顯微復(fù)習(xí)題(最終答案全版)

1、顯微技術(shù)包括哪些部分內(nèi)容？顯微技術(shù)：利用光學(xué)系統(tǒng)或電子光學(xué)系統(tǒng)設(shè)備，觀察肉眼所不能分辨的微小物體形態(tài)結(jié)構(gòu)及其特性的技術(shù)。包括1各種顯微鏡的基本原理操作和應(yīng)用的技術(shù)2顯微鏡樣品的制備技術(shù)3觀察結(jié)果的記錄分析和處理的技術(shù)。固定時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng)1注意固定材料本身的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，選用適合的固定液，固定時(shí)間根據(jù)材料特點(diǎn)增減2固定微小材料直接投入固定液中，對(duì)于較大材料先將其解剖成較小材料迅速投入固定液，完成殺生固定作用3固定體積較大材料時(shí)，會(huì)出現(xiàn)外部固定過(guò)度，而內(nèi)部未固定好，考慮選用滲透快的固定液（乙酸乙醇或苦味酸乙醛混合液），加用超聲波發(fā)生器能達(dá)到迅速固定目的4對(duì)多毛的芽或根莖的固定時(shí)，先投入乙酸乙醇液浸泡數(shù)分

2、鐘，然后再入納瓦申固定液或其他固定液完成固定。同時(shí)，要進(jìn)行抽氣，另可用超聲波發(fā)生器進(jìn)行固定抽氣5一般固定液多為酸性固定影像，鹽基性固定影像較少，除考慮影像外，還應(yīng)在脫水劑、滲入劑方面進(jìn)行觀察6固定劑的濃度不可忽視7固定材料的記錄：固定標(biāo)本瓶上必須貼上標(biāo)簽，用筆書(shū)寫(xiě)以下內(nèi)容：編號(hào)，采集時(shí)間、地點(diǎn)、處理者的姓名簡(jiǎn)寫(xiě)，固定液的名稱，保存液的名稱等 常用的染色劑類型根據(jù)來(lái)源：天然染料和人工染料根據(jù)化學(xué)性質(zhì)：堿性染料酸性染料中興染料根據(jù)染色性能：核染料細(xì)胞質(zhì)染料細(xì)胞壁染料組織化學(xué)染料熒光染料活體染料 注意事項(xiàng)1應(yīng)根據(jù)觀察目的、樣品結(jié)構(gòu)、性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)娜旧椒?材料從某一溶液進(jìn)入染色液時(shí)，兩種溶液的濃度必

3、須相同3酸性染料著色速度快于堿性染料，雙重染色時(shí)，先用堿性染料染色，再用酸性4染色寧可深，因?yàn)樗春兔撍畷?huì)使顏色變淺5用分色劑時(shí)，要在低倍顯微鏡下隨時(shí)觀察，分色適度即徹底洗凈6染色的時(shí)間不是一成不變，要根據(jù)染色劑的性質(zhì)，配方，切片的厚薄，材料的結(jié)構(gòu)等在使用時(shí)靈活掌握 常用的透明劑透明劑都是石蠟溶劑，不能與水混合例如：二甲苯氯仿冬青油 浸蠟1浸蠟瓶放在溫箱中過(guò)夜時(shí)，材料不能太多2浸蠟一般從低溫到高溫，從低濃度到高濃度，使石蠟慢慢滲入組織內(nèi)，將透明劑替代出來(lái)包埋1注意安全防火防燙傷2包埋速度不能太慢以免石蠟?zāi)?包埋石蠟溫度不能太高以免損傷材料4蠟中出現(xiàn)氣泡可將鑷子燒熱燙去5未冷卻前不能將蠟盒移入

4、水中6應(yīng)注意包埋材料的位置、方向，要有利于切割切片及研究7熔蠟時(shí)人不能離開(kāi)，如果石蠟出現(xiàn)冒煙情況時(shí)，不要揭開(kāi)蠟杯蓋，要及時(shí)切斷電源 徒手切片方法制片過(guò)程。取樣固定水洗切片染色脫水透明封藏1取材：用FAA固定或不固定2徒手切片的步驟a取一套小培養(yǎng)皿，皿內(nèi)盛有清水b切片c挑選好的切片3染色與保存a臨時(shí)裝片：加1d1%番紅水溶液，短期保存則加1d10%的甘油使切片更透明，避免失水變干變黑b永久存片：染色 滑走切片法制片過(guò)程特殊步驟過(guò)程1固定切片2固定樣品3調(diào)整材料的高度4調(diào)節(jié)切片的厚度5切片6每次切片結(jié)束后，要用軟布將切片機(jī)擦拭干凈，滑槽內(nèi)切下的碎屑也需清除，將切片刀取下擦干凈并滴注機(jī)油后放入刀盒保

