食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)

1、8 微生物分離、純化與保藏技術(shù)微生物分離、純化與保藏技術(shù) 8.1 微生物菌種的分離純化微生物菌種的分離純化 模塊二：微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練 食品微生物食品微生物 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) （1 1）學(xué)習(xí)并掌握微生物分離純化的原理和分離純化的）學(xué)習(xí)并掌握微生物分離純化的原理和分離純化的 技術(shù)。技術(shù)。 （2 2）學(xué)習(xí)從樣品中分離、純化出所需菌株。）學(xué)習(xí)從樣品中分離、純化出所需菌株。 第一節(jié) 微生物菌種的分離純化 一、實(shí)訓(xùn)目的：一、實(shí)訓(xùn)目的

2、： 微生物分離、純化與保藏技術(shù)微生物分離、純化與保藏技術(shù) 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 二、實(shí)訓(xùn)原理 q 分離純化技術(shù)是微生物學(xué)中重要的基本技術(shù)之一。分離純化技術(shù)是微生物學(xué)中重要的基本技術(shù)之一。 q 分離分離純化：從混雜的微生物群體中獲得單一菌株純培養(yǎng)的方純化：從混雜的微生物群體中獲得單一菌株純培養(yǎng)的方 法。法。 q 純種（純培養(yǎng)）純種（純培養(yǎng)）：一株菌種或一個(gè)培養(yǎng)物中所有的細(xì)胞或孢：一株菌種或一個(gè)培養(yǎng)物中所有的細(xì)胞或孢 子都是由一個(gè)細(xì)胞

3、分裂、繁殖而產(chǎn)生的后代。子都是由一個(gè)細(xì)胞分裂、繁殖而產(chǎn)生的后代。 q 微生物的分離與純化技術(shù)的應(yīng)用：分離具有特殊功能的微生微生物的分離與純化技術(shù)的應(yīng)用：分離具有特殊功能的微生 物、優(yōu)良菌種及純化被污染的菌種等。物、優(yōu)良菌種及純化被污染的菌種等。 微生物菌種的分離純化 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料 n樣品：樣品： n細(xì)細(xì)菌：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌菌：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌 n放線菌：細(xì)黃鏈霉素放線菌：細(xì)黃鏈霉素

4、 n酵母菌：啤酒酵母酵母菌：啤酒酵母 n霉菌霉菌; ;黑曲霉黑曲霉 n培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：普通瓊脂斜面和平板，營(yíng)養(yǎng)肉湯普通瓊脂斜面和平板，營(yíng)養(yǎng)肉湯 n儀器與用具：儀器與用具：接種環(huán)、接種針、試管架、酒精燈、記號(hào)筆、接種環(huán)、接種針、試管架、酒精燈、記號(hào)筆、 標(biāo)簽、火柴、滅菌培養(yǎng)皿、無菌水、菌種等。標(biāo)簽、火柴、滅菌培養(yǎng)皿、無菌水、菌種等。 微生物菌種的分離純化 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) o 取樣取樣 o 制備稀釋液制備稀釋液 o 分離分離 四

5、、實(shí)訓(xùn)方法與步驟 0.1 ml 0.1 ml 0.1m l 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 微生物菌種的分離純化 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 1、傾注平板法、傾注平板法 分離：分離： 注意培養(yǎng)基溫度，混合均勻注意培養(yǎng)基溫度，混合均勻 先加菌先加菌 微生物菌種的分離純化 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微

6、生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 2、涂布分離法、涂布分離法 分離：分離： 微生物菌種的分離純化 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 1.斜線法斜線法 2.曲線法曲線法 3.方格法方格法 4.放射法放射法 5.四格法四格法 1) 倒平板，標(biāo)記培養(yǎng)基名稱，編號(hào)和實(shí)驗(yàn)日期。倒平板，標(biāo)記培養(yǎng)基名稱，編號(hào)和實(shí)驗(yàn)日期。 2）劃線方法）劃線方法 3、平板劃線法、平板劃線法 微生物菌種的分離純化 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)

7、技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 利用選擇培養(yǎng)基利用選擇培養(yǎng)基 l 創(chuàng)造只讓所需微生物生長(zhǎng)的條件，所需微生物有效地與其他創(chuàng)造只讓所需微生物生長(zhǎng)的條件，所需微生物有效地與其他 微生物競(jìng)爭(zhēng)，在生長(zhǎng)能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。微生物競(jìng)爭(zhēng)，在生長(zhǎng)能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。 l 所創(chuàng)造的條件包括選擇最適的

