第五章 色譜分析法概論

1、第第1515章章 色譜分析法導論色譜分析法導論 15-1 概述概述 一、一、 “色譜法色譜法” 名稱的由來名稱的由來 石油醚石油醚(流動相流動相) 碳酸鈣碳酸鈣 ( (固定相固定相) ) 色色 譜譜 帶帶 是利用混合物不同組分在是利用混合物不同組分在和和 中分配系數中分配系數(或吸附系數、滲透或吸附系數、滲透 性等性等)的差異，使不同組分在作相對的差異，使不同組分在作相對 運動的兩相中進行反復分配，實現分運動的兩相中進行反復分配，實現分 離的分析方法。離的分析方法。 色譜法色譜法 二、二、 色譜法的分類色譜法的分類 根據流動相的根據流動相的 物態(tài)可分為物態(tài)可分為 氣相色譜氣相色譜(GC) 液相

2、色譜液相色譜(LC) 氣氣-固色譜固色譜(GSC) 氣氣-液色譜液色譜(GLC) 液液-固色譜固色譜(LSC) 液液-液色譜液色譜(LLC) 按固定相的固按固定相的固 定方式分類定方式分類 柱色譜柱色譜 平板色譜平板色譜 平平 板板 色色 譜譜 填充柱色譜填充柱色譜 毛細管柱色譜毛細管柱色譜 紙色譜紙色譜 薄層色譜薄層色譜 根據分離機理根據分離機理 可分為可分為 吸附色譜吸附色譜 分配色譜分配色譜 離子交換色譜離子交換色譜 排阻色譜排阻色譜 1.1.分離效能高分離效能高 2.2.靈敏度高靈敏度高 可檢測可檢測10-1110-13g, ,適于痕量分析適于痕量分析. . 色譜分析需試樣量極少色譜分

3、析需試樣量極少( ( g g或或ng)ng). . 3.3.分析速度快分析速度快 4.4.應用范圍廣應用范圍廣 缺點：對未知物的定性分析比較困難。缺點：對未知物的定性分析比較困難。 方向：高選擇性檢測器；聯用技術方向：高選擇性檢測器；聯用技術（ GC-MS、 GC-FTIR、LC-MS、LC-NMR等）。等）。 一、分離原理一、分離原理 特點：不同組分在柱中移動速度不等；特點：不同組分在柱中移動速度不等； 各組分沿柱子擴散分布。各組分沿柱子擴散分布。 1. 分配系數（平衡常數）分配系數（平衡常數）K 指在一定和溫度和壓力下，組分在兩相間達到指在一定和溫度和壓力下，組分在兩相間達到 分配平衡時，

4、組分在固定相中的濃度分配平衡時，組分在固定相中的濃度cs與組分在流與組分在流 動相中的濃度動相中的濃度cm之比。之比。 s m c K c K： 與溫度、壓力有關外，還與組分性質、固定相與溫度、壓力有關外，還與組分性質、固定相 和流動相性質有關。和流動相性質有關。 不同組分不同組分K值的差異，是實現色譜分離的先決條件。值的差異，是實現色譜分離的先決條件。 2、容量因子（分配比）容量因子（分配比）k 指在一定溫度和壓力下，組分在兩相間達到分指在一定溫度和壓力下，組分在兩相間達到分 配平衡時，組分在固定相中的質量配平衡時，組分在固定相中的質量 p 與組分在流動與組分在流動 相中的質量相中的質量 q

5、 之比。之比。 p k q / / ssm mms cp VVp Kk cq VqV 分配系數與容量因子關系：分配系數與容量因子關系： sm VV / 稱為稱為相比相比 k：與溫度、壓力有關外，還與組分性質、固：與溫度、壓力有關外，還與組分性質、固 定相定相 和流動相性質及和流動相性質及 有關。有關。 K 與與 k 是兩個不同的參數，但在表征組分的分是兩個不同的參數，但在表征組分的分 離行為時，二者完全等效。離行為時，二者完全等效。 k 可以方便地從色譜可以方便地從色譜 圖直接求得，所以它是一個重要的色譜參數。圖直接求得，所以它是一個重要的色譜參數。 一、一、 基線基線 當沒有待測組分進入檢測

