病原微生物第24章-病毒感染的檢查方法與防治原則

1、病毒感染的檢查方法與防治原則,第24章,第一節(jié) 病毒感染的檢查方法,病毒感染的檢查,一般原則：特異、敏感、快速、簡便 方法 1根據(jù)流行病學和臨床特點初步判定可能感染的病毒。 2根據(jù)可疑病毒的生物學性狀，機體免疫應答和臨床過程以及病人當前所處的時機，確定實驗診斷方法,病毒感染的檢查,檢測內容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉錄酶,電鏡直接觀察 光鏡檢查包含體 分離培養(yǎng),一、標本的采集與送檢,原則基本與細菌相似，但應注意： 1.標本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢 3.血清學診斷采雙份血清,二、病毒的分離與鑒定,一般程序,標本,無菌處理,動物接

2、種 雞胚培養(yǎng) 細胞培養(yǎng),指標陽性 指標陰性,病毒鑒定,盲傳23代,指標陰性,病毒陰性,一）病毒的分離培養(yǎng) 1.細胞培養(yǎng) 單層細胞培養(yǎng) 分類 懸浮細胞培養(yǎng) 原代細胞 細胞種類 二倍體細胞 傳代細胞系,病毒的細胞培養(yǎng),細胞培養(yǎng)瓶,單層細胞,2.雞胚培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人類皰疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分離 卵黃囊（yolk sac） 嗜神經(jīng)病毒,2、雞胚培養(yǎng),優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低 缺點：操作程序復雜,3.動物接

3、種 應用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng) 動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點：結果易觀察，可建立動物模型 缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物 體內常帶有潛伏病毒,1病毒增殖鑒定 (1)細胞病變效應（cytopathic effect, CPE ） 細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等,二）病毒的鑒定,2.病毒形態(tài)學鑒定,電子顯微鏡：設備、操作復雜，應用受限 光學顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒）， 對一般病毒檢測意義不大,3.病毒血清學鑒定,鑒定病毒種、型、亞型 (1)血凝抑制

4、試驗正粘病毒型與亞型鑒定 病毒雞紅細胞凝集（血凝試驗） 病毒特異性抗體雞紅細胞不凝集 （血凝抑制試驗,2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA） 多種病毒鑒定 (3)凝膠免疫擴散試驗 多種病毒鑒定,4.病毒分子生物學鑒定,抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴增 核酸雜交 基因芯片 基因測序,三）病毒數(shù)量與感染性測定,1.血凝試驗：病毒總量（活病毒死病毒,2.蝕斑形成試驗 3.50組織細胞感染量,感染性病毒量,四) 新病毒的鑒定,核酸類型的測定 理化性狀的檢測 形態(tài)學鑒定 血清學鑒定 基因測序和生物對比,四、病毒感染的快速診斷,數(shù)小時內出結果 病毒顆粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗體檢測（IgM,一）

5、形態(tài)學檢查,電鏡和免疫電鏡檢查 普通光學顯微鏡檢查 包涵體,二）病毒成分檢測,1.病毒蛋白抗原檢測 免疫標記技術 2.病毒核酸檢測 核酸擴增技術 核酸雜交技術 基因芯片技術 基因測序,三）病毒感染的血清學診斷,應用： 采取標本分離病毒為時已晚 目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒 為證實所分離的病毒的臨床意義 進行血清流行病學調查等,1.中和試驗（neutralizing test,病毒中和抗體 病毒失去感染性 特點：特異性高，抗體維持時間長 應用：人群免疫情況的調查 臨床診斷少用,2.補體結合試驗,用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人血清中相應的補體抗體 特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

6、應用：近期感染指標,3.血凝抑制試驗 流感疫苗接種后效果觀察及流感流行病學調查,4、早期抗體檢測,可診斷急性感染 特異性IgM抗體：孕婦感染風疹病毒 EBV早期抗原抗體 EAV核心抗原抗體 早期抗原的抗體 EAV衣殼抗原抗體,第二節(jié) 病毒感染的特異性預防,微生物及其代謝產物 生物制品 動物免疫血清 免疫細胞 細胞因子 防治和診斷感染性疾病,疫苗: 死疫苗(killed vaccine)如白百破、傷寒、流腦、乙腦、流感、鉤端螺旋體等?？杉ぐl(fā)HI，安全、方便；但抗原性改變，效果差，需多次注射；反應重）。 活疫苗（living vaccine）如BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰質炎和麻疹疫苗等?？杉ぐl(fā)HI

7、、CMI； 多由減毒病原菌制成；偶可發(fā)生回復突變，毒力回升，接種后發(fā)病。聯(lián)合疫苗在試用中。 基因工程疫苗：目的基因 原核或真核細胞 基因產物 （如乙肝疫苗,導入,人工培養(yǎng),一、人工主動免疫常用生物制品,重組載體疫苗： 蛋白質抗原基因 減毒的病毒或細菌 基因整合 基因產物 疫苗 合成疫苗： 根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作為疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。 缺點是免疫原性弱、只激發(fā)B細胞引起HI，因為抗病毒依賴CMI,轉入,培養(yǎng),表達,亞單位疫苗： 除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+ 吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒） 、流感疫苗、

8、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。 DNA疫苗： 即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），這種核酸既是載體又能在真核細胞中表達抗原，誘導產生細胞毒殺傷功能的T細胞，有效預防病毒、胞內寄生菌及寄生蟲引起的傳染,轉基因植物疫苗： 將編碼某一病原體保護性抗原的基因轉入植物并在植物中表達，人們食用植物時，就完成了預防接種。如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。 治療疫苗： 葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。可能的機制是前者是脫敏作用，后者是打破免疫耐受。 類毒素： 細菌外毒素+0.3%0.4%甲醛 類毒素(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗,二、人工被動免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙種球蛋白 細胞免疫制劑 IFN-、 細胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的殺傷細胞 LAK細胞,第三節(jié) 病毒感染的治療,核苷類藥物 非核苷類反轉錄酶抑制劑 蛋白酶抑制劑 其他抗病毒藥物 干擾素和干擾素誘生