8、碳源、能源、溫度、光、所創(chuàng)造的條件包括選擇最適的碳源、能源、溫度、光、pH、 滲透壓和氫受體等。經(jīng)過多次重復(fù)移種，最后富集的菌株很滲透壓和氫受體等。經(jīng)過多次重復(fù)移種，最后富集的菌株很 容易在固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出單菌落。容易在固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出單菌落。 l 如分離專性寄生菌，須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群中，如分離專性寄生菌，須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群中， 使其大量生長(zhǎng)。多次重復(fù)移種便可得到純的寄生菌。使其大量生長(zhǎng)。多次重復(fù)移種便可得到純的寄生菌。 4 4、富集分離法、富集分離法 微生物菌種的分離純化 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生

9、物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) o 利用裝原培養(yǎng)基的試管作培養(yǎng)容器，在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，利用裝原培養(yǎng)基的試管作培養(yǎng)容器，在沸水浴中加熱數(shù)分鐘， 逐出培養(yǎng)基中的溶解氧?？焖倮鋮s，并進(jìn)行接種。逐出培養(yǎng)基中的溶解氧?？焖倮鋮s，并進(jìn)行接種。 o 加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面，使培養(yǎng)基與空氣隔絕。或在加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面，使培養(yǎng)基與空氣隔絕?；蛟?接種后，用接種后，用N N2 2或或COCO2 2取代培養(yǎng)基中的氣體，然后在火焰上試管取代培養(yǎng)基中的氣體，然后在火焰上試管 口密封?？诿芊?。 o 為了更有效地分離某些厭氧菌，可把所分離的樣品

10、接種于培為了更有效地分離某些厭氧菌，可把所分離的樣品接種于培 養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。 、厭氧法、厭氧法 微生物菌種的分離純化 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 五、實(shí)訓(xùn)結(jié)果五、實(shí)訓(xùn)結(jié)果 第一節(jié) 微生物菌種的分離純化 （一）菌落觀察（一）菌落觀察 菌落菌落大小大小形狀形狀表面表面邊緣邊緣濕潤(rùn)度濕潤(rùn)度透明度透明度色素色素菌名菌名 菌落菌落1 菌落菌落2 菌落菌落3

11、菌落菌落4 菌落菌落5 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 1 1、微生物菌落特征、微生物菌落特征 1 1）肉眼觀察）肉眼觀察 2 2）細(xì)致區(qū)分還要用顯微鏡，觀察細(xì)菌形態(tài)。）細(xì)致區(qū)分還要用顯微鏡，觀察細(xì)菌形態(tài)。 菌落菌落 濕潤(rùn)，正反面濕潤(rùn)，正反面 顏色一致顏色一致 干燥，正反、干燥，正反、 中央與邊緣中央與邊緣 小、扁平或隆起小、扁平或隆起 大、扁平或隆起大、扁平或隆起 小、而致密小、而致密 大、疏松、大、疏松、 顏色不一致顏色不一致 細(xì)菌細(xì)菌

12、 酵母菌酵母菌 霉菌霉菌 放線菌放線菌 微生物常規(guī)鑒定、篩選微生物常規(guī)鑒定、篩選 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 2 2、微生物生理生化反應(yīng)、微生物生理生化反應(yīng) 第二節(jié)第二節(jié) 微生物常規(guī)鑒定、篩選微生物常規(guī)鑒定、篩選 1 1）營(yíng)養(yǎng)要求：采用選擇培養(yǎng)基）營(yíng)養(yǎng)要求：采用選擇培養(yǎng)基 2 2）酶：產(chǎn)酶種類和反應(yīng)特性）酶：產(chǎn)酶種類和反應(yīng)特性 3 3）代謝產(chǎn)物：種類，產(chǎn)量，顯色反應(yīng)等）代謝產(chǎn)物：種類，產(chǎn)量，顯色反應(yīng)等 （二）微生物常規(guī)鑒定（二）微生物常