5、存 特殊步驟：材料若太堅(jiān)硬，需經(jīng)過(guò)軟化處理 壓片法制片過(guò)程1取材和前處理：種子萌發(fā)后待初生根長(zhǎng)到1cm長(zhǎng)左右，切取根尖前端5mm置于裝有前處理液（秋水仙素、對(duì)二氯苯、a-溴代萘、8-羥基喹啉）的指形瓶中，處理35h2固定：將材料固定于乙醇：乙酸（3:1）固定液0.5h以上3水洗：將材料用自來(lái)水浸泡、清洗20min以上，期間要換水4酶解：用纖維素酶和果膠酶各2.5%的混合酶液對(duì)材料酶解30min5水洗：用自來(lái)水短暫沖洗，洗去酶液6酸解：將材料用1mol/L HCl在60攝氏度水浴中酸解10min7水洗、壓片：棄去鹽酸，加清水于材料中，浸泡20min以上，卡寶品紅染色，壓片鏡檢 倒置顯微鏡的特點(diǎn)1

6、物鏡與照明系統(tǒng)顛倒2用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，通常具有相差或DIC物鏡，有的還具有熒光裝置 透射電鏡中樣品處理方法1加入物鏡光闌2提高樣品中某些部分的原子序數(shù)Z3選用較低的加速電壓4暗場(chǎng)顯微法5適當(dāng)?shù)那衅穸认瀻Р恢?，成彎曲狀：主要原因是蠟塊切面的上下邊緣不平行，將蠟塊邊緣修片即可2切片縱裂：主要原因是刀有缺口或者劈刀時(shí)間太短，組織軟化不夠等。可移動(dòng)刀刃位置或者劈刀、軟化組織（取下臺(tái)木，將蠟塊倒放在有水的培養(yǎng)皿中浸泡半天，使組織軟化）后再切片3材料破碎：主要原因是脫水不徹底，浸蠟不完全，石蠟沒(méi)有完全填充植物組織而形成空洞，須重做材料 石蠟切片法的優(yōu)點(diǎn)1易操作2能把材料切均勻，極?。?12mm）的切

7、片3切下的單個(gè)蠟片可以連接形成蠟帶，有利于作連續(xù)切片，是其他制片法難以達(dá)到的4可永久保存 解離法制片的過(guò)程1 解離：將被檢查的木質(zhì)部切成火柴梗粗細(xì)，長(zhǎng)約12cm的小條2水洗：尼龍紗網(wǎng)濾去酸液，換水浸泡數(shù)次至酸液除盡3保存：用玻璃棒搗散組織，轉(zhuǎn)入離心管離心，棄去上清液，加入50%乙醇保存4染色：取少量木質(zhì)部解離組織，置于1%番紅水溶液染5min5水洗：數(shù)次去浮色6粘片：用玻璃棒蘸取含有木質(zhì)部細(xì)胞的水液，均勻涂布在載玻片上，將載玻片平放于攤片盤中，置于36C溫箱中烘干7封片：二甲苯過(guò)一遍，加拿大樹(shù)膠封片 生物制片1臨時(shí)制片法：制作用于臨時(shí)觀察，不需要長(zhǎng)期保存(臨時(shí)裝片徒手切片冰凍切片木材切片)2永

8、存片制片法：制片可長(zhǎng)期保存（石蠟切片半薄切片徒手切片、木材切片超薄切片） 切片法徒手切片石蠟切片半薄切片冰凍切片振動(dòng)切片滑走切片超薄切片非切片離析法涂片法、壓片法整體制片法掃描電鏡樣品制備 染色的染料果膠質(zhì)：釕紅染色法胞間層染成紅色 纖維素：氯化鋅-磺液法藍(lán)紫色 ； 碘-磷酸法深紫色 木質(zhì)素：間苯三酚紅色； 苯胺反應(yīng)法鮮黃色；番紅法紅色 角質(zhì)和栓質(zhì)：蘇丹III（IV）-紅色；磺-氯化鋅黃色或淺褐色變?yōu)樽霞t色 檢查淀粉等的試劑淀粉：碘-碘化鉀溶液藍(lán)色脂肪：蘇丹III（IV）-脂肪被染成黃色至紅色 菊糖：1、1d2%a-萘酚95%乙醇+1d濃硫酸-紫色反應(yīng)2、15%20%麝香草酚乙醇+1d濃硫酸-

