豬乙型腦炎診斷技術(shù)3000字

1、豬乙型腦炎診斷技術(shù)3000字 摘要：豬乙型腦炎目前無特效的治療方法,所以對其進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的診斷意義十分重大。本文對豬乙腦的三種診斷方法：病毒的分離和鑒定、血清學(xué)診斷、分子生物學(xué)診斷技術(shù)進(jìn)行一般性的闡述，并對其優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行比較。關(guān)鍵詞：豬乙型腦炎；診斷技術(shù)；病毒豬乙型腦炎即流行性乙型腦炎（epidemic encephalitis B）又稱日本乙型腦炎（Japanese encephalitis），簡稱乙腦，是由流行性乙型腦炎病毒（日本乙型腦炎病毒）引起的一種蚊媒性人畜共患的傳染病。本病為自然疫源性疾病，豬是其主要的儲(chǔ)存和擴(kuò)散宿主。帶毒豬是該病的主要傳染源，并通過蚊蟲叮咬而傳播，故乙型腦炎病毒感

2、染呈豬-蚊-人連鎖鏈。其病毒（JEV）屬于黃病毒科（Flaviviridae）黃病毒屬（Flavivirus），JEV主要引起妊娠母豬突發(fā)流產(chǎn)，死胎或木乃伊胎；公豬多發(fā)生一側(cè)性睪丸炎；育肥豬持續(xù)高熱。本病不僅對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失, 而且嚴(yán)重威脅著人類的健康。豬乙腦目前無特效的治療方法，而且病毒可經(jīng)胎盤垂直傳播，感染豬可長期帶毒，所以對其進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的診斷意義十分重大。1-3以下對各種診斷方法進(jìn)行概述：1病毒的分離與鑒定 在本病的流行初期，可采集母豬流產(chǎn)死胎和庫蚊為病料，用乳鼠腦內(nèi)接毒和細(xì)胞接毒培養(yǎng)相結(jié)合的方法盲傳并分離病毒，可采用標(biāo)準(zhǔn)毒株和標(biāo)準(zhǔn)免疫血清進(jìn)行交叉補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、交叉中和試

3、驗(yàn)、交叉血凝抑制試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、小鼠交叉保護(hù)試驗(yàn)、RT-PCR等鑒定病毒。湯德元的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所分離的CQRC-1和SCNJ-1均為乙腦病毒。鄭浩等采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法檢測到豬流產(chǎn)胎兒病料中的JEV。 2血清學(xué)診斷技術(shù)2.1血清學(xué)方法1）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(complement fixation test,CFT)。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的特異性都較高，以可溶性豬乙腦抗原與相應(yīng)的抗體特異性結(jié)合成抗原-抗體復(fù)合物后，能與定量補(bǔ)體全部或部分結(jié)合，不再引起指示系統(tǒng)的紅細(xì)胞溶血，結(jié)果陽性；如果抗原與抗體不相適應(yīng)，則不能結(jié)合補(bǔ)體，補(bǔ)體反過來使指示系統(tǒng)的紅細(xì)胞溶血，結(jié)果陰性。2）中和試驗(yàn)(

4、serum neutralization test,SN)。利用乙腦病毒與其抗體結(jié)合，使其失去吸附細(xì)胞的能力，或抑制其侵入和脫殼，失去感染能力，通過比較免疫血清和正常血清中和后的毒價(jià)，進(jìn)而對乙腦病毒進(jìn)行判定。本試驗(yàn)在人方面應(yīng)用較多，但在診斷豬乙腦方面較少應(yīng)用。3）血凝抑制試驗(yàn)(HI)?？挂夷X病毒感染的免疫主要靠體液免疫。豬感染本病后3d即可產(chǎn)生特異性IgM抗體，2周后可以達(dá)到高峰，因此可以測定血清中IgM抗體，達(dá)到早期診斷的目的。該方法敏感性高且便捷，是早期診斷常用的方法之一，因其操作簡便對材料要求不高，故適用于基層使用。2.2免疫熒光技術(shù)(immunofluoresecence techni

5、que,IFT)免疫熒光技術(shù)利用化學(xué)方法將熒光素結(jié)合到提純的抗體分子上，形成的熒光抗體仍然具有與特異性抗原結(jié)合的能力，在熒光顯微鏡下可以對抗原進(jìn)行定位和定性的測定。目前擁有的免疫熒光技術(shù)包括直接免疫熒光法，間接免疫熒光法和微量免疫熒光法。間接免疫熒光法測豬乙腦特異性IgM抗體，具有快速敏感的特點(diǎn)。 /html/zongjie/ 2.3乳膠凝集試驗(yàn)(latex agglutination test,LAT)本試驗(yàn)以乳膠顆粒作為載體的一種間接凝集實(shí)驗(yàn)。在其表面吸附豬乙腦抗原，特異性抗體與之相結(jié)合產(chǎn)生凝集反應(yīng)。乳膠凝集試驗(yàn)試劑盒已廣泛應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中。2.4微孔雜交法(PCR-ELISA)該方法是通