13、規(guī)鑒定 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 思考與討論思考與討論 微生物菌種的分離純化微生物菌種的分離純化 1 1如何確定平板上某單個(gè)菌落是否為純培養(yǎng)？如何確定平板上某單個(gè)菌落是否為純培養(yǎng)？ 2. 2. 接種環(huán)（針）接種前后燒灼的目的是什么？為什接種環(huán)（針）接種前后燒灼的目的是什么？為什 么在接種前一定要將其冷卻？如何判斷燒灼過的接種么在接種前一定要將其冷卻？如何判斷燒灼過的接種 環(huán)已冷卻？環(huán)已冷卻？ 8 微生物分離、純化與保藏技術(shù)微生物分離、

14、純化與保藏技術(shù) 8.2 微生物菌種的保藏微生物菌種的保藏 模塊二：微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 o 菌種退化：菌種在自發(fā)突變的影響下，引起某些優(yōu)良特性菌種退化：菌種在自發(fā)突變的影響下，引起某些優(yōu)良特性 降低或喪失的現(xiàn)象。降低或喪失的現(xiàn)象。 n 生長(zhǎng)速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少；生長(zhǎng)速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少； n 抵抗力、抗不良環(huán)境能力減弱等。抵抗力、抗不良環(huán)境能力減弱等。 n

15、代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力或其對(duì)宿主寄生能力下降；代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力或其對(duì)宿主寄生能力下降； o 菌種衰退原因：基因突變菌種衰退原因：基因突變 一、菌種退化一、菌種退化 菌種保藏與復(fù)壯工作菌種保藏與復(fù)壯工作:為菌種創(chuàng)造良好條件，減緩菌種衰退為菌種創(chuàng)造良好條件，減緩菌種衰退 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) o 菌種退化：菌種在自發(fā)突變的影響下，引起某些優(yōu)良特性降低或菌種退化：菌種在自發(fā)突變的影響下，引起某些優(yōu)良特性降低或 喪失的現(xiàn)象。喪失的現(xiàn)象。 o 菌

16、種衰退原因：基因突變菌種衰退原因：基因突變 一、菌種退化一、菌種退化 菌落和細(xì)胞形態(tài)的改變；菌落和細(xì)胞形態(tài)的改變； 生長(zhǎng)速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少；生長(zhǎng)速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少； 抵抗力、抗不良環(huán)境能力減弱等。抵抗力、抗不良環(huán)境能力減弱等。 代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力或其對(duì)宿主寄生能力下降；代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力或其對(duì)宿主寄生能力下降； 菌種保藏與復(fù)壯工作菌種保藏與復(fù)壯工作:為菌種創(chuàng)造良好條件，減緩菌種衰退為菌種創(chuàng)造良好條件，減緩菌種衰退 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微

17、生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 二、菌種的復(fù)壯二、菌種的復(fù)壯 ( (一一) )菌種的提純菌種的提純 ( (二二) )通過寄主體進(jìn)行復(fù)壯通過寄主體進(jìn)行復(fù)壯 ( (三三) )淘汰已衰退的個(gè)體淘汰已衰退的個(gè)體 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) (一一)菌種的提純菌種的提純 o 從已衰退的菌種中，通過分離純化，將尚未退化的個(gè)體分離從已衰退的菌種中，通過分離純化，將尚未退化的個(gè)體分離 出

18、來，以恢復(fù)和建立具有原來生產(chǎn)性狀的群體，繼續(xù)供科研出來，以恢復(fù)和建立具有原來生產(chǎn)性狀的群體，繼續(xù)供科研 及生產(chǎn)使用。及生產(chǎn)使用。 o 菌種提純：菌種提純： n 只要求達(dá)到菌落純化的水平，通過稀釋平板法、劃線法、只要求達(dá)到菌落純化的水平，通過稀釋平板法、劃線法、 表面涂血法等常規(guī)操作法，適用于退化不太嚴(yán)重的情況。表面涂血法等常規(guī)操作法，適用于退化不太嚴(yán)重的情況。 n 要求達(dá)到要求達(dá)到“細(xì)胞純細(xì)胞純”的水平，采用單胞分離法，也可二者的水平，采用單胞分離法，也可二者 結(jié)合，先用前一種方法獲得較純的菌種后再采用單胞分離結(jié)合，先用前一種方法獲得較純的菌種后再采用單胞分離 法進(jìn)一步純化。法進(jìn)一步純化。 菌

