血型鑒定方法ppt課件.ppt

ABO血型鑒定不規(guī)則抗體篩選,玻片法（正定型）試管法（正定型,反定型）,鹽水法聚凝胺法抗人球法,1,ABO血型鑒定實(shí)驗(yàn)原理,抗原抗體反應(yīng)在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象從而測(cè)知受試者紅細(xì)胞膜上有無(wú)A或/和B抗原判斷血型抗體在相鄰的紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋形成肉眼可見(jiàn)的顆粒狀凝集團(tuán)塊.見(jiàn)圖,2,IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖,3,IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖,IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集,4,試劑,抗A、抗B試劑血清5%的A型、B型及O型試劑紅細(xì)胞懸液受檢者血清5%的受檢者紅細(xì)胞懸液(從指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻，即得約5紅細(xì)胞懸液。采血時(shí)應(yīng)注意先用75酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受檢者紅細(xì)胞（約0.20.5ml）用生理鹽水洗滌3次，然后加入適量生理鹽水調(diào)配成5%濃度。),5,四實(shí)驗(yàn)步驟.swf,1.玻片法（1）取雙凹玻片一塊，用干凈紗布輕拭使之潔凈，在玻片兩端用記號(hào)筆標(biāo)明A及B，并分別各滴入A及B標(biāo)準(zhǔn)血清一滴。（2）用滴管吸取紅細(xì)胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清上，注意勿使滴管與血清相接觸。（3）竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根分別用來(lái)混合A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清和紅細(xì)胞懸液（4）觀察結(jié)果。如有凝集反應(yīng)可見(jiàn)到呈紅色點(diǎn)狀或小片狀凝集塊浮起。先用肉眼看有無(wú)凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時(shí)，則在低倍顯微鏡下觀察，如有凝集反應(yīng)，可見(jiàn)紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。（5）判斷血型根據(jù)被試者紅細(xì)胞是否被A，B型標(biāo)準(zhǔn)血清所凝集，判斷其血型。,6,2.試管法(正定型),ABA標(biāo)準(zhǔn)血清2滴B標(biāo)準(zhǔn)血清2滴受試者的紅細(xì)胞懸液1滴1滴混勻后1000rpm離心1min或3000rpm離心15秒。取出觀察結(jié)果。完全凝集的管底部有紅細(xì)胞的凝塊，管底細(xì)胞邊緣呈花邊狀，輕彈試管凝塊不散；完全不凝的試管，血細(xì)胞均勻的沉到管底，邊緣整齊，用手輕彈試管，紅細(xì)胞像一縷煙似的立即上升，隨即成為均勻的懸液;輕微凝集的，必須將液體轉(zhuǎn)到載玻片上鏡檢后判定凝集程度。,7,試管法(反定型),AcBcOc受檢者血清2滴2滴2滴5%的A型紅細(xì)胞懸液1滴5%的B型紅細(xì)胞懸液1滴5%的O型紅細(xì)胞懸液1滴立即以1000rpm離心1分鐘或3000rpm離心15秒。輕輕扣動(dòng)試管底部，觀察結(jié)果-同前,8,血型判定swf,9,五注意事項(xiàng),玻片、試管都要標(biāo)記！，A及B標(biāo)準(zhǔn)血清絕對(duì)不能相混,不要依靠用染料顏色標(biāo)記血清。工作中要形成自己的習(xí)慣！所用玻片、試管實(shí)驗(yàn)前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸標(biāo)準(zhǔn)血清液面，竹簽一端去混勻一側(cè)就不能去接觸另一側(cè)。一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，便于核實(shí)是否漏加血清。離心時(shí)間、速度嚴(yán)格要求，以防假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。試驗(yàn)用血清和試劑紅細(xì)胞都應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化。要在光亮的背景下觀察凝集,可使用光鏡檢查小的凝集,同時(shí)應(yīng)注意觀察凝集強(qiáng)度，有助于A、B亞型的發(fā)現(xiàn)，觀察后立即記錄觀察結(jié)果。,10,正反定型結(jié)果不一致的常見(jiàn)原因有哪些？,（）人為因素：試劑不標(biāo)準(zhǔn)、失效或污染；操作中加錯(cuò)樣本或試劑、離心速度不足或過(guò)度、細(xì)胞與血清比例不當(dāng)、結(jié)果判斷錯(cuò)誤等。（）客觀因素：因某些疾病導(dǎo)致抗原減弱如：白血病，MDS（骨髓增生異常綜合征）患者血型抗原減弱導(dǎo)致誤定血型。受檢者抗體效價(jià)低（如嬰幼兒、老年人、大量輸液的患者，血漿蛋白低下等）某些藥物干擾如輸注右旋糖酐后會(huì)干擾血型檢定。,11,為什么這次試驗(yàn)沒(méi)有安排玻片法的反定型？,因?yàn)榇嬖谟诓∪嘶颢I(xiàn)血者血清中的抗及抗，個(gè)體差異很大，如果效價(jià)較弱，在玻片上不足以凝集大量抗原陽(yáng)性的紅細(xì)胞，造成假陰牲的結(jié)果所以采用玻片法作反定型的結(jié)果常不可靠。而用試管離心法作反定型，則促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)，形成肉眼可見(jiàn)的凝塊，使結(jié)果更為可靠,12,二實(shí)驗(yàn)原理,血型就是紅細(xì)胞膜上特異抗原的類型。在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。血型鑒定是將受試者的紅細(xì)胞加入標(biāo)準(zhǔn)A型血清（含有抗B抗體）與標(biāo)準(zhǔn)B型血清（