【基金標(biāo)書】2011CB504700-重要病毒跨種間感染與傳播致病的分子機(jī)制研究

項(xiàng)目名稱： 重要病毒跨種間感染與傳播致病的分子機(jī)制研究 首席科學(xué)家： 高福 中國科學(xué)院微生物研究所 起止年限： 托部門： 中國科學(xué)院 二、預(yù)期目標(biāo) 總體目標(biāo) 本項(xiàng)目根據(jù) 國家新發(fā)人類傳染病 防治上的 戰(zhàn)略需求 ，聚焦國際上病毒病研究的 前沿 ，立足于我國重要病毒性傳染病 發(fā)生與 流行 的現(xiàn)狀 ，選擇 新型 冠狀病毒、 乙腦病毒、登革病毒、狂犬病毒 和 流感 病毒 等 對我國具有嚴(yán)重危害或潛在危害的代表性病毒為主要研究對象，運(yùn)用病毒學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué) 和結(jié)構(gòu)生物學(xué)等 現(xiàn)代生命科學(xué)技術(shù) 手段， 揭示重要病毒尤其是新型病毒在動物宿主中的生態(tài)分布特征； 解析 病毒 基因 變異和進(jìn)化規(guī)律 ，闡明 病毒跨種間感染 與致病的 分子基礎(chǔ) ，在病毒跨種間傳播研究基礎(chǔ)理論方面有突破，進(jìn)一步推動我國在該領(lǐng)域的研究達(dá)到國際先進(jìn)水平， 為我國新發(fā)傳染病的防治提供科學(xué)支撐 。通過該項(xiàng)目的實(shí)施，將不僅培養(yǎng)一批在病毒學(xué)研究領(lǐng)域國際創(chuàng)新型拔尖人才和學(xué)術(shù)骨干， 形成 具有國際競爭力的團(tuán)隊(duì)， 而且將建立分子病毒學(xué)、分子免疫學(xué)和病毒生態(tài)學(xué)研究等科研基地，為我國新發(fā)人傳染病的預(yù)防與控制水平的持續(xù)提升奠定穩(wěn)固的科學(xué)基礎(chǔ)。 五年預(yù)期目標(biāo) 建立 自 然貯存宿主 重要 病毒 病原生態(tài)學(xué) 研究平臺 從野生動物中分離 新型冠狀病毒、尼帕或類似副粘病毒 、漢坦病毒、流感病毒； 弄清楚 毒直接動物溯源和生態(tài)傳播鏈；闡明我國境內(nèi)蝙蝠體內(nèi)感染和攜帶的幾種已知人類重要病毒的種類、分布和 病毒在蝙蝠等重要貯存動物貯存和傳播的分子機(jī)理 ，揭示乙腦病毒在不同動物宿主之間的傳播機(jī)制與傳播關(guān)系； 明確高致病性禽流感病毒主要疫源地（青海湖流域、洞庭湖）生態(tài)的分布、儲存方式、生存及消長規(guī)律 ，以及 流感病毒在家禽和哺乳動物的生態(tài)分布，建立自然宿主動物病毒資源庫。 闡明重要 病毒分子變異 和 進(jìn)化 的 規(guī)律 以及生物學(xué)特性 通過對 新型冠狀病毒、乙腦病毒、 尼帕或類似副粘病毒 、 流感病毒等 進(jìn)行病毒的全基因組序列測定 ， 揭示 功能基因組的 遺傳 變異 特征；通過基因組信息學(xué) 特征 分析，揭示病毒基因組進(jìn)化規(guī)律。 確定登革病毒在蚊子細(xì)胞中復(fù)制所必須的 5 3勢作用元件，鑒定出在登革病毒復(fù)制過程中起重要作用的種屬特異順勢作用元件和細(xì)胞因子。 闡明重要病毒尤其是新型病毒的生物學(xué)特性，包括病毒的致病性、傳播性和感染性，揭示病毒基因變異對病毒致病性與傳播性的影響等，奠定病毒種間傳播研究的分子基礎(chǔ)。 