19、種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) ( (二二) )通過寄主體進(jìn)行復(fù)壯通過寄主體進(jìn)行復(fù)壯 o 對(duì)于寄生性微生物如蘇云金桿菌、白僵菌、多角體病毒對(duì)于寄生性微生物如蘇云金桿菌、白僵菌、多角體病毒 等，由于長(zhǎng)期使用，其毒力下降，導(dǎo)致殺蟲效率降低及等，由于長(zhǎng)期使用，其毒力下降，導(dǎo)致殺蟲效率降低及 衰退現(xiàn)象。衰退現(xiàn)象。 o 可以用菌種去感染菜青蟲幼蟲等，然后從致死的蟲體上可以用菌種去感染菜青蟲幼蟲等，然后從致死的蟲

20、體上 重新分離，經(jīng)過幾次重復(fù)感染與分離，就可以逐步恢復(fù)重新分離，經(jīng)過幾次重復(fù)感染與分離，就可以逐步恢復(fù) 和提高毒力。和提高毒力。 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) ( (三三) )淘汰已衰退的個(gè)體淘汰已衰退的個(gè)體 o 通過物理、化學(xué)的方法處理菌體通過物理、化學(xué)的方法處理菌體( (或孢子或孢子) )，使大部，使大部 分死亡分死亡(80%(80%以上以上) )，存活的菌多為生長(zhǎng)健壯者，可從，存活的菌多為生

21、長(zhǎng)健壯者，可從 中選出優(yōu)良菌種來。中選出優(yōu)良菌種來。 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 三、菌種保藏三、菌種保藏 o 菌種保藏：是使微生物種子經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間保存后，盡可能保菌種保藏：是使微生物種子經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間保存后，盡可能保 持其原來性狀和活力不變，不死亡、不污染持其原來性狀和活力不變，不死亡、不污染 （一）菌種保藏的目的（一）菌種保藏的目的 n保持其原有性狀和活力的保持其原有性狀和活力的穩(wěn)定；穩(wěn)定； n確

22、保菌種確保菌種不死亡、不變異、不被污染不死亡、不變異、不被污染； 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) o 保藏菌種的選取：選取優(yōu)良的純菌種，最好是用其分生孢保藏菌種的選取：選取優(yōu)良的純菌種，最好是用其分生孢 子或芽孢等休眠體，在其休眠和停止生長(zhǎng)的條件下保藏。子或芽孢等休眠體，在其休眠和停止生長(zhǎng)的條件下保藏。 o 根據(jù)菌種的生理、生化特點(diǎn)根據(jù)菌種的生理、生化特點(diǎn)，人為地，人為地創(chuàng)造低溫、干燥、創(chuàng)造低溫、干

23、燥、 缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)條件，使菌種的代謝活動(dòng)和生長(zhǎng)繁殖處條件，使菌種的代謝活動(dòng)和生長(zhǎng)繁殖處 于受抑制的休眠狀態(tài)。于受抑制的休眠狀態(tài)。 （二）菌種保藏依據(jù)：（二）菌種保藏依據(jù)： 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 斜面低溫保藏法斜面低溫保藏法 砂土管保藏法砂土管保藏法 石蠟油封藏法石蠟油封藏法 冷凍真空干燥保藏法冷凍真空干燥保藏法 濾紙保藏法濾紙保

24、藏法 甘油懸液保藏法甘油懸液保藏法 液氮超低溫保存液氮超低溫保存 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 1.1.斜面低溫保藏法斜面低溫保藏法常用保藏法常用保藏法 菌種接種斜面培養(yǎng)基菌種接種斜面培養(yǎng)基生長(zhǎng)健壯的菌種生長(zhǎng)健壯的菌種 4左右的冰箱中保藏左右的冰箱中保藏定期移植至新培養(yǎng)基定期移植至新培養(yǎng)基 繼續(xù)保藏繼續(xù)保藏 適用菌種的短期保藏適用菌種的短期保藏 一般可保存一般可保存1 16 6個(gè)月左右。個(gè)月左右。

25、 特點(diǎn)特點(diǎn) ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 簡(jiǎn)便易行簡(jiǎn)便易行 容易推廣容易推廣 存活率高；存活率高； 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): : 保藏期短保藏期短 傳代次數(shù)多傳代次數(shù)多 易發(fā)生變異易發(fā)生變異 易被污染易被污染 缺點(diǎn)缺點(diǎn): : 一些貴重菌株及生產(chǎn)優(yōu)良菌株不宜用此法保藏。一些貴重菌株及生產(chǎn)優(yōu)良菌株不宜用此法保藏。 ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 菌種的保藏