6、器時當沒有待測組分進入檢測器時, ,在實驗操作條件下，在實驗操作條件下， 反映檢測器噪聲隨時間變化的曲線稱為基線，穩(wěn)定的基反映檢測器噪聲隨時間變化的曲線稱為基線，穩(wěn)定的基 線應該是一條水平直線。線應該是一條水平直線。 二、峰高二、峰高 色譜峰頂點與基線之間的垂直距離，以（色譜峰頂點與基線之間的垂直距離，以（h h）表示）表示。 三、區(qū)域寬度三、區(qū)域寬度 用于用于衡量柱效率衡量柱效率及及反映色譜操作條件的動力學因素反映色譜操作條件的動力學因素。 表示色譜峰區(qū)域寬度通常有三種方法表示色譜峰區(qū)域寬度通常有三種方法: : 1)1)標準偏差標準偏差 即即0.6070.607倍峰高處色譜峰寬的一半。倍峰高

7、處色譜峰寬的一半。 2)2)半峰寬半峰寬Y1/2 1/2 即峰高一半處的峰寬度。它與標準偏差的關系即峰高一半處的峰寬度。它與標準偏差的關系 為為: : Y1/2 1/2=2.354 =2.354 3)3)峰底寬度峰底寬度Yb即色譜峰兩側拐點上的切線在基線上截距間的即色譜峰兩側拐點上的切線在基線上截距間的 距離。它與標準偏差距離。它與標準偏差 的關系是的關系是 Yb = 4 = 4 四、保留值四、保留值 1.1.保留值的定義保留值的定義 (1)(1)死時間死時間tM 不被固定相吸附或溶解的物質進入色譜柱時，從進樣到出現 不被固定相吸附或溶解的物質進入色譜柱時，從進樣到出現 峰極大值所需的時間稱為

8、死時間峰極大值所需的時間稱為死時間. . M L t u L為柱長為柱長(cm) 為流動相平均線速度為流動相平均線速度(cm/s) (2) 保留時間保留時間tR 試樣從進樣到柱后出現峰極大點時所經過的時間，稱為保留試樣從進樣到柱后出現峰極大點時所經過的時間，稱為保留 時間時間. (3)調整保留時間調整保留時間t tR R tR = tR tM 由于組分在色譜柱中的保留時間由于組分在色譜柱中的保留時間t tR R包含了組分隨流動相通過包含了組分隨流動相通過 柱子所需的時間和組分在固定相中滯留所須的時間，柱子所需的時間和組分在固定相中滯留所須的時間，所以所以t tR R 實 實 際上是組分在固定相

9、中保留的總時間。際上是組分在固定相中保留的總時間。 保留時間是色譜法定性的基本依據保留時間是色譜法定性的基本依據. 但同一組分的保留時間常受到流動相流速的影響，因此色譜但同一組分的保留時間常受到流動相流速的影響，因此色譜 工作者有時用保留體積來表示保留值。工作者有時用保留體積來表示保留值。 (4)(4)死體積死體積V VM 不被保留的組分通過色譜柱所消耗的流動相的體積不被保留的組分通過色譜柱所消耗的流動相的體積. . VM = FctM F Fc c: :流動相平均體積流速流動相平均體積流速, ,（單位（單位:cm:cm3 3minmin-1 -1） ）. . (5) (5) 保留體積保留體積

10、VR 指從進樣開始到被測組分在柱后出現濃度極大點時所通過指從進樣開始到被測組分在柱后出現濃度極大點時所通過 的流動相的體積。保留時間與保留體積關系：的流動相的體積。保留時間與保留體積關系： VR = FctR (6)(6)調整保留體積調整保留體積V VR R 某組分的保留體積扣除死體積后，稱為該組分的調整保留體某組分的保留體積扣除死體積后，稱為該組分的調整保留體 積。積。 VR = VR VM = tR Fc 2. 保留值與平衡常數保留值與平衡常數K 的關系的關系 Rmmmss V cV cV c 根據物料平衡：根據物料平衡： s Rms m c VVV c 兩邊同除以兩邊同除以cm: 平衡常

