花粉生活力萌發(fā)試驗[沐風書屋]

1、實驗二 花粉生活力的測定懸滴培養(yǎng)法一、 實驗目的：掌握了解花粉生活力測定的意義和方法。二、 實驗材料：二月蘭花粉三、 實驗儀器及藥品：凹玻片、蓋玻片、解剖針、鑷子、紗布、標簽、鉛筆、顯微鏡、恒溫箱、蔗糖、蒸餾水、硼酸、凡士林。四、 實驗原理：花粉是植物自然授粉和人工雜交的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，花粉生活力的大小是保證雜交成功的關(guān)鍵。在有性雜交育種中，常因父母本花期的不同，作為父本的花粉必須經(jīng)過貯藏直到母本植株開花時再用于授粉（花粉在低溫02、干燥、黑暗等條件下代謝強度降低?；ǚ圪A藏的原理就是創(chuàng)造代謝強度低的環(huán)境，以延長花粉的壽命）；或者雙親不在同一個地方，必須由外地郵寄花粉供應(yīng)。經(jīng)過貯藏或外地郵寄的花粉

2、是否已經(jīng)喪失生活力，必須經(jīng)過測定才能確定。 鑒定花粉生活力的方法主要有四種：一是將待測花粉直接授粉，然后統(tǒng)計結(jié)實率和結(jié)子數(shù)。此法的缺點是需要的時間較長，且實驗的結(jié)果易受氣候條件的影響。二是將待測花粉授到柱頭上，隔一定時間切下柱頭，在顯微鏡下檢查花粉的萌發(fā)情況。根據(jù)萌發(fā)率的高低來鑒定花粉的生活力。三是在培養(yǎng)基上進行花粉的人工萌發(fā)，檢查待測花粉萌發(fā)率的高低。后兩種方法都是根據(jù)花粉的萌發(fā)率來反映生活力的高低，有一定的參考價值。但是萌發(fā)的不一定都能受精，特別是人工萌發(fā)還受許多條件的限制，所以也只有相對的可靠性。四是用染色方法來鑒定花粉的生活力。其原理是在活的花粉內(nèi)有過氧化氫酶的存在，它可以促進過氧化物

3、（如H2O2）放氧分解。這些剛被放出的活性氧很容易使還原劑氧化，常用無色聯(lián)苯胺、萘酚等還原劑做指示劑，這些還原劑被氧化后表現(xiàn)紅色或玫瑰紅色。如果花粉是活的，那么會很快被染成紅色或玫瑰紅色，如果花粉是死的，則這一反應(yīng)遲遲不能進行，花粉保持原色。此法優(yōu)點是比較快捷，但是比較間接。本試驗采用懸滴培養(yǎng)法鑒定花粉生活力。五、 實驗步驟：1. 配培養(yǎng)液：用蒸餾水和蔗糖分別配成5、10%、15的蔗糖溶液，并在各培養(yǎng)液中加少量硼酸。2. 取盛開的正在散粉的二月蘭花朵。3. 播花粉：在凹玻片的凹點滴一滴清水。在蓋玻片中央滴一滴培養(yǎng)液，用鑷子輕輕夾取二月蘭的花藥，在培養(yǎng)液中央輕輕蘸一下，使花粉均勻的分散在培養(yǎng)液的

4、球面上。在蓋玻片的四角涂抹少量的凡士林，用鑷子夾住蓋玻片在上提的過程中迅速把它翻轉(zhuǎn)過來，小心放在凹玻片上，使培養(yǎng)液處在蓋玻片和凹點形成的小密室中。每個凹玻片分別做蔗糖溶液的三個濃度，并用蒸餾水做對照。4. 培養(yǎng)：做好的凹玻片上貼好標簽，注明花粉種類、培養(yǎng)液的濃度以及時間，然后小心放到鋪有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，放到2224的恒溫箱中培養(yǎng)5h。5. 觀察：從恒溫箱中取出凹玻片，在低倍鏡下隨機觀察三個視野，計算花粉的萌發(fā)率。以花粉管長度達到花粉粒徑的2倍及以上視為萌發(fā)。六、 結(jié)果分析1. 分析花粉萌發(fā)率高或低的原因。2. 本實驗關(guān)鍵性步驟總結(jié)及實驗中所存在問題的討論。七、 作業(yè)1. 繪制一幅花粉粒萌發(fā)

5、形態(tài)圖。2. 花粉生活力測定在雜交育種中的重要意義？測定花粉生活力的方法有哪些？ 一般 2核花粉粒較3核花粉粒高，對不適宜環(huán)境 （溫度、濕度、輻射化學處理）抵抗力強。 原因：1、營養(yǎng)消耗 2、代謝旺盛 3、外壁薄等 花粉生活力的研究對于農(nóng)業(yè)、林業(yè)來說，具有很重要的理論及生產(chǎn)實踐意義。它為植物的育種、培育、栽培，為進行人工授粉和雜交授粉，提供理論依據(jù)。 一般來講，花粉生活力的長短，即決定于植物的遺傳性，又受環(huán)境因素的影響。 一般情況下，花粉生活力的長短依種而異，大多數(shù)植物的花粉只能活幾個小時、幾天或幾個星期。 一般來看：木本植物草本植物 2胞花粉3胞花粉 影響花粉生活力的主要環(huán)境因素有：溫度、濕