26、與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 沙土管的準(zhǔn)備：沙土管的準(zhǔn)備： o 河河(海海)沙過沙過24目篩，目篩，10鹽酸浸泡鹽酸浸泡24h，去鹽酸，水沖洗至，去鹽酸，水沖洗至 pH中性，去水烘干或曬干。取菜果園土粉碎過篩，烘干。中性，去水烘干或曬干。取菜果園土粉碎過篩，烘干。 o 沙土按沙土按3：2或或1：1混合裝入指形管或高混合裝入指形管或高100mm，直徑為，直徑為 10mm的小試管，高約的小試管，高約1cm(約約

27、2g)，塞棉塞，塞棉塞121濕熱滅菌濕熱滅菌1h， 也可也可1702h干熱滅菌干熱滅菌(或蒸汽三次間歇滅菌或蒸汽三次間歇滅菌)，烘干。，烘干。 o 經(jīng)肉湯檢查確實(shí)證明無菌即可使用。經(jīng)肉湯檢查確實(shí)證明無菌即可使用。 2 2、沙土管保藏法、沙土管保藏法 ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 菌種菌種斜面產(chǎn)孢斜面產(chǎn)孢孢子懸浮液（孢子懸浮液（106/ml ） 加入沙土

28、管（加入沙土管（ 0.30.5ml/管）管）減壓干燥減壓干燥 密封密封4低溫保藏低溫保藏 沙土管保藏流程：沙土管保藏流程： ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 砂土管保藏法的特點(diǎn)砂土管保藏法的特點(diǎn) 包藏初期，菌死亡率高，后逐漸減慢，存活下來的孢子在以后包藏初期，菌死亡率高，后逐漸減慢，存活下來的孢子在以后 保存期間穩(wěn)定性較好。保存期間穩(wěn)定性較好。 ( (三三

29、) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： o 適用于產(chǎn)孢子的微生物及形成芽孢的細(xì)菌適用于產(chǎn)孢子的微生物及形成芽孢的細(xì)菌 o 對(duì)于一些對(duì)干燥敏感的細(xì)菌及酵母則不適用。對(duì)于一些對(duì)干燥敏感的細(xì)菌及酵母則不適用。 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 砂土管保藏法的優(yōu)點(diǎn)砂土管保藏法的優(yōu)點(diǎn) n具低溫、干燥、隔氧和少營(yíng)養(yǎng)物等條件具低溫、干燥、隔氧和少營(yíng)養(yǎng)物等條件 n保藏期較長(zhǎng)、效果較好。某些抗生素產(chǎn)生菌保藏期保藏期較長(zhǎng)、效

30、果較好。某些抗生素產(chǎn)生菌保藏期 可達(dá)可達(dá)1818年年( (土霉素和鏈霉素產(chǎn)生菌土霉素和鏈霉素產(chǎn)生菌) )到到2222年年( (新霉素產(chǎn)新霉素產(chǎn) 生菌生菌) )，但對(duì)利福霉素、卡那霉素、四環(huán)素等容易產(chǎn)，但對(duì)利福霉素、卡那霉素、四環(huán)素等容易產(chǎn) 生變異的菌種，就不適合作長(zhǎng)期的沙土管保存。生變異的菌種，就不適合作長(zhǎng)期的沙土管保存。 n微生物移接方便，經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便。微生物移接方便，經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便。 ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品

31、微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 3 3、礦油保藏法（石蠟油低溫保藏法）、礦油保藏法（石蠟油低溫保藏法） o 長(zhǎng)好的斜面菌長(zhǎng)好的斜面菌覆蓋滅菌液體石蠟覆蓋滅菌液體石蠟 菌體與空氣隔絕菌體與空氣隔絕 直直 立保藏于立保藏于-4-444低溫或室溫低溫或室溫 o 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： n 斜面培養(yǎng)菌種，斜面不宜過長(zhǎng)；斜面培養(yǎng)菌種，斜面不宜過長(zhǎng)； n 純凈優(yōu)質(zhì)石蠟油，置三角燒瓶經(jīng)純凈優(yōu)質(zhì)石蠟油，置三角燒瓶經(jīng)121121高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌1 12h2h， 放烘箱中放烘箱中(160(160左右左右) )干熱處理，除滅菌時(shí)滲入水分，待石蠟干熱處理，除滅菌時(shí)滲入水分，待石蠟 油變