11、數平衡常數Kcs/cm，且，且VmVM: RMs VVKV 或或: Rs VKV 該式是色譜過程的基本方程，它將反映色譜行為的該式是色譜過程的基本方程，它將反映色譜行為的 保留值（保留值（ VR、 VR 、 VM）與反映物質性質的熱力學常）與反映物質性質的熱力學常 數數K聯系起來。聯系起來。 可得：可得： 3. 3. 保留值與容量因子的關系保留值與容量因子的關系 (1) RM ttk 將色譜過程基本方程代入將色譜過程基本方程代入： 1 ss mM VV kKKK VV sRM sM VVV k VV RMRRRM MMMM VVVttt k VVtt 將該式改為將該式改為： (1) RM VV

12、k (1) R L tk u 4. 4.相對保留值相對保留值 某組分某組分2 2的調整保留值與組分的調整保留值與組分1 1的調整保留值之比，稱為相對的調整保留值之比，稱為相對 保留值。保留值。 由于相對保留值只與柱溫及固定相性質有關，而與柱徑、柱由于相對保留值只與柱溫及固定相性質有關，而與柱徑、柱 長、填充情況及流動相流速無關，因此，它在色譜法中，特別是長、填充情況及流動相流速無關，因此，它在色譜法中，特別是 在氣相色譜法中，廣泛在氣相色譜法中，廣泛用作定性的依據用作定性的依據。 在定性分析中，通常固定一個色譜峰作為標準（在定性分析中，通常固定一個色譜峰作為標準（s），然），然 后再求其它峰（

13、后再求其它峰（i）對這個峰的相對保留值）對這個峰的相對保留值 。 1 ,2 1 2 1 2 R R R R V V t t 2,1 / i s 在多元混合物分析中，通常選擇一對最難分離的物質對，在多元混合物分析中，通常選擇一對最難分離的物質對， 將它們的相對保留值作業(yè)重要參數，稱將它們的相對保留值作業(yè)重要參數，稱選擇因子，選擇因子，用符號用符號 表示，表示， 即即 式中式中t tR R (2) (2)為后出峰的調整保留時間，所以為后出峰的調整保留時間，所以 總是大于總是大于1 1的。的。 可作為衡量固定相選擇性的指標。可作為衡量固定相選擇性的指標。 越大，越容易分離。越大，越容易分離。 =1，

14、分離不能實現。，分離不能實現。 1 2 R R t t sss mmm c VVpK kK qc VV 2 1 22 11 R R t kK tkK 2 () R M t k t 是兩個組分平衡常數或容量因子之比，是兩組分在色是兩個組分平衡常數或容量因子之比，是兩組分在色 譜體系中平衡分配差異的量度，是熱力學參數。它是柱溫、譜體系中平衡分配差異的量度，是熱力學參數。它是柱溫、 組分的性質、固定相和流動相的性質的函數。而與其它實驗組分的性質、固定相和流動相的性質的函數。而與其它實驗 條件，如柱徑、柱長、填充情況及流動相流速等無關。是廣條件，如柱徑、柱長、填充情況及流動相流速等無關。是廣 泛使用的

15、定性數據。泛使用的定性數據。 從色譜流出曲線中，可得許多重要信息：從色譜流出曲線中，可得許多重要信息： (1) (1) 根據色譜峰的個數根據色譜峰的個數，可以判斷樣品中所含組分的最少個數；，可以判斷樣品中所含組分的最少個數； (2) (2) 根據色譜峰的保留值根據色譜峰的保留值，可以進行定性分析；，可以進行定性分析； (3) (3) 根據色譜峰的面積或峰高根據色譜峰的面積或峰高，可以進行定量分析；，可以進行定量分析； (4) (4) 色譜峰的保留值及其區(qū)域寬度色譜峰的保留值及其區(qū)域寬度，是評價色譜柱分離效能的依，是評價色譜柱分離效能的依 據；據； (5) (5) 色譜峰兩峰間的距離色譜峰兩峰間

