm2，浸入裝有6mm pbs 緩沖液的燒杯或小

18、瓶內(nèi)，使材料下沉，處理5mins；（5分）2、抽提：吸去pbs，加去垢劑1%triton x-100液2ml，使液體充分浸泡材料，并立即放入37水浴鍋中處理20mins；（10分）3、沖洗：吸去1%triton，用m緩沖液(咪唑+螯合劑+ k+ + mg2+ ）輕輕沖洗3次，每次3mins；（5分）4、固定：加3%戊二醛固定15mins；（10分）5、沖洗：吸去3%戊二醛固定液，用6mm pbs緩沖液沖洗3次，每次3mins；（10分）6、染色：吸去pbs緩沖液，滴幾滴0.2%考馬斯亮蘭r250染料，染色10mins；（5分）7、制片：吸去染料，用蒸餾水洗2-3次，將標(biāo)本平鋪在載玻片上，加蓋片

19、；（10分）8、鏡檢：拍照洋蔥表皮細(xì)胞骨架圖并描述現(xiàn)象。（10分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：5六實驗后整理：1、廢液倒入廢液桶，固體物回收到指定容器中（5分）2、洗滌儀器并使其歸位。（3分）3、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手。（2分）10實驗十：活細(xì)胞觀察與死、活細(xì)胞鑒別步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二熟悉實驗過程：1、 取小鼠脾臟淋巴細(xì)胞2、 用臺盼藍(lán)法鑒定細(xì)胞死活。5三選擇儀器和藥品：儀器：鑷子、剪 刀、注射器、載玻片、蓋玻片、吸管、吸水紙等藥品：0.9%生理鹽水 、0.4%臺盼藍(lán)（生理鹽水配制）（10分）10四進行實驗：1、取材：

20、取小鼠脾臟，用盛有2ml生理鹽水的注射器沖擊脾臟，下接一個10ml離心管。（25分）2、染色：取0.5ml細(xì)胞懸液放入干凈試管中，加入約0.1ml（12滴）0.4%臺盼藍(lán)染液，混合，2min后立即制成臨時裝片，鏡檢。（20分）3、拍照描述結(jié)果并計算存活率：（20分）65分五根據(jù)實驗現(xiàn)象得出結(jié)論：死細(xì)胞染成藍(lán)色，活細(xì)胞不著色。（5分）5六實驗后整理：1、廢液倒入廢液桶，固體物回收到指定容器中（5分）2、洗滌儀器并使其歸位。（3分）3、保持臺面和地面整潔，實驗后洗手。（2分）10實驗十一：動物細(xì)胞微絲束的光鏡觀察步驟考核目標(biāo)及評分細(xì)則滿分值一1、熟悉實驗原理。（3分）2、明確實驗?zāi)繕?biāo)。（2分）5二

21、熟悉實驗過程：1、 取小鼠血管平滑肌細(xì)胞或成纖維細(xì)胞（2分）2、 用考馬斯亮藍(lán)法光鏡觀察細(xì)胞骨架的形態(tài)與分布。（3分）5三選擇儀器和藥品：水浴鍋、5-10ml塑料離心管、鑷子、剪 刀、載玻片、蓋玻片、吸管、吸水紙等；（5分）1m pbs、1% triton x- 100 （去垢劑）、3% 戊二醛、咪唑緩沖液、0.2% 考馬斯亮蘭r250染料（5分）10四進行實驗：1、清洗蓋片：將蓋玻片清洗干凈并高壓滅菌或酒精消毒，置于無菌六孔細(xì)胞培養(yǎng)板中；（5分）2、培養(yǎng)細(xì)胞：原代或用傳代培養(yǎng)凍存的平滑肌或成纖維細(xì)胞，于六孔培養(yǎng)板中長至50%60%融合；（5分）3、洗滌：棄去培養(yǎng)液，pbs洗滌3次，每次2min；（5分）4、抽提：吸去pbs，加去垢劑1%triton x-100液1ml，室溫處理20mins；（15分）5、沖洗：吸去1%triton，用m緩沖液(咪唑+螯合劑+ k+ + mg2+ ）輕輕沖洗3次，每次3mins；（5分）6、固定：加3%戊二醛固定15mins；