出口水果中赤霉素殘留量檢驗(yàn)方法

1、出口水果中赤霉素殘留量檢驗(yàn)方法1. 適用范圍 本方法適用于出口柑桔中赤霉素殘留量的檢驗(yàn)。2. 原理概要 以丙酮提取樣品中赤霉素，然后用乙酸乙酯提取，再用緩沖溶液反提取后， 在薄層層析板上除去干擾物質(zhì)，最后用熒光分光光度法測(cè)定。3. 主要試劑和儀器3.1. 主要試劑 丙酮：分析純； 乙酸乙酯：分析純； 硫酸：優(yōu)級(jí)純； 硫酸溶液： 50%（V/ V） ； 乙醇：分析純； 甲醇：分析純； 緩沖溶液 （pH7） ：溶解 6.7g 分析純磷酸二氫鉀和 1.2g 分析純氫氧化鈉在 1OOOmL蒸餾水中； 展開劑：氯仿 -乙酸乙酯 -冰乙酸 （10 41.6） ； 乙醇-硫酸溶液： （91） ；硫酸溶液：8

2、5%VV），將85mL硫酸緩慢加入15mL蒸餾水中； 硅膠G:薄層層析用； 赤霉素標(biāo)準(zhǔn)品：純度95%赤 霉 素 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液： 準(zhǔn) 確 稱取 適 量 的赤霉 素 標(biāo) 準(zhǔn) 品 ， 用 甲醇配 成 濃度 1.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，根據(jù)需要再配成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。3.2. 儀器熒光分光光度計(jì)：備有10mm石英池；錐形瓶：具磨口塞， 500mL； 組織搗碎機(jī)；布氏漏斗；振蕩機(jī)；圓底燒瓶： 1000mL；酸度計(jì)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器； 分液漏斗： 250mL； 渦旋混合器；離心管：具磨口塞， 5mL、10mL； 紫外燈：發(fā)射波長(zhǎng) 365nm； 硅膠薄層板的涂布：在20cmX 20cm玻璃層析板上將

3、硅膠 G（硅膠-水=1 + 3） 涂布成0.3mm的薄層板，自然干燥30min。于110C烘箱中活化1h,冷卻后放置 干燥器中備用；微量注射器：25卩L。4. 試樣的抽取與制備4.1. 檢驗(yàn)批 以不超過 1500 件為一檢驗(yàn)批。同一檢驗(yàn)批的商品應(yīng)具有相同的特征， 如包裝、標(biāo)記、產(chǎn)地、規(guī)格和等級(jí)等。4.2. 抽樣數(shù)量批量，件最低抽樣數(shù)，件12526 1001015101 25025115004.3. 抽樣方法按規(guī)定的抽樣件數(shù)隨機(jī)抽取，逐件開啟。每件至少取500g。作為原始樣品， 原始樣品總量不得少于2kg。加封后，標(biāo)明標(biāo)記，及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室。4.4. 試樣制備將所取混合原始樣品縮分出1kg，取可食部

4、分，經(jīng)組織搗碎機(jī)搗碎，均分成 兩份，裝入潔凈容器內(nèi)，作為試樣。密封，并標(biāo)明標(biāo)記。4.5. 試樣保存將試樣于18C以下冷凍保存。 注：在抽樣和制樣的操作過程中，必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。5. 過程簡(jiǎn)述5.1. 提取稱取試樣100g（精確到0.1g）于錐形瓶?jī)?nèi)，加20mL蒸餾水和125mL丙酮，振 蕩30min?；旌衔锝?jīng)布氏漏斗抽濾；試樣和殘?jiān)呕劐F形瓶中，再用 125mL丙酮 重復(fù)振蕩15mi n，再以鋪有新濾紙的布氏漏斗抽濾。用 50mL丙酮洗滌錐形瓶并 倒在濾渣上，抽濾，再用100mL丙酮洗滌殘?jiān)⑦^濾。5.2. 凈化將丙酮-水提取液收集于1 OOOmL圓底燒瓶中，在30C

5、水浴上，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 器減壓蒸發(fā)至丙酮完全除去。剩下的試樣水溶液用折疊濾紙過濾，用50mL蒸餾水洗滌燒瓶并通過同一濾器過濾，再用2X 10mL蒸餾水洗滌濾紙。將濾液轉(zhuǎn)入燒 杯中，滴加50%勺硫酸溶液，調(diào)至pH為2.5 0.2。將樣液定量轉(zhuǎn)入250mL分液 漏斗中，以少量蒸餾水洗滌燒杯。然后用3X 50mL乙酸乙酯提取，收集乙酸乙酯 提取液于第二個(gè)分液漏斗中。再用 3X 50mLpH7的緩沖溶液提取。棄去乙酸乙酯 相。收集緩沖溶液提取液于 250mL燒杯中，用50%勺硫酸溶液調(diào)至pH2.5 0.2， 再將溶液轉(zhuǎn)入第三個(gè)250mL分液漏斗中，用3X 50mL乙酸乙酯提取。收集乙酸乙 酯相，并通過折疊

6、濾紙濾入 250mL圓底燒瓶中，于30 E水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。 準(zhǔn)確加入1.0mL乙酸乙酯以溶解殘留物。立即轉(zhuǎn)入5mL離心管，冰浴冷卻5min， 以 2500r/min 離心 5min。5.3. 薄層分離在制備好的硅膠薄層板上，離底部2cm的線上分別點(diǎn)加25卩L樣液和10卩L 赤霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液（10卩L/mL）。自然干燥后放入裝有新配制的氯仿-乙酸乙酯-冰乙 酸（10 + 4+ 1.6）展開劑的密閉槽內(nèi)，讓展開劑上行展開15cm，取出。自然干燥后，用玻璃板遮住薄層展開后的樣品部分，用乙醇 - 硫酸（91）溶液噴撒薄層展 開后的標(biāo)準(zhǔn)樣品部位，于100C烘箱中加熱10min。冷卻后，在暗室的紫外燈（

7、發(fā) 射波長(zhǎng)365nm）下觀察，以此來對(duì)照標(biāo)出樣品部分相應(yīng)的赤霉素組分區(qū)。將樣品 的赤霉素組分區(qū)域刮下，轉(zhuǎn)入 10mL離心管中，加1mL蒸餾水，混合、溶解，置 冰浴中冷卻5min。同時(shí)吸取2.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液（含赤霉素2卩g）到第二個(gè)試管中， 冰浴冷卻5min，在每個(gè)試管中加入 5mL已冷卻的85%酸，繼續(xù)在冰浴中冷卻10mi n。取出試管，室溫靜置1h。供熒光分光光度法測(cè)定。54測(cè)定541.熒光條件激發(fā)波長(zhǎng)：416 nm發(fā)射波長(zhǎng)：462nm5.4.2. 熒光測(cè)定依次放入儀器內(nèi),分別將新制備的樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液裝入清潔的石英池中, 測(cè)定每個(gè)溶液的熒光強(qiáng)度。5.5. 空白試驗(yàn)除不加樣品外，按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。6. 結(jié)果計(jì)算按下式計(jì)算：x=E c VEs m式中：X試樣中赤霉素殘留量，mg/kg；E樣液中赤霉素的熒光強(qiáng)度；Es標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中赤霉素的熒光強(qiáng)度；c標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中赤霉素的濃度，卩g/mL；V樣液最終定容體積；m最終樣液中所代表的