沉淀反應(yīng)在化工中的應(yīng)用

1、沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)是可溶性抗原與相應(yīng)抗 體特異性結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng)。第一節(jié)液相沉淀反應(yīng)液扌目沉淀試驗(yàn)是指可溶性抗原與相應(yīng)的抗 樂社含竜H康的液樂介質(zhì)中皮血f形成肉 眼可見的沉淀物的試驗(yàn)。類型：絮狀沉淀試驗(yàn).環(huán)狀沉淀試驗(yàn)、免 疫濁度分析。廉理：將抗廉抗體嫁液溫合淮.一起，蠱電 解質(zhì)存AT,抗慮于抗體結(jié)合，形成縈狀 沉法暢。技術(shù)類型：1 抗原稀釋法(Dean-Webb法)2 抗體稀釋法(Ramon法)3棋盤格法(Checkerboard 法)原理:將抗原溶液疊加在細(xì)小玻璃管中抗 體溶液上面 抗原與抗體在兩液交界面處 特異性結(jié)合 未凝固前傾注呈平板,凝固后在瓊脂板上打孔（直徑約35mm ） f

2、孔中加入抗原溶液 放室溫或37C讓其向四周擴(kuò)散,24-48后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀 環(huán)。3 數(shù)據(jù)處理 1.Mancini曲線:適 用于大分子抗原和長(zhǎng)時(shí) 間擴(kuò)散（48h）的結(jié) 果處理。使用方格計(jì)算 紙劃線,擴(kuò)散環(huán)直徑的 平方與抗原濃度呈線性t2T3c(mgml)關(guān)系。公式表示:C/d2=K246810d2（mm）圖 16-2 Mancini 曲線T1為1624h（反拋物線）；T2為2448h；T3為48h以上（直線）1000810()10642I】t28 10 d（mm）圖16-3 Fahey曲線3 數(shù)據(jù)處理2.Fahey曲線：適用 于小分子抗原和較短 時(shí)間（24h）擴(kuò)散的 結(jié)果處理。使用半對(duì) 數(shù)紙

3、劃線,濃度的對(duì) 數(shù)與擴(kuò)散圈的直徑之 間呈線性關(guān)系。公式表示：logC/d=KT1為1624h（直線）；T2為2448h； T3為48h以上（拋物線）4臨床應(yīng)用常用于IgG. IgA. IgM. C3. C4等定 量測(cè)定。 1 原理：將抗原和抗體溶液分別放在凝膠 不同的對(duì)應(yīng)孔中 讓兩者在凝膠內(nèi)自由擴(kuò) 散,當(dāng)抗原與抗體相遇 濃度比例適當(dāng)處 形成可見的白色沉淀線。2 技術(shù)要點(diǎn)將加熱融化的瓊脂傾注一均勻的凝膠薄層,待瓊脂凝固后,在瓊脂膠板上打孔,在相對(duì)應(yīng)的孔中分別加入抗原或抗體,置室溫或37工18-24小時(shí),觀察沉淀線。A：加入抗原、抗體Ag AbB：擴(kuò)散C：形成等價(jià)沉淀帶3方法評(píng)價(jià)是抗原抗體鑒定的最

4、基本的方法之一。本試驗(yàn)是一種穩(wěn)定.簡(jiǎn)便的方法 表明存在相應(yīng)的抗原和抗體, 不出現(xiàn)沉淀線則表明抗原或抗體的缺乏。 沉淀線的形成是根據(jù)抗原抗體兩者比例所 敦r沉淀姿靠近j亢虧i旗示撫體含量高； 靠近猊體孔 提示猊原含量較爹。出現(xiàn)多 條沉淀絨 則說明抗原和抗體皆不是單一 的成分。因此 雙向免疫擴(kuò)散可用于鑒定 抗原或抗體的純度。 2分析抗原或抗體的相對(duì)分子量抗 原或抗體在瓊脂內(nèi)擴(kuò)散的速度受分子量的 影響。分子量大擴(kuò)散慢 因此形成的沉淀線彎向分子量大的一方。如二者分子量相等 則形成直線（圖丄65 ） o抗體多為IgG f分子量約150kD f據(jù)此可粗略估計(jì)未知抗原的分子量。Ab抗體相對(duì)分子量示意圖 3用