3、 揭示 跨種間傳播中病毒 配體與受體的 作用 機(jī)制 用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)和反向遺傳操作技術(shù)構(gòu)建系列假病毒及嵌合病毒 ， 結(jié)合蛋白質(zhì)生物大分子相互作用研究， 闡明 病毒 配體 與不同物種宿主細(xì) 胞 受體 的相互作用 機(jī)制 ，病毒侵入宿主細(xì)胞過程的囊膜蛋白受體結(jié)合與融合機(jī)制 ； 揭示 部分新型冠狀病毒的受體 類型及性質(zhì)，奠定 型冠狀病毒跨物種感染 研究 的 基礎(chǔ) ；通過體外真核表達(dá)病毒識別宿主細(xì)胞受體蛋白，弄清基因重要結(jié)構(gòu)位點(diǎn)的改變，對其受體結(jié)合功能和侵入細(xì)胞功能的影響，以及與病毒高致病力的關(guān)系； 應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染等現(xiàn)代技術(shù)，在不操作活病毒的基礎(chǔ)上，找尋黃病毒受體 。 4、解析重要病毒在不同宿主細(xì)胞中的復(fù)制 機(jī)制 利用現(xiàn)代生命組學(xué)等技術(shù)解析新型 冠狀病毒 、乙型腦炎 病毒 等基因組復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、表達(dá)以及組裝的機(jī)理，弄清病毒蛋白在 不同宿主細(xì)胞復(fù)制過程中 的作用基礎(chǔ)；解析 病毒在不同宿主細(xì)胞復(fù)制過程中病毒及宿主細(xì)胞 及 達(dá)譜對不同病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄的影響與結(jié)構(gòu)基礎(chǔ) ，探討 病毒感染的種屬與組織嗜性及復(fù)制的共性與特性 ； 鑒定 出 和登革熱病毒 的蚊子細(xì)胞蛋白因子，確定它們在病毒 制過程中的作用。 解析 流感病毒聚合酶基因突變、插入、缺失等 對病毒 復(fù)制和致病性 的影響。 、 揭示宿主限制性因子在病毒跨 種 間 傳播 中的作用 機(jī)制 篩選 鑒定出與流感病毒、 漢坦病毒 、狂犬病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒 蛋白互作的宿主 細(xì)胞 限制性因子 ；通過研究不同種屬的宿主限制性因子對病毒感染性的影響， 闡明宿主限制性因子在病毒感染、致病及跨種屬感染中的分子機(jī)制。 并通過 研究病毒蛋白與宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白的相互作用， 篩選與病毒相關(guān)蛋白發(fā)生相互作用的細(xì)胞內(nèi)靶蛋白，探討相關(guān)新蛋白與靶蛋白之間的相互作用對病毒機(jī)能的影響，并為 將來研制小分子藥物奠定理論基礎(chǔ)。 6、 建立新型病毒感染動物模型 建立不同生理和免疫狀態(tài) 下 流感病毒或新型冠狀病毒等 病毒 感染動物模型 ，揭示實(shí)驗(yàn)動物病毒感染、復(fù) 制、傳播能力、機(jī)體免疫應(yīng)答水平變化、機(jī)體病變和進(jìn)程等 ，結(jié)合感染前生理和免疫狀態(tài)的本底情況， 揭示 免疫應(yīng)答水平的不同與病毒致病能力的關(guān)系， 解析 不同免疫狀態(tài)導(dǎo)致病毒不同致病能力的分子作用機(jī)制 。 建立人 基因小鼠感染模型 ；揭示 和 淋巴細(xì)胞比例及分布規(guī)律、細(xì)胞因子釋放情況等免疫反應(yīng)變化規(guī)律， 闡明 制性在病毒跨種 間 傳播中的作用 ；建立新型病毒體內(nèi)分布實(shí)時監(jiān)測小鼠 模型 。 7、人才培養(yǎng) 與基地建設(shè) 培養(yǎng)一批在病毒學(xué)研究領(lǐng)域國際創(chuàng)新型拔尖人才和學(xué)術(shù)骨干， 形成 具有國際競爭力的團(tuán)隊(duì)， 造就一支跨學(xué)科、跨領(lǐng)域 、精誠合作、團(tuán)結(jié)奮進(jìn)的科研隊(duì)伍 ， 而且將建立分子病毒學(xué)、分子免疫學(xué)和病毒生態(tài)學(xué)研究等科研基地，在新型病毒生態(tài)學(xué)、病毒生理與病理學(xué)、病毒結(jié)構(gòu)學(xué)、病毒基因組學(xué)等研究領(lǐng)域取得重大突破， 發(fā)表 百篇以上 具有國際前沿水平的科研論文， 為我國重要傳染病的防治提供理論和科學(xué)支撐。 