2.3分解纖維素的微生物的分離ppt課件

1、 一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識 纖維二糖纖維二糖 C1C1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶 葡萄糖葡萄糖纖維素纖維素 一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識 在在2 2支支20mL20mL的試管中，分別放入的試管中，分別放入 1 16cm6cm的濾紙條，再分別加入的濾紙條，再分別加入pHpH為為4.84.8、物、物 質(zhì)的量濃度為質(zhì)的量濃度為0.1mol/L0.1mol/L的醋酸的醋酸- -醋酸鈉緩沖醋酸鈉緩沖 液液10mL10mL、11mL11mL。在加入。在加入10mL10mL緩沖液的試管中緩沖液的試管中 加入加入1mL1mL纖維素酶纖維素酶7080U/mL7080U/mL）。將二支試）。將二支試 管

2、固定在管固定在50mL50mL的錐形瓶中，在搖床上以的錐形瓶中，在搖床上以 140r/min140r/min的轉(zhuǎn)速振蕩反應(yīng)的轉(zhuǎn)速振蕩反應(yīng)1h1h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。 1U表示表示1個酶活力單位，是指在溫度為個酶活力單位，是指在溫度為25，其他反應(yīng)條件，其他反應(yīng)條件， 如如pH等，均為最適的情況下，在等，均為最適的情況下，在1min內(nèi)轉(zhuǎn)化內(nèi)轉(zhuǎn)化1mmol的底物所的底物所 需的酶量。需的酶量。 底物：酶所作用和催化的化合物。底物：酶所作用和催化的化合物。 在一支試管中添加纖維素酶，在一支試管中添加纖維素酶， 另一支試管不添加纖維素酶；另一支試管不添加纖維素酶； 思考思考1 1實驗分析：實驗分析

3、：P27P27的小實的小實 驗是如何構(gòu)成對照的？驗是如何構(gòu)成對照的？ 濾濾 紙紙 崩崩 潰潰 法法 （2 2纖維素分解菌的篩選纖維素分解菌的篩選 1 1、篩選纖維素分解菌的方法、篩選纖維素分解菌的方法_。 該方法可以通過該方法可以通過_反應(yīng)直接篩選。反應(yīng)直接篩選。 剛果紅染色法剛果紅染色法 顏色顏色 2 2、其原理是：剛果紅可以與纖維素形成、其原理是：剛果紅可以與纖維素形成 _，當(dāng)纖維素被，當(dāng)纖維素被_分解后，分解后， 紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以_ 為中心的為中心的_，可以通過，可以通過 _ _ 來篩選纖維來篩選纖維 素分解菌。素分解菌。 紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物纖維素酶

4、纖維素酶 纖維素分解菌纖維素分解菌 透明圈透明圈 是否產(chǎn)生透明圈是否產(chǎn)生透明圈 可根據(jù)是否可根據(jù)是否 產(chǎn)生透明圈產(chǎn)生透明圈 來篩選纖維來篩選纖維 素分解菌素分解菌 練一練：練一練： 1.1.下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯誤的選項下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯誤的選項 是是 A. 纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種 B. 纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖 C. 纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁 D. 葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖 2.利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解利用剛果紅法可

5、以篩選出纖維素分解 菌，下列說法錯誤的是菌，下列說法錯誤的是 A. 剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物 B. 剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物 C. 剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物 D. 若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩 選出了纖維素分解菌選出了纖維素分解菌 ( (三三) )、實驗設(shè)計、實驗設(shè)計 土壤土壤 取樣取樣 選擇選擇 培養(yǎng)培養(yǎng) 梯度梯度 稀釋稀釋 將樣品涂將樣品涂 布到鑒別布到鑒別 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 挑選挑選 菌落菌落 1 1、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基、纖維素分解菌

6、選擇培養(yǎng)基 屬于屬于_固體、液體培固體、液體培 養(yǎng)基，原因是養(yǎng)基，原因是_ 【資料二】選擇培養(yǎng)【資料二】選擇培養(yǎng) 閱讀資料二閱讀資料二“選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基”，回答以下幾問題：，回答以下幾問題： 液體液體 沒有添加瓊脂沒有添加瓊脂 2 2、該培養(yǎng)基對微生物、該培養(yǎng)基對微生物_ 具有，不具有選擇作用。具有，不具有選擇作用。 如果具有，其選擇機制是如果具有，其選擇機制是 _ _ _ _ 具有具有 以纖維素粉為唯一碳源，能分以纖維素粉為唯一碳源，能分 解纖維素的微生物可以大量繁解纖維素的微生物可以大量繁 殖；殖； 若設(shè)置一個對照實驗說明選擇培養(yǎng)的作若設(shè)置一個對照實驗說明選擇培養(yǎng)的作 用，應(yīng)控制的變量