6、度及空氣。 現(xiàn)在延長花粉生活力的措施主要有：超低溫（-192的液態(tài)空氣，-196的液態(tài)氮）、真空、降低氧分壓、快速冷凍干燥等方法貯存。 影響花粉粒生活的因素主要一般低溫（ 150c），低濕（相對濕度20/100-50/100）低氧。正常情況，液態(tài)氮進行超低溫保存，如：水稻10 0C，85/100的濕度 24小時；玉米50C 90/100的濕度89天。但禾本科要求高濕。研究花粉儲藏對解決花期不遇問題相當重要。：()植物盛花期采集發(fā)育良好的花粉；()將花粉干燥至適宜貯藏的含水量，封裝在耐低溫容器內(nèi)；()經(jīng)預冷處理或直接置于低溫、超低溫條件下貯藏；()根據(jù)需要，隨時取出封存花粉的容器進行緩慢或快速升

7、溫解凍，使花粉復蘇；()采用花粉染色法、萌發(fā)法、授粉結(jié)實法鑒定花粉生活力；()具有生活力的花粉用于育種。實驗十七 花粉活力的測定在作物雜交育種、作物結(jié)實機理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鑒定。掌握花粉活力快速測定的方法，是進行雄性不育株的選育、雜交技術(shù)的改良以及揭示內(nèi)外因素對花粉育性和結(jié)實率影響的基礎(chǔ)。一、花粉萌發(fā)測定法【原理】正常的成熟花粉具有較強的活力，在適宜的培養(yǎng)條件下便能萌發(fā)和生長，在顯微鏡下可直接觀察計算其萌發(fā)率，以確定其活力。【器材與用具】載玻片；顯微鏡；玻棒；恒溫箱；培養(yǎng)皿；濾紙?！驹噭颗囵B(yǎng)基(10蔗糖，10MgL硼酸，05的瓊脂)：稱10g蔗糖、1Mg硼酸、05g瓊脂與

8、90Ml水放入燒杯中，在100水浴中溶化，冷卻后加水至100Ml備用?！痉椒ā?.將培養(yǎng)基熔化后，用玻棒蘸少許，涂布在載玻片上，放入墊有濕潤試紙的培養(yǎng)皿中，保濕備用。2.采集絲瓜、南瓜或其他葫蘆科植物剛開放或?qū)⒁_放的成熟花朵，將花粉灑落在涂有培養(yǎng)基的載玻片上，然后將載玻片放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，在25左右的恒溫箱(或室溫20條件下)中孵育，510Min后在顯微鏡下檢查5個視野，統(tǒng)計其萌發(fā)率?！咀⒁馐马棥?.不同種類植物的花粉萌發(fā)所需溫度、蔗糖和硼酸濃度不同，應(yīng)依植物種類而改變培養(yǎng)條件。2.此法也可用于觀察花粉管在培養(yǎng)基上的生長速度以及不同蔗糖濃度、離體時間、環(huán)境條件等因素對花粉活力的影響

9、。3.不是所有植物的花粉都能在此培養(yǎng)基上萌發(fā)，本法適用于易于萌發(fā)的葫蘆科等植物花粉活力的測定。二、碘碘化鉀染色測定法【原理】多數(shù)植物正常的成熟花粉粒呈球形，積累較多的淀粉，I2-KI溶液可將其染成藍色。發(fā)育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或積累淀粉較少，I2-KI溶液染色呈黃褐色。因此，可用I2-KI溶液染色來測定花粉活力。【器材與用具】顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鑷子；棕色試劑瓶；燒杯；量筒；天平。【試劑】I2-KI溶液：取2gKI溶于510Ml蒸餾水中，加入1g I2，待完全溶解后，再加蒸餾水300Ml。貯于棕色瓶中備用?！痉椒ā坎杉尽⑿←溁蛴衩卓捎筒挥仓甑某墒旎ㄋ?，取一花藥于載玻片上

10、，加1滴蒸餾水，用鑷子將花藥搗碎，使花粉粒釋放，再加12滴I2-KI溶液，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。凡是被染成藍色的為含有淀粉的活力較強的花粉粒，呈黃褐色的為發(fā)育不良的花粉粒。觀察23張片子，每片取5個視野，統(tǒng)計花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性?！咀⒁馐马棥看朔ú荒軠蚀_表示花粉的活力，也不適用于研究某一處理對花粉活力的影響。因為三核期退化的花粉已有淀粉積累，遇碘呈藍色反應(yīng)。另外，含有淀粉而被殺死的花粉粒遇I2-KI也呈藍色。三、氯化三苯基四氮唑(TTC)法【原理】具有活力的花粉呼吸作用較強，其產(chǎn)生的NADH2或NADPH2可將無色的TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)還原成紅色的TT（三苯基甲）而使其本身著色，無活力的花粉呼吸作用較弱，TTC的顏色變化不明顯，故可根據(jù)花粉吸收TTC后的顏色變化判斷花粉的生活力?！酒鞑呐c用具】顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鑷子；恒溫箱；棕色試劑瓶；燒杯；量筒；天平?！驹噭?5TTC溶液：稱05g TTC放入燒杯中，加入少許95酒精使其溶解，然后用蒸餾水稀釋至100Ml。溶液避光保存，若發(fā)紅時，則不能再用。【方法】采集任何植物的花粉，取少許放在干潔的載玻