三、研究方案 學(xué)術(shù)思路 : 本項(xiàng)目 立足于我國重要病毒 傳染病 產(chǎn)生與跨種間傳播的現(xiàn)狀與國家在傳染病防控方面的重大需求， 綜合現(xiàn)代病毒生態(tài)學(xué)、分子病毒學(xué)、分子生物學(xué)、生物信息學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和生物化學(xué)等，以解析病毒跨種間傳播機(jī)理為目標(biāo)，以新型冠狀病毒、黃病 毒、狂犬病毒、流感病毒等為重點(diǎn)研究對象，利用學(xué)科交叉，發(fā)揮多學(xué)科優(yōu)勢，從病毒的生態(tài)分布、遺傳變異與進(jìn)化、病毒與宿主細(xì)胞相互作用等層面揭示重要病毒跨種間傳播與致病的分子機(jī)制（見圖 1）。 通過本項(xiàng)目 實(shí)施 ， 造就 一支在病毒 跨種間傳播 研究領(lǐng)域具有國際競爭力的優(yōu)秀團(tuán)隊(duì)， 在新發(fā)傳染病發(fā)生機(jī)制研究方面取得重大突破， 為 國家 應(yīng)對突發(fā)公共衛(wèi)生事件、構(gòu)筑 公共安全體系、保障人民健康提供 理論依據(jù)和 技術(shù)支撐。 技術(shù)路線： 詳見流程圖（圖 1）。本研究將系統(tǒng)地研究 新型冠狀病毒、乙腦病毒、狂犬病毒、流感病毒等重要病毒 的 生態(tài)分布、變異進(jìn)化規(guī)律 、病毒與受體的識別、病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制機(jī)制、宿主限制性因子對病毒復(fù)制的影響等，圍繞病毒跨種間感染傳播與致病的分子機(jī)制開展研究工作。 四、年度計(jì)劃 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 一 年 1 在全國各地大量采集 蝙蝠、嚙齒類動物、食蟲目動物的血清、咽拭子和肛拭子樣品；采集不同地區(qū)，不同動物，包括野生動物、動物園動物和特種養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)動物、以及包括雞、豬和犬等家畜和家禽的棉拭子、組織和血液樣品 . 2 進(jìn)行流感病毒、新型冠狀病毒、乙腦病毒等的分離和病毒流行病學(xué)調(diào)查研究，研究病毒的宿主特征，對分離 鑒定的病毒進(jìn)行全基因組測定與分析；觀察新型病毒的生物學(xué)特征，重點(diǎn)是對動物的致病性和傳播性流感病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制； 3 利用原核或真核細(xì)胞表達(dá)乙型腦炎病毒、登革病毒、流感病毒囊膜蛋白；利用分子篩層析、離子交換等技術(shù)分離純化蛋白；病毒囊膜蛋白的晶體篩選；建立自噬途徑研究細(xì)胞模型。 4 冠狀病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；登革病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；病毒在不同組織中復(fù)制的 達(dá)譜對病毒復(fù)制的調(diào)控及分子機(jī)制； 5 以成熟的病毒蛋白與宿主因子互作平臺為基礎(chǔ)，尋找流感病毒的宿主限 制性因子 ;篩選與漢坦病毒主蛋白（核蛋白為主）相互作用的宿主細(xì)胞因子 ;通過蛋白質(zhì)互作手段，找出種間毒株差異的宿主相關(guān)蛋白，并獲得不同毒力狂犬病毒株感染的潛伏期早期和感染中、晚期免疫相關(guān)細(xì)胞和中樞神經(jīng)組織材料。 6 人 基因小鼠構(gòu)建 ； 高致病性禽流感病毒、西尼羅病毒等新型病毒嗜神經(jīng)生物學(xué)特征鑒定 1 采集蝙蝠樣本 500 份；家畜樣本500 份； 2 獲得流感病毒、新型冠狀病毒、乙腦病毒等的分離毒株和序列；獲得分離毒株的致病性和傳播性特點(diǎn)。 