7、是將用，應(yīng)控制的變量是將_改為改為 _。 3 3、你能否設(shè)計一個對照實驗，說明選擇培養(yǎng)基、你能否設(shè)計一個對照實驗，說明選擇培養(yǎng)基 的作用？的作用？ 葡萄糖葡萄糖 纖維素粉纖維素粉 【資料三】剛果紅染色法【資料三】剛果紅染色法 方法一：先培養(yǎng)微生物，再加方法一：先培養(yǎng)微生物，再加 入剛果紅進行顏色反應(yīng)入剛果紅進行顏色反應(yīng) 方法二：在倒平板時就加入剛方法二：在倒平板時就加入剛 果紅果紅 鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基 ( (水溶性羧甲基纖維素鈉水溶性羧甲基纖維素鈉) ) 顏色反應(yīng)基本顏色反應(yīng)基本 上是纖維素分上是纖維素分 解菌的作用解菌的作用 操作繁瑣，操作繁瑣， 剛果紅會使菌落

8、之剛果紅會使菌落之 間發(fā)生混雜間發(fā)生混雜 操作簡便，操作簡便， 不存在菌落不存在菌落 混雜問題混雜問題 產(chǎn)生淀粉酶產(chǎn)生淀粉酶 的微生物也產(chǎn)生模的微生物也產(chǎn)生模 糊透明圈，有些微糊透明圈，有些微 生物能降解色素，生物能降解色素， 形成明顯的透明圈。形成明顯的透明圈。 思索：這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足思索：這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落， 一般即為分解纖維素的菌落。一般即為分解纖維素的菌落。 接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng) 基上，在基上，在300C300C 370C 370C

9、培養(yǎng)，可獲得培養(yǎng)，可獲得 純培養(yǎng)。純培養(yǎng)。 四、結(jié)果分析與評價四、結(jié)果分析與評價 1. 1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng) 基是否篩選出菌落基是否篩選出菌落 對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌 落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。 如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則 說明可能獲得了分解纖維素的微生物。說明可能獲得了分解纖維素的微生物。 分解分解 纖維纖維 素的素的 微生微生 物的物的 分離分離 纖維素酶纖維素酶 剛果紅染色剛果紅染色篩選原理篩選原理 實實 驗驗 設(shè)設(shè) 計計 土壤取樣土壤取樣

10、 選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng) 純化培養(yǎng)純化培養(yǎng) 前置染色法前置染色法 后置染色法后置染色法 富含纖維素土壤富含纖維素土壤 增大分解菌含量增大分解菌含量 染色鑒別染色鑒別 分離出分解菌分離出分解菌 課堂總結(jié)課堂總結(jié) 1 1本實驗關(guān)于選擇培養(yǎng)目的敘述正確的是本實驗關(guān)于選擇培養(yǎng)目的敘述正確的是 ( )( ) A A可以增加纖維素分解菌的濃度可以增加纖維素分解菌的濃度 B B可以減少纖維素分解菌的濃度可以減少纖維素分解菌的濃度 C C所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基 D D所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基 課堂檢測課堂檢測 A 2.2.篩選出纖維素分解菌后還需要用什么實

11、驗來確篩選出纖維素分解菌后還需要用什么實驗來確 定定( )( ) A A發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶 B B發(fā)酵產(chǎn)纖維素發(fā)酵產(chǎn)纖維素 c c纖維素酶分解濾紙纖維素酶分解濾紙 D D纖維素分解產(chǎn)纖維素分解產(chǎn) 生葡萄糖生葡萄糖 A 3.3.在在105105稀釋度下，平板上生長的平均菌落稀釋度下，平板上生長的平均菌落 數(shù)為數(shù)為5050則每克樣品中的菌落數(shù)是則每克樣品中的菌落數(shù)是( )( ) A A5 5107 B107 B50 50 C C5 5108 D108 D50503 3 A 4.4.能排除培養(yǎng)基是否有雜菌污染的方法是能排除培養(yǎng)基是否有雜菌污染的方法是 ( )( ) A A將未接種的培養(yǎng)基放

12、在實驗桌上培養(yǎng)將未接種的培養(yǎng)基放在實驗桌上培養(yǎng) B B將未接種的培養(yǎng)基放在窗臺上培養(yǎng)將未接種的培養(yǎng)基放在窗臺上培養(yǎng) c c將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng) D D將已接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)將已接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng) C 5 5請分析下面的培養(yǎng)基配方，回答下面的問題：請分析下面的培養(yǎng)基配方，回答下面的問題： 纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基 纖維素粉纖維素粉 5 g 5 g NaN03 1 g NaN03 1 g Na2HP047H 20 1.2 g Na2HP047H 20 1.2 g KH2P04 0.9 g KH2P04 0.9 g MgS047H 20 0.5 g MgS047H 20 0.5 g KCl 0.5 g KCl 0.5 g 酵母膏酵母膏 0.5 g 0.5 g 水解酪素水解酪素 0.5 g 0.5 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000 mL1000 mL (1)(1)上述配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基上述配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基? ?為什為什 么么? ? (2) (2)這個培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用這個培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用? ?如果如果 具有，又是如何選擇的具有，又是如何選擇的? ? (3)(3)如果要證明該培養(yǎng)基