6、過固定于微孔板的捕獲探針與PCR產(chǎn)物的某特定區(qū)域特異性雜交，使產(chǎn)物間接固定在微孔板上，再用生物素等非放射性標(biāo)記物標(biāo)記的檢測探針與產(chǎn)物的另一特異性雜交，漂洗后顯色即可判斷結(jié)果。徐曉立等利用該方法通過在5端標(biāo)記生物素，DNA的標(biāo)記、預(yù)雜交、標(biāo)記、雜交、酶聯(lián)顯色等步驟，初步建立了檢測乙腦的檢測方法，為乙腦的診斷提供了新的方法。 2.5免疫膠體金技術(shù)(immunocolloidal gold technique)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金標(biāo)記抗體檢測組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的相應(yīng)抗原或受體的方法。趙中夫等運(yùn)用該方法建立了一種可以用于現(xiàn)場快速檢測流行性乙型腦炎病毒的膠體金免疫層析方法?？赡苁浅杀驹虮痉椒ú⑽?/p>

7、在診斷豬乙腦上進(jìn)行廣泛應(yīng)用。2.6酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked-immunosorbent assay，ELISA)ELISA試驗(yàn)是將抗原或抗體吸附于固相載體上，在固相載體上進(jìn)行免疫酶染色，底物顯色后用肉眼或酶聯(lián)免疫測定儀判定結(jié)果的一種方法。這是一種敏感性高，特異性強(qiáng)且設(shè)備要求簡單的方法，也是當(dāng)前發(fā)展最快，應(yīng)用最廣的一種方法。目前針對豬乙腦病毒已建立并完善了檢測其抗體的間接ELISA方法。 2.7新型SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)（SPA-CoA）本試驗(yàn)是將豬乙腦病毒的主要抗原域-E與豬IgG-Fc片段在大腸桿菌中串聯(lián)表達(dá)的產(chǎn)物-Fc相融合。當(dāng)以融合蛋白E-Fc標(biāo)記含SPA的葡萄球菌后，S

8、PA-EFc的E蛋白部分與豬乙型腦炎病毒特異性抗體結(jié)合，就可產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)。該方法可快速、準(zhǔn)確的檢測豬乙型腦炎病毒，總體優(yōu)于ELISA方法。3分子生物學(xué)診斷方法3.1PCR診斷技術(shù)乙腦病毒基因組為單股正鏈RNA，故在分子學(xué)診斷中采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription PCR)即RT-PCR方法進(jìn)行核酸測序。隨著PCR技術(shù)的不斷發(fā)展與改進(jìn)，近年來又建立了反轉(zhuǎn)錄-嵌套式聚合酶鏈反應(yīng)（re-verse transcriptionnested polymerase chain reaction，RT-Nested PCR)方法、復(fù)合RT-PCR方法、熒光定量PCR等3.

9、2其他隨著分子生物學(xué)研究技術(shù)、診斷技術(shù)不斷發(fā)展，近年來又建立了豬乙腦病毒檢測的基因芯片技術(shù)、核酸探針檢測技術(shù)、核酸分子雜交等方法。4展望豬乙腦的診斷技術(shù)大體可以分為三大類：病毒的分離和鑒定、血清學(xué)診斷、分子生物學(xué)診斷技術(shù)。病毒的分離和鑒定方法是一種傳統(tǒng)的診斷方法，其對陽性結(jié)果的確定性較高，但費(fèi)時(shí)、耗力易受各種外界因素影響；血清學(xué)診斷技術(shù)也是一種傳統(tǒng)的診斷方法，隨著實(shí)驗(yàn)室技術(shù)的不斷發(fā)展，建立了一些以血清學(xué)為基礎(chǔ)的創(chuàng)新性的方法，這使血清學(xué)診斷技術(shù)的操作更簡便、應(yīng)用范圍更廣、可靠性更高；分子生物學(xué)診斷方法尤其是PCR診斷技術(shù)以其敏感性高、特異性強(qiáng)而廣泛用于實(shí)驗(yàn)室和臨床樣品中病毒的檢測術(shù)具有省時(shí)、省力、靈敏度高和特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在豬乙腦病毒感染的臨床診斷中必將得到更加廣泛的推廣應(yīng)用，但也僅限于有條件的場所應(yīng)用。因此，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況合理選擇適宜的診斷方法是正確進(jìn)行診斷，這樣可以保證診斷及時(shí)、診斷結(jié)果準(zhǔn)確，從而減少誤診帶來的經(jīng)濟(jì)損失、避免人畜共患的威脅。 我們相信隨著對乙腦診斷技術(shù)的不斷改進(jìn)和發(fā)展，我們定會(huì)凈化該疾病，最