3 獲得不同基因型的乙型腦炎病毒、登革病毒、流感病毒囊膜蛋白；獲得部分囊膜蛋白的晶 體結(jié)構(gòu)。 4 對病毒目的基因進(jìn)行定點(diǎn)突變，觀察病毒突變株和野生株對不同宿主細(xì)胞及不同組織來源細(xì)胞中復(fù)制能力的差別，尋找決定病毒在不同種屬宿主細(xì)胞中復(fù)制的關(guān)鍵位點(diǎn)。 5 篩選出 5分別與流感病毒、漢坦病毒及狂犬病病毒蛋白相互作用的宿主細(xì)胞因子。 6 獲 得 人 基因小鼠。完成5高致病性禽流感病毒、狂犬病毒等新型病毒的生物學(xué)特征鑒定，獲得至少 4 株具有不同神經(jīng)嗜性新型病毒。 7 發(fā)表研究論文 10 篇以上 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 二 年 1. 檢測新型冠狀病毒、新型漢坦病毒、新型副粘病毒新型感病毒在 動物中的感染情況；對病毒檢測為陽性樣品進(jìn)行病毒培養(yǎng) 和分離；分析新檢測的病毒序列與已知人類同類病毒的差異和進(jìn)化關(guān)系。 2. 繼續(xù)進(jìn)行病毒的分離和調(diào)查；研究病毒在經(jīng)過不同宿主傳播后病毒生物學(xué)特性的改變特征和規(guī)律；對分離鑒定的病毒進(jìn)行全基因組測定，利用基因組信息學(xué)分析技術(shù)，研究病毒的遺傳變異和分子進(jìn)化規(guī)律和特征，并建立病毒的反向遺傳操作技術(shù)系統(tǒng)。 3. 分離病毒易感細(xì)胞膜蛋白，利用 方式篩選候選受體；質(zhì)譜鑒定候選受體；研究不同流感病毒白與受體的作用特征 ； 在細(xì)胞模型上研究自噬影響流感病毒侵入的分 子機(jī)制。 4. 流感病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；冠狀病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；登革病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；病毒在不同組織中復(fù)制的 5. 運(yùn)用蛋白 追蹤宿主限制性因子與病毒核蛋白相互作用后對病毒復(fù)制、裝配及成熟釋放的影響和生物學(xué)意義 ; 通過色譜質(zhì)譜技術(shù)對外周免疫相關(guān)細(xì)胞和中樞神經(jīng)組織進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)狂犬病病毒感染前后宿主在蛋白質(zhì)組水平表現(xiàn)出的差異點(diǎn)； 6. 建 立病毒體內(nèi)分布實(shí)時監(jiān)測動物模型，對高致病性禽流感病毒等病毒的感染動力學(xué)進(jìn)行初步探討。 1. 獲得 10 株以上病毒的部分基因組序列； 確定新型病毒與人類病毒在在血清學(xué)和基因序列上的差異。 2. 獲得流感病毒、新型冠狀病毒、乙腦病毒等的分離毒株和全基因組序列；獲得流行毒株的遺傳變異規(guī)律和生物學(xué)特性；建立病毒的反向遺傳操作系統(tǒng) 1 套 。 3. 獲得乙腦病毒、登革病毒細(xì)胞候選受體；獲得一些影響流感病毒 白與唾液酸受體的重要蛋白殘基；初步了解流感病毒如何影響細(xì)胞自噬的信號通路 。 4. 獲得目的重組病毒；建立人冠狀病毒庫；揭示不同突變對病毒 譯和復(fù)制的影響；獲得宿主細(xì)胞 達(dá)譜。 5. 篩選出 2分別與流感病毒和漢坦病毒相互作用的宿主限制性因子；闡明部分宿主限制性因子對流感病毒和漢坦病毒復(fù)制的影響及其作用機(jī)制；獲得狂犬病病毒感染前后宿主在蛋白質(zhì)水平的差異點(diǎn) 6. 