9、紅色反應(yīng) 蛋白質(zhì)：汞-溴酚藍(lán)法蛋白質(zhì)鮮藍(lán)色；碘-碘化鉀蛋白質(zhì)黃色，淀粉藍(lán)色 透射電子顯微鏡的特點(diǎn)1、使用電子束作為光源2、使用電磁場(chǎng)作為透鏡3、電鏡標(biāo)本需制作成厚度約50mm的超薄切片。掃描電子顯微鏡的特點(diǎn)1能夠直接和多角度觀察樣品表面的結(jié)構(gòu)2樣品制備過(guò)程簡(jiǎn)單，不用切成薄片3景深大，圖像富有立體感4圖像的放大范圍廣，分辨率也比較高5在觀察形貌的同時(shí)，還可利用從樣品發(fā)出的其他信號(hào)作微區(qū)成分分析6電子束對(duì)樣品的損傷與污染程度小 熒光顯微鏡的原理特點(diǎn)使用注意事項(xiàng)原理利用一定波長(zhǎng)的激發(fā)光（紫外線）對(duì)樣品進(jìn)行激發(fā)，使之產(chǎn)生一定波長(zhǎng)的熒光，然后再經(jīng)顯微鏡成像系統(tǒng)放大來(lái)鏡檢。特點(diǎn)1光源為短波光2有兩個(gè)特殊的

10、濾光片3照明方式通常為落射式4靈敏度高注意事項(xiàng)1盡量縮短觀察時(shí)間，避免熒光的衰減和消失2因熒光較弱，觀察應(yīng)在較暗的室內(nèi)進(jìn)行3使用遮光板防止紫外線損傷視網(wǎng)膜4制片過(guò)程中，盡量避免使用能產(chǎn)生熒光的試劑5切片不能太厚體視顯微鏡的特點(diǎn)1最大倍數(shù)僅為200倍左右2工作距離長(zhǎng)，便于實(shí)際操作3成像為三維空間的立體視覺(jué)圖像視場(chǎng)直徑大焦深大 暗場(chǎng)顯微鏡的特點(diǎn)原理根據(jù)光學(xué)上的丁達(dá)爾現(xiàn)象設(shè)計(jì)。特點(diǎn)利用暗視野進(jìn)行觀察，與明視野不同，照明光線通過(guò)暗視野聚光鏡后，光線不是直接進(jìn)入物鏡，而是由標(biāo)本表面的反射光線 或衍射光線形成圖像，結(jié)果背景變暗，標(biāo)本發(fā)亮 顯微鏡的常用附件游標(biāo)尺目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺 怎樣的照片才算是好照片

11、1 一幅好照片要有一個(gè)鮮明的主題（有時(shí)也稱之為題材）?；蚴潜憩F(xiàn)一個(gè)人，或是表現(xiàn)一件事物，甚至可以表現(xiàn)該題材的一個(gè)故事情節(jié)。主題必須明確，毫不含糊，使任何觀賞者一眼就能看得出來(lái)2 一幅好照片必須能把注意力引向被攝主體，換句話說(shuō)，使觀賞者的目光一下子就投向被攝主體3 一幅好照片必須畫(huà)面簡(jiǎn)潔，只包括那些有利于把視線引向被攝主體的內(nèi)容，而排除或壓縮那些可能分散注意力的內(nèi)容。石蠟制片的過(guò)程。取樣（材料的選擇和分割）固定保存-沖洗、染色（整染）-脫水（各級(jí)乙醇，低濃度高濃度)-透明（透明劑，低濃度高濃度）-浸蠟（低濃度高濃度）-包埋（石蠟包埋劑）-切片（旋轉(zhuǎn)切片機(jī)）-展片、粘片-烘片-脫蠟（脫包埋劑石蠟）

12、-復(fù)水（各級(jí)乙醇，低濃度高濃度）-染色（片染）-分色（根據(jù)染色情況而定）-脫水（各級(jí)乙醇，低濃度高濃度）-透明-鏡檢、封藏-烘片、觀察、攝影 照相機(jī)的原理影響曝光因素原理小孔成像 因素1快門：控制進(jìn)光時(shí)間2光圈：調(diào)節(jié)光通量 快門的作用控制進(jìn)光時(shí)間;影響成像清晰度不同快門速度的效果:較低的快門速度獲得具有動(dòng)感的模糊照片 高速快門可以獲得定格的動(dòng)作照片 數(shù)字越大,速度越快生物顯微技術(shù): 利用光學(xué)系統(tǒng)或電子光學(xué)系統(tǒng)設(shè)備，觀察肉眼所不能分辨的微小物態(tài)結(jié)構(gòu)及其特性的技術(shù)。單純固定液：僅含一種固定劑的固定液?；旌瞎潭ㄒ海河袔追N單純固定液按一定比例混合而成。固定：也稱為殺生.指用物理或化學(xué)的方法，迅速殺死新鮮的植物細(xì)胞、組織，并且盡量保持其生活的自然狀態(tài)。復(fù)式顯微鏡：由兩組或兩組以上的透鏡系統(tǒng)組成。單式顯微鏡：只有一個(gè)透鏡的顯微鏡，即放大鏡。感光度：（也就是ISO）指的是感光