16、的距離，是評價固定相（或流動相）選擇是否，是評價固定相（或流動相）選擇是否 合適的依據。合適的依據。 下圖是下圖是 A、B兩組分沿色譜柱移動時，不同位置處兩組分沿色譜柱移動時，不同位置處 的濃度輪廓。的濃度輪廓。 濃度濃度 沿柱移動距離沿柱移動距離 L AB A B KA KB 若要使若要使A A、B B組分完全分離，必須滿足以下三點：組分完全分離，必須滿足以下三點： 第一第一，兩組分的分配系數必須有差異；，兩組分的分配系數必須有差異； 第二第二，區(qū)域擴寬的速率應小于區(qū)域分離的速度；，區(qū)域擴寬的速率應小于區(qū)域分離的速度； 第三第三，在保證快速分離的前提下，提供足夠長的色譜柱。，在保證快速分離的

17、前提下，提供足夠長的色譜柱。 15-4 色譜法基本理論色譜法基本理論 第一、二點是完全分離的必要條件第一、二點是完全分離的必要條件。 作為一個色譜理論，它不僅應說明組分在作為一個色譜理論，它不僅應說明組分在 色譜柱中移動的速率，而且應說明組分在色譜柱中移動的速率，而且應說明組分在 移動過程中引起區(qū)域擴寬的各種因素。移動過程中引起區(qū)域擴寬的各種因素。塔塔 板理論和速率理論均以色譜過程中分配系板理論和速率理論均以色譜過程中分配系 數恒定為前提數恒定為前提，故稱為線性色譜理論。，故稱為線性色譜理論。 1 1 塔板理論塔板理論 把色譜柱比作一個精餾塔，即色譜柱是由一系列連續(xù)把色譜柱比作一個精餾塔，即色

18、譜柱是由一系列連續(xù) 的、相等的水平塔板組成。每一塊塔板的高度用的、相等的水平塔板組成。每一塊塔板的高度用 H 表示，表示， 稱為塔板高度，簡稱板高。稱為塔板高度，簡稱板高。 塔板理論假設：在每一塊塔板上，溶質在兩相間很快塔板理論假設：在每一塊塔板上，溶質在兩相間很快 達到分配平衡，然后隨著流動相按一個一個塔板的方式向達到分配平衡，然后隨著流動相按一個一個塔板的方式向 前轉移。對一根長為前轉移。對一根長為 L 的色譜柱，溶質平衡的次數應為：的色譜柱，溶質平衡的次數應為： n 稱為理論塔板數稱為理論塔板數 n 越大或越大或 H 越小越小, ,柱效率越高柱效率越高, ,分離能力越強分離能力越強. .

19、 L n H 塔板理論指出塔板理論指出： 第一第一，當溶質在柱中的平衡次數，即理論塔板數，當溶質在柱中的平衡次數，即理論塔板數 n 大于大于50時時， 可得到基本對稱的峰形曲線。在色譜柱中，可得到基本對稱的峰形曲線。在色譜柱中，n 值一般很大，值一般很大， 如氣相色譜柱的如氣相色譜柱的 n 約為約為103 -106 ，因而這時的流出曲線可，因而這時的流出曲線可 趨近于正態(tài)分布曲線。趨近于正態(tài)分布曲線。 第二第二，當樣品進入色譜柱后，只要各組分在兩相間的分配系，當樣品進入色譜柱后，只要各組分在兩相間的分配系 數有微小差異，經過反復多次的分配平衡后，仍可獲得良數有微小差異，經過反復多次的分配平衡后

20、，仍可獲得良 好的分離。好的分離。 第三第三，n 與半峰寬及峰底寬的關系式為：與半峰寬及峰底寬的關系式為： 式中式中tR 與與Y1/2 ( Yb )應采用同一單位（時間或距離）。應采用同一單位（時間或距離）。 tR 一定時，色譜峰越窄，一定時，色譜峰越窄，n 越大，越大，H 越小，柱效能越高。越小，柱效能越高。 22 2/1 1654. 5 b RR Y t Y t n 在實際工作中，計算出來的在實際工作中，計算出來的 n 和和 H 值有時并不能值有時并不能 充分地反映色譜柱的分離效能，因為采用充分地反映色譜柱的分離效能，因為采用tR計算時，沒計算時，沒 有扣除死時間有扣除死時間tM， 所以常