明 確 高 致 病 性 禽 流 感 病 毒 對 在基因小鼠體內(nèi)感染特性，初步揭示 完成新型病毒的基因組測序，利用生物信息學(xué)方法并發(fā)現(xiàn) 嗜神經(jīng)性相關(guān)毒力位點(diǎn)，通過反向遺傳學(xué)手段進(jìn)行驗(yàn)證。 7. 發(fā)表研究論文 20 篇以上 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 三 年 1. 對檢測為陽病毒性的進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)；開展新分類病毒的細(xì)胞和動物敏感性實(shí)驗(yàn)，評價(jià)病毒的宿主范圍和對實(shí)驗(yàn)動物的致病能力 ; 2. 繼續(xù)進(jìn)行病毒分子流行病學(xué)的調(diào)查與研究，分析病毒的進(jìn)化和變異規(guī)律；利用構(gòu)建的反向遺傳操作技術(shù)平臺，研究病毒基因點(diǎn)變異、基因突變、基因重配等對病毒致病性和傳播性的影響，重點(diǎn)探討影響病毒傳播特性尤其是跨種間傳播特性的關(guān)鍵因子或因素。 3. 在細(xì)胞模型上對篩選的乙腦病毒、登革病毒候選受體進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證 ；流感病毒突變體的表達(dá)純化、與唾液酸受體復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)；在細(xì)胞模型上研究自噬影響流感病毒侵入的分子機(jī)制。 4. 流感病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；冠狀病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；登革病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；病毒在不同組織中復(fù)制的 5. 繼續(xù)探索宿主限制性因子在流感病毒及漢坦病毒復(fù)制過程中的調(diào)控機(jī)制；探索弱毒誘導(dǎo)的早期抗感染因子（宿主限制性因子）的本質(zhì)和強(qiáng)毒誘導(dǎo)的早期致病因子對宿主限制性因子的影響； 6. 病毒體內(nèi)分布實(shí)時監(jiān)測動物模型構(gòu)建； 新 型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)毒力位點(diǎn)的功能研究。 1. 獲得 3新分離病毒的全基因組序列 ； 揭示野生動物或家畜冠狀病毒的遺傳變異情況 。 2. 建立病毒的毒株庫和基因庫；確定影響病毒致病性和傳播性的關(guān)鍵基因位點(diǎn)。 3. 獲得 1乙腦病毒、登革病毒受體或輔助受體；從分子結(jié)構(gòu)水平揭示流感病毒 白與唾液酸受體相互作用影響流感病毒跨種間傳播的機(jī)制；闡明流感病毒表達(dá)蛋白如何影響細(xì)胞自噬水平 。 4. 揭示病毒在不同宿主上生長能力的動態(tài)變化；獲得人冠狀病毒感染性克??；獲得四種病毒 的細(xì)胞蛋白因子。 5. 深入闡明宿主限制性因子在流感病毒及漢坦病 毒復(fù)制過程中的調(diào)控機(jī)制；篩選出 1與狂犬病病毒相互作用的宿主限制性因子 。 6. 通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得流感病毒體內(nèi)分布實(shí)時監(jiān)測動物模型； 通過細(xì)胞學(xué)和動物學(xué)實(shí)驗(yàn)，初步闡明新型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)毒力位點(diǎn)的作用機(jī)制 7. 發(fā)表研究論文 20 篇以上 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 四 年 1. 