32、清澈透明后冷卻即可加入斜面，斜面上不能出現(xiàn)氣泡，油變清澈透明后冷卻即可加入斜面，斜面上不能出現(xiàn)氣泡， 液蠟添加量以高出斜面頂部約液蠟添加量以高出斜面頂部約1cm1cm左右為宜。左右為宜。 ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 礦油保藏法礦油保藏法特點(diǎn)：特點(diǎn)： o 適用于各大類不產(chǎn)孢子的微生物菌種的中期保藏適用于各大類不產(chǎn)孢子的微生物菌種的中期保藏 o 不適用于

33、能分解烴類的菌種的保藏。不適用于能分解烴類的菌種的保藏。 o 主要保藏措施是低溫、阻氧。主要保藏措施是低溫、阻氧。 o 一般可保存一般可保存1 12 2年左右。年左右。 ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 4 4、真空冷凍干燥法、真空冷凍干燥法 o 低溫下快速將細(xì)胞凍結(jié)，然后在真空條件下干燥、封裝，低溫下快速將細(xì)胞凍結(jié)，然后在真空條件下干燥、封裝， 隔絕空氣

34、，微生物的生長(zhǎng)和酶活動(dòng)停止。達(dá)到長(zhǎng)期保藏的隔絕空氣，微生物的生長(zhǎng)和酶活動(dòng)停止。達(dá)到長(zhǎng)期保藏的 目目 ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) o 真空冷凍干燥法優(yōu)點(diǎn)：真空冷凍干燥法優(yōu)點(diǎn)： n 具低溫、干燥、除氧主要因素，適用于除絲狀真菌的菌具低溫、干燥、除氧主要因素，適用于除絲狀真菌的菌 絲體外的其它各類微生物。絲體外的其它各類微生物。 n 菌種存活時(shí)間長(zhǎng)、效果好

35、，一般可保存菌種存活時(shí)間長(zhǎng)、效果好，一般可保存5 5年以上，有的年以上，有的 可保藏可保藏1515年以上不發(fā)生變異。年以上不發(fā)生變異。 n 體積小、不易污染、便于運(yùn)輸，為最廣泛的菌種保藏法。體積小、不易污染、便于運(yùn)輸，為最廣泛的菌種保藏法。 ( (三三) )菌種保藏方法：菌種保藏方法： v凍干保藏的效果因微生物種類而異，一般是細(xì)菌放線菌真菌凍干保藏的效果因微生物種類而異，一般是細(xì)菌放線菌真菌 藻類，而菌絲體不宜用此法保存。藻類，而菌絲體不宜用此法保存。 菌種的保藏與菌種管理菌種的保藏與菌種管理 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 冷凍真空干燥操作流程冷凍真空

36、干燥操作流程 安培瓶安培瓶 配制保護(hù)劑配制保護(hù)劑 滅菌滅菌 菌種菌種 培養(yǎng)培養(yǎng) 制備菌懸液制備菌懸液 分裝安培瓶分裝安培瓶 洗凈烘干洗凈烘干 裝標(biāo)簽裝標(biāo)簽 滅菌滅菌 預(yù)凍預(yù)凍 真空干燥真空干燥 測(cè)定水分測(cè)定水分 熔封管口熔封管口 檢查真空度檢查真空度 保藏保藏 無菌血清或脫脂牛乳無菌血清或脫脂牛乳 -40冰箱速凍結(jié)冰箱速凍結(jié)2060min 1%3% 微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)技能訓(xùn)練模塊 8 8 微生物分離、純化和保藏技術(shù)微生物分離、純化和保藏技術(shù) 食品微生物食品微生物8微生物分離純化與保藏技術(shù)微生物分離純化與保藏技術(shù) 5 5、濾紙保藏法、濾紙保藏法 方法：方法：3 3# #濾紙剪成濾紙剪成5mm5mm50mm50mm小條，放入干燥培養(yǎng)皿中滅菌。小條，放入干燥培養(yǎng)