21、用有效塔板數所以常用有效塔板數 n有效 有效 表示柱效： 表示柱效： 有效板高有效板高 ： 2 2 2/1 1654. 5 b RR Y t Y t n有效 有效 有效 n L H 用熱力學的觀點闡明了溶質在色譜柱中的分配平衡用熱力學的觀點闡明了溶質在色譜柱中的分配平衡 和分離過程和分離過程 解釋了流出曲線的形狀及濃度極大值的位置解釋了流出曲線的形狀及濃度極大值的位置 提出了計算和評價柱效的參數提出了計算和評價柱效的參數 一種半經驗性的平衡理論一種半經驗性的平衡理論 塔板理論塔板理論 貢獻貢獻 缺點缺點 不能解釋造成譜帶擴張的原因和影響板高的各種因素不能解釋造成譜帶擴張的原因和影響板高的各種因

22、素 不能說明同一溶質為什么在不同的流速下，可以測得不不能說明同一溶質為什么在不同的流速下，可以測得不 同的理論塔板數同的理論塔板數 2 2 速率理論速率理論 19561956年荷蘭學者年荷蘭學者van Deemter（范第姆特）等在研究（范第姆特）等在研究 氣液色譜氣液色譜時，提出了色譜過程動力學理論時，提出了色譜過程動力學理論速率理論速率理論。 他們吸收了塔板理論中他們吸收了塔板理論中板高板高的概念，并充分考慮了組分在的概念，并充分考慮了組分在 兩相間的擴散和傳質過程，從而在動力學基礎上較好地解兩相間的擴散和傳質過程，從而在動力學基礎上較好地解 釋了影響板高的各種因素。該理論模型對氣相、液相

23、色譜釋了影響板高的各種因素。該理論模型對氣相、液相色譜 都適用。都適用。 van Deemter方程方程的數學簡化式為的數學簡化式為 為流動相的平均線速度，單位：為流動相的平均線速度，單位：cm/s； A、B、C、為常數，分別代表渦流擴散系數、分子、為常數，分別代表渦流擴散系數、分子 擴散項系數、傳質阻力項系數。擴散項系數、傳質阻力項系數。 uC u B AH （1 1）渦流擴散項）渦流擴散項 A 在填充色譜柱中，當組分隨流動相向柱出口遷移時，流動在填充色譜柱中，當組分隨流動相向柱出口遷移時，流動 相由于受到固定相顆粒障礙，不斷改變流動方向，使組分分子在相由于受到固定相顆粒障礙，不斷改變流動方

24、向，使組分分子在 前進中形成紊亂的類似渦流的流動，故稱前進中形成紊亂的類似渦流的流動，故稱渦流擴散。渦流擴散。 A = 2dp dp: 填充物的平均直徑填充物的平均直徑 :填充不規(guī)則因子填充不規(guī)則因子， A 與流動相的性質、線速與流動相的性質、線速 度和組分性質無關。度和組分性質無關。 對于空心毛細管，不存在對于空心毛細管，不存在 渦流擴散，因此渦流擴散，因此 A = 0。 ：彎曲因子，填充柱色譜，彎曲因子，填充柱色譜， 1。 Dg：試樣組分分子在氣相中的擴散系數：試樣組分分子在氣相中的擴散系數 （cm2s-1）。）。與組分性質、載氣性質、與組分性質、載氣性質、 柱溫、柱壓等因素有關。柱溫、柱

