第一節(jié)疾病與診斷

1、第一節(jié) 疾病與診斷,第三章 生物科學(xué)與健康,一、疾病的常規(guī)診斷,1、引起人類疾病的因素： 遺傳因素和環(huán)境因素,2、疾病的 常規(guī)診斷,黑箱方法 內(nèi)部影像或直接觀察 特異性免疫反應(yīng) 遺傳咨詢,現(xiàn)代輔助 診斷技術(shù),1）黑箱方法,通過對(duì)人體-黑箱輸出的信息進(jìn)行 比較而作出判斷的診斷方法,黑箱：指內(nèi)部結(jié)構(gòu)尚不能或不便于直接 觀察，只能從外部去認(rèn)識(shí)的系統(tǒng)。 （是控制論中的一個(gè)重要概念,2）現(xiàn)代輔助診斷技術(shù),內(nèi)部影像：X射線成像、超聲波成像、計(jì)算機(jī) 體層成像、核磁共振成像等技術(shù) 直接觀察：內(nèi)窺鏡（胃鏡、腸鏡、腹腔鏡等） 特異性免疫反應(yīng)：利用抗原與抗體的特異性 免疫獲得體內(nèi)微小變化信息 的方法,現(xiàn)代輔助診斷技

2、術(shù)可獲得更為精確的黑箱 內(nèi)部變化信息,3）遺傳咨詢,用于預(yù)測(cè)子代是否可能患有遺傳病,主要內(nèi)容和步驟： 醫(yī)生對(duì)咨詢對(duì)象和有關(guān)的家庭成員進(jìn)行身體檢查， 并詳細(xì)了解家庭病史。在此基礎(chǔ)上作出診斷。 分析遺傳病的傳遞方式，即判斷出是什么遺傳病。 推算出后代的再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)率。 向咨詢對(duì)象提出防治的對(duì)策、方法和建議,書本頁遺傳咨詢案例,二、疾病的基因診斷,惡性腫瘤的早期診斷？ 愛滋病的早期診斷？ SARS疑似患者的快速診斷,從基因水平提供更早期、更加準(zhǔn)確的診斷依據(jù),1、基因診斷的概念,基因診斷就是通過分子生物學(xué)的方法找到 待測(cè)樣品中特定的DNA片段，然后對(duì)受測(cè)試 者作出是否患病的診斷,進(jìn)行基因檢測(cè)要解決的二個(gè)關(guān)

3、鍵問題：一是尋找到特定的DNA片段 二將特定的DNA片段顯示出來,基因檢測(cè)常用方法,酶切法：利用特定限制性內(nèi)切酶的酶切 結(jié)果來判斷基因是否發(fā)生變化,核酸分子雜交法：基因診斷的最基本的 方法之一,原理,堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（DNA分子雜交,2、基因診斷的原理,工具,放射性同位素標(biāo)記或熒光分子標(biāo)記的DNA分子探針,基本作用：直接探查基因的序列和缺陷， 可找出致病的遺傳基因,基因診斷的原理,探針的來源有3種： （1）來自基因組中有關(guān)的基因本身，稱為基因組探針； （2）從相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄獲得的mRNA，再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探 針，稱為cDNA探針。 （3）在體外人工合成的堿基數(shù)不多的與相應(yīng)基因序列互補(bǔ)的DNA

4、片段，稱為寡核苷酸探針（ASO探針）。 探針的標(biāo)記： 為了確定探針是否與相應(yīng)的基因組DNA雜交，有必要對(duì)探針加以標(biāo)記，以便在結(jié)合部位獲得可識(shí)別的信號(hào)，通常采用放射性同位素32P標(biāo)記探針的某種核苷酸磷酸基,基因診斷的原理,當(dāng)用一段已知基因的核酸序列作出探針，與變性后的單鏈基因組DNA接觸時(shí)，如果兩者的堿基完全配對(duì)，它們即互補(bǔ)地結(jié)合成雙鏈，從而表明被測(cè)基因組DNA中含有已知的基因序列,3、ASO探針法,以鐮刀型細(xì)胞貧血癥為例 診斷過程： 首先根據(jù)檢測(cè)基因的特定DNA序列人工合成兩種特定的寡核苷酸分子。 其次從羊水中獲得胎兒脫落細(xì)胞，再提取細(xì)胞內(nèi)DNA并處理成單鏈DNA。 最后分別用能與正常序列互補(bǔ)

5、的ASO探針和能與突變序列互補(bǔ)的ASO探針與膜上的DNA片段進(jìn)行分子雜交，通過洗脫，將沒有結(jié)合的ASO探針洗掉,惡性腫瘤基因診斷過程,歸納,構(gòu)建基因探針：利用已知致病基因的核酸序列,從惡性腫瘤基因診斷了解基因診斷的一般程序,獲取待測(cè)組織單鏈，進(jìn)行擴(kuò)增， 熱處理后得到大量的單鏈,將單鏈轉(zhuǎn)到尼龍膜上，觀察基因探 針和它能否進(jìn)行雜交,結(jié)果：有雜交分子的說明待測(cè)組織中有 已知該致病基因的核酸序列,ASO探針法優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、 費(fèi)用低。 缺點(diǎn)：一次只能檢測(cè)一種基因,4、基因芯片,基因芯片概念：基因芯片，也叫DNA芯片，是將大量特定序列的DNA片段（分子探針）有序地固定在經(jīng)過處理后的尼龍膜、玻璃

6、片、硅片等支持物上 ，從而能快速、準(zhǔn)確地對(duì)大量DNA分子序列進(jìn)行測(cè)定和分析的一種類似電腦的芯片。 原理：利用堿基的互補(bǔ)配對(duì)原則 （DNA分子雜交） 材料：分子探針，尼龍膜，玻璃片，硅片,基因芯片,基因芯片,制作基因芯片的大致步驟： 確定突變的基因制作探針將大量探針有序地固定在硅片等上,診斷特點(diǎn):可以用盡可能少的樣品和盡可能少的檢測(cè)次數(shù)，檢測(cè)出多個(gè)病人或多種疾病，比普通的基因診斷效率更高 原因:每個(gè)芯片的基面上都可劃分出數(shù)萬至數(shù)百萬個(gè)小區(qū)，基因芯片技術(shù)具有無可比擬的高效、快速,基因芯片,基因診斷的應(yīng)用,感染性疾病的病原診斷 結(jié)核病、柯薩奇B3病毒感染的心肌炎、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV），愛滋病等 各種腫瘤的生物學(xué)特性的判斷 遺傳病的基因異常分析