5、于抗原性質(zhì)的分析兩種受檢抗原的性質(zhì)可完全相同、部分相 同或完全不同。在一塊瓊脂板上打三個(gè)孔, 二個(gè)孔中加入抗原_個(gè)孔中加入抗體 擴(kuò)散后通過沉淀線的形態(tài)可鑒定兩種抗原Ab 抗a抗弘b抗弘c圖16-6抗原性質(zhì)分析示意圖 4用于抗體效價(jià)的滴定雙向擴(kuò)散技術(shù)是抗血清抗體效價(jià)滴定的常 規(guī)方法。固定抗原的濃度 經(jīng)過 自由擴(kuò)散,形成沉淀線。出現(xiàn)沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價(jià)。免疫電用技術(shù)是電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物。兩大優(yōu)點(diǎn):一、免疫電泳是區(qū)帶電泳與免疫雙 擴(kuò)散的結(jié)合。 1953年 Graba和Williams首先報(bào)道。 根據(jù)各蛋白所出的電 泳位置,可分為白蛋 白區(qū)、球蛋白al區(qū). a2區(qū).卩區(qū).Y區(qū)

6、。止常人血清加抗體擴(kuò)散c染色免疫電泳原理示意圖其基本原理是將蛋白質(zhì)抗原在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行 電泳,樣品中不同的抗原成分因所帶電荷、分子 量及構(gòu)型不同,電泳遷移率各異,而被分離成肉 眼不可見的若干區(qū)帶。停止電泳后,在與電泳方 向平行的瓊脂槽內(nèi)加入相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫擴(kuò) 散。分離成區(qū)帶的各種抗原成分與相應(yīng)抗體在瓊 脂中擴(kuò)散后相遇,在二者比例合適處形成肉眼可 見的弧形沉淀線。血漿蛋白各區(qū)帶位置示意圖圖1厶9血漿蛋白各區(qū)帶位置示意圖卩pALE：前白蛋白；HP：觸珠蛋白；的LIP：阻脂蛋白；AUB；白蛋白（TRF:轉(zhuǎn)鐵蛋白: 仇IP： P脂蛋白：AAT：抗胰蛋白臥AAG：酸糖蛋白；也刑：巨球螢廣根據(jù)沉淀線

7、的數(shù)量.位置和形狀,與已知 的標(biāo)準(zhǔn)（或正常）抗原.抗體形成的沉淀 線比較 即可對(duì)樣品中所含成分的種類及 其性質(zhì)進(jìn)行分析.鑒定。二、對(duì)流免疫電泳原理在瓊脂板上打兩排孔,左側(cè)各孔加入 待測(cè)抗原 右側(cè)孔內(nèi)放入相應(yīng)抗體,抗原 在陰極側(cè) 抗體在陽極側(cè)。通電后,帶負(fù) 電荷的抗原泳向陽極側(cè),而抗體籍電滲作 用流向陰極抗原側(cè),在二者之間或抗體的 另一側(cè)（抗原過量時(shí)）形成沉淀線。圖16-10對(duì)流免疫電泳示意圖瓊脂 PH8.0負(fù) 極OO正 極AgAbAgAb三、火箭電泳 RIE:又稱為單向擴(kuò)散免疫沉淀技術(shù)。操作：在含抗體的瓊脂板一端打一排抗原孔；加 入待測(cè)標(biāo)本后,將抗原置陰極端,用橫距 23mA/cm的云流強(qiáng)應(yīng)逬行電誅?？?/p>