25、壓等因素有關。 宜采用宜采用相對分子質量較大的相對分子質量較大的 載氣（如載氣（如N2），較高載氣線速度，），較高載氣線速度， 較低柱溫。較低柱溫。 2 g BD (3) (3) 傳質阻力項傳質阻力項 C C 物質系統由于濃度不均勻而發(fā)生的物質遷移過程，稱為物質系統由于濃度不均勻而發(fā)生的物質遷移過程，稱為 傳質傳質。影響該過程的阻力，稱為。影響該過程的阻力，稱為傳質阻力傳質阻力。 傳質阻力系數傳質阻力系數C C包括氣相傳質阻力系數包括氣相傳質阻力系數C Cg g和液相傳質阻力和液相傳質阻力 系數系數C C1 1兩項，即兩項，即 C = Cg+ C1 這一方程對選擇色譜分離條件具有實際指導意義，

26、它指這一方程對選擇色譜分離條件具有實際指導意義，它指 出了色譜柱填充的均勻程度，填料顆粒的大小，流動相的種出了色譜柱填充的均勻程度，填料顆粒的大小，流動相的種 類及流速，固定相的液膜厚度等對柱效的影響。類及流速，固定相的液膜厚度等對柱效的影響。 22 2 22 22 0.01 2 (1)3(1) gpf p rl Ddk d k Hdu ukDkD 項，項，Hed ，渦流擴散項。渦流擴散項。 項，項， Hmp ，流動區(qū)域內，流動相傳質阻力。流動區(qū)域內，流動相傳質阻力。 項，項， Hld ，分子擴散項，通?？梢院雎浴７肿訑U散項，通?？梢院雎浴?項，項， Hsm ，流動相停滯區(qū)域內的傳質阻力項。流

27、動相停滯區(qū)域內的傳質阻力項。 項，項， Hsp ，固定相傳質阻力，與氣相色譜中液相傳質阻力項固定相傳質阻力，與氣相色譜中液相傳質阻力項 相應。相應。 液相色譜中的速率理論液相色譜中的速率理論 液液色譜的液液色譜的 Van Deemter 方程式可表達為：方程式可表達為： u D dC D dC u DC udC D dC H s fs m psm md pm m pe 22 1 2 1 由上式可知，在由上式可知，在液液色譜中提高柱效液液色譜中提高柱效可采用以下方法：可采用以下方法： 1、減小填料顆粒粒度、減小填料顆粒粒度dp； 2、用黏度較低的溶劑作流動相；、用黏度較低的溶劑作流動相； 3、采

28、用低流速流動相；、采用低流速流動相； 4、減小填料空穴深度；、減小填料空穴深度； 5、適當提高柱溫。、適當提高柱溫。 1 1、柱效和選擇性、柱效和選擇性 理論塔板數理論塔板數 n 是衡量柱效的指標是衡量柱效的指標， 反映了色譜分離過程反映了色譜分離過程動力學性質動力學性質。 選擇性因子選擇性因子 是衡量色譜柱選擇性的指標，是衡量色譜柱選擇性的指標， 取決于組分在固定相上的取決于組分在固定相上的熱力學性質熱力學性質。 2 2、分離度的定義、分離度的定義 分離度又叫分辨率或分辨度，既能反映分離度又叫分辨率或分辨度，既能反映柱效率柱效率又能反映又能反映選擇選擇 性性的指標，是的指標，是衡量分離效能的

29、總指標。衡量分離效能的總指標。 定義：定義： )()( )()( 2 1 AbBb ARBR s WW tt R )(2/1)(2/1 )()( AB ARBR s WW tt R 或 一般說，當一般說，當Rs1 時，兩峰有部分時，兩峰有部分 重疊；當重疊；當Rs=1時，時， 分離程度可達分離程度可達 98%；當；當Rs=1.5時，時， 分離程度可達分離程度可達 99.7%。 通常用通常用 Rs=1.5作為相鄰兩作為相鄰兩 組分已完全分離組分已完全分離 的標志。的標志。 3 3 分離度的公式分離度的公式 分離度概括了色譜過程動力學和熱力學特性，是衡量色譜分離度概括了色譜過程動力學和熱力學特性，