研究新型病毒的受體及其跨種物種感染的分子機(jī)理研究； 分析我國漢坦腎出血熱疾病主要疫區(qū)疾病流行情況與病毒遺傳變異的關(guān)系；檢測犬流感病毒的流行情況。 2. 持續(xù)進(jìn)行病毒的分離，密切關(guān)注動物臨床和人醫(yī)臨床新型病毒的出現(xiàn)和新型病毒的基因組特征；并利用構(gòu)建的反向遺傳操作技術(shù)平臺，研究病 毒基因非編碼區(qū)的作用和功能，探討病毒基因非編碼區(qū)核苷酸的改變對病毒致病性和傳播性重點(diǎn)是跨種間傳播特性的影響 。 3. 根據(jù)前三年研究結(jié)果，如果未按原計(jì)劃獲得病毒的受體或輔助受體，將采用其他方法進(jìn)一步篩選；對已篩選到的受體進(jìn)行體外表達(dá)，研究病毒囊膜蛋白與受體的相互作用 。 4. 流感病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；冠狀病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；登革病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；病毒在不同組織中復(fù)制的 達(dá)譜對病毒復(fù)制的調(diào)控及分子機(jī)制 。 5. 比較不同種屬的宿主限制性因子對流感病毒感染、致病影 響的差異；比較導(dǎo)致 型和輕型 討不同種屬宿主細(xì)胞限制性因子對病毒感染及致病的分子基礎(chǔ)和調(diào)控機(jī)制；進(jìn)一步解析狂犬病病毒結(jié)構(gòu)蛋白中哪種成分在影響宿主限制性因子方面發(fā)揮主要作用。 6. 新型病毒體內(nèi)感染動力學(xué) 研究； 新型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)宿主蛋白 / 1. 揭示蝙蝠、嚙齒類動物、食蟲目動物在病毒跨種群傳播的關(guān)鍵基因序列； 初步弄清楚我國犬流感病毒的可能的來源 。 2. 豐富病毒毒株庫和基因庫；闡明新型病毒的基因 和生物學(xué)特點(diǎn)；確定病毒非編碼區(qū)的功能位點(diǎn)。 3. 獲得重組表達(dá)的受體蛋白；闡明病毒囊膜蛋白與受體直接的相互作用能力 。 4. 揭示病毒在體內(nèi)不同部位的復(fù)制能力的差別；揭示病毒突變株和野生株對不同種屬細(xì)胞感染，復(fù)制能力的差別；分析影響病毒在宿主中復(fù)制能力的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ) 。 5. 闡明不同種屬宿主細(xì)胞限制性因子對流感病毒和漢坦病毒感染及致病的分子基礎(chǔ)和調(diào)控機(jī)制；確定狂犬病病毒結(jié)構(gòu)蛋白中哪種成分在影響宿主限制性因子方面發(fā)揮主要作用 6. 完成高致病性禽流感病毒在小鼠體內(nèi)的感染動力學(xué) 研究，揭示高致病性禽流感病毒在哺乳動物體內(nèi)的組織嗜性和感染過程； 通過蛋白質(zhì)組學(xué)、生物芯片等技術(shù)發(fā)現(xiàn)與新型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)的宿主蛋白/. 發(fā)表研究論文 25 篇。 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 五 年 1. 新型病毒體內(nèi)感染動力學(xué) 研究； 新型病 毒 嗜 神 經(jīng) 性 相 關(guān) 宿 主 蛋 白/篩選與鑒定 。 2. 持續(xù)進(jìn)行病毒的分離和病毒基因組信息學(xué)研究和病毒生物學(xué)特性研究；綜合分析課題組幾年的研究結(jié)果，分析病毒基因組的變異在病毒跨種間傳播中的作用； 3. 篩選病毒囊膜蛋白與受體復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)； 4. 