30、是衡量色譜 術分享效能的總指標。術分享效能的總指標。 分離度受分離度受n n、和和k k 三個參數的控制。三個參數的控制。 設有兩相近色譜峰設有兩相近色譜峰A、B，同時假設，同時假設Wb(A) =Wb(B) 。 由由 tR(A)=tM(1+ kA） tR(B)=tM(1+ kB） 而而 )( )( Bb ABM s W kkt R nkt n t W BM BR Bb /)1 (4 4 )( )( 1 14 B B s k kn R : A B k k 注 基本色譜分離方程式基本色譜分離方程式 s Rn 增加柱長，可提高分離度，但延長了分析時增加柱長，可提高分離度，但延長了分析時 間，因此降低

31、板高，提高柱效，才是提高分離度間，因此降低板高，提高柱效，才是提高分離度 的好方法。的好方法。 1 14 B B s k kn R L n H (2) (2) 分離度與選擇因子的關系分離度與選擇因子的關系 當當 = 1= 1時，時，R = 0R = 0，這時，無論怎樣提高，這時，無論怎樣提高 柱效也無法使兩組分分離。顯然，柱效也無法使兩組分分離。顯然， 大，選擇性大，選擇性 好。研究證明好。研究證明 的微小變化，就能引起分離度的的微小變化，就能引起分離度的 顯著變化。如達到相同分離度，當顯著變化。如達到相同分離度，當 1.011.01時，所時，所 需時間是需時間是 1.11.1時的時的8484

32、倍。倍。 一般通過改變固定相和流動相的性質或降低一般通過改變固定相和流動相的性質或降低 柱溫，可有效增大柱溫，可有效增大 值。值。 1 s R (3)(3)分離度與容量因子的關系分離度與容量因子的關系 1 B B s k k R 一般取一般取k為為 210 最宜。最宜。 對于對于GC，通過提高溫度，通過提高溫度， 可選擇合適的可選擇合適的k值，以改進分值，以改進分 離度。離度。 而對于而對于LC，只要改變流，只要改變流 動相的組成，就能有效地控制動相的組成，就能有效地控制 k值。它對值。它對LC的分離能起到的分離能起到 立竿見影的效果。立竿見影的效果。 15-6 色譜定性和定量分析色譜定性和定

33、量分析 一一 定性分析定性分析 1 用已知純物質用已知純物質 對照定性對照定性 單柱比較法單柱比較法 雙柱比較法雙柱比較法 峰高增加法定峰高增加法定 性性 2 相對保留值相對保留值 . ii ss RR i s RR tV tV 它僅隨固定液及柱溫變化而改變，它僅隨固定液及柱溫變化而改變， 與其它操作條件無關。與其它操作條件無關。 二二 定量分析定量分析 定量基礎定量基礎 A iii mfA h iii mfh或或 Ah ii ff和是絕對校正因子。 1 1、響應信號的測量、響應信號的測量 （1 1）對稱形峰面積的測量）對稱形峰面積的測量 峰高乘以半峰寬法峰高乘以半峰寬法 A = 1.065

34、h W1/2 （2）不）不對稱形峰面積的測量對稱形峰面積的測量 峰高乘以平均峰寬法峰高乘以平均峰寬法 A = 1/2 h（W0.15 + W0.85） （3）自動電學積分儀）自動電學積分儀 （4 4）用峰高表示峰面積）用峰高表示峰面積 在痕量分析中，峰高法的準確度較高。峰面積法適用于各在痕量分析中，峰高法的準確度較高。峰面積法適用于各 種形狀的峰，精度較好。種形狀的峰，精度較好。 峰面積的大小不易受操作條件如柱溫、流動相的流速、進峰面積的大小不易受操作條件如柱溫、流動相的流速、進 樣速度等的影響，故適于作定量分析的參數。樣速度等的影響，故適于作定量分析的參數。 2 2、校正因子、校正因子 （1 1）絕對校正因子）絕對校正因子 受儀器及操作條件影響很大，使用受到限制。受儀器及操作條件影響很大，使用受到限制。 （2 2）相對校正因子）相對校正因子 定義：定義： Ah ii ii ii mm ff Ah 和 A A isiss is A iis