新型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)宿主蛋白/功能研究 5. 對前 4 年的 研究成果進(jìn)行進(jìn)一步的補(bǔ)充和完善，進(jìn)行項(xiàng)目 的 總結(jié)驗(yàn)收。 1. 闡明動物攜帶的新型冠狀病毒、漢坦病毒、流感病毒等與人類疾病的關(guān)系 。 2. 完善病毒毒株庫和基因庫；總結(jié)病毒流行規(guī)律和影響生物學(xué)特性的功能位點(diǎn) 。 3. 獲得病毒囊膜蛋白與受體復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)，闡明病毒與受體的相互作用機(jī)制，揭示病毒跨種間傳播機(jī)制 。 4. 闡明宿主限制性因子在流感病毒感染、致病及跨種屬感染中的作用及分子機(jī)制；闡明漢坦病毒感染后大量包涵體形成的分子機(jī)制及免疫病理意義；闡明機(jī)體中樞神經(jīng)系統(tǒng)對狂犬病病毒的固有免疫機(jī)制和狂犬病病毒對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的致病機(jī)制 5. 發(fā)表論文 25 篇以上。 6. 完成項(xiàng)目驗(yàn)收。 一、 研究內(nèi)容 1、重要病毒在自然宿主中的生態(tài)分布 在前期對 我國不同地域 、 不同時間 、 不同宿主動物 病毒如 新型冠狀病毒 、乙腦病毒和 漢坦病毒 研究的調(diào)查研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步擴(kuò)大地域與宿主調(diào)查， 確定我國境內(nèi)蝙蝠體內(nèi)感染和攜帶的幾種已知人類重要病毒的種類、分布和 病毒在蝙蝠等重要貯存動物貯存和傳播的分子機(jī)理 ，研究乙腦病毒在不同動物宿主之間的傳播機(jī)制與傳播關(guān)系；研究 生態(tài)環(huán)境因素對病毒感染宿主范圍的影響 ；評價(jià)新型病毒對人與動物的潛在危害 ； 調(diào)查流感病毒在野禽、家禽和哺乳動物的生態(tài)分布，研究侯鳥遷徙與疫病流行的關(guān)系， 為疫病防控政策的制定 提供理論依據(jù)；建立病毒在自然宿主的生態(tài)分布數(shù)據(jù)庫，奠定重要病毒跨種間傳播研究與分析的物質(zhì)基礎(chǔ)。 重要 病毒分子變異、進(jìn)化規(guī)律及其生物學(xué)特性 在 對重要病毒 進(jìn)行生態(tài)學(xué)和流行病學(xué) 調(diào)查研究的基礎(chǔ)上，以新型冠狀病毒、乙腦病毒、狂犬病毒、 流感病毒等重要病毒為研究對象，進(jìn)行病毒的全基因組序列測定研究，研究功能基因組的變異和進(jìn)化特征 ；同時研究重要病毒尤其是新型病毒的生物學(xué)特性，包括病毒的致病性、傳播性和感染性，研究病毒基因變異對病毒種間傳播作用的影響等。由于近年來的研究 發(fā) 現(xiàn)病毒非結(jié)構(gòu)蛋白和病毒 非編 碼區(qū)在致病性和傳播性也起 到非常重要的作用，因而在全基因組序列 研究中， 要注重研究病毒非編碼區(qū)變異和進(jìn)化特征，觀察病毒非編碼區(qū)變異對病毒生物學(xué)特性的影響。 3、病毒跨種間傳播中病毒與受體的相互作用 以乙型腦炎、 流感病毒等為突破口，研究病毒與受體的親和特性以及細(xì)胞受體和配體的相互作用機(jī)制；用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)和反向遺傳操作技術(shù)構(gòu)建系列假病毒及嵌合病毒。結(jié)合蛋白質(zhì)生物大分子相互作用研究，研究病毒與不同物種宿主細(xì) 胞的相互作用 ；同時利 用昆蟲細(xì)胞表達(dá) 病毒表面蛋白 及各種突變體蛋白， 從結(jié)構(gòu)層面研究受體與配體的作用，以此為基礎(chǔ)，用物理方法（ 生物學(xué) 檢測 手段研究病毒表面蛋白的突變對受體結(jié)合能力的影響。