選修1專題五DNA和蛋白質(zhì)技術(shù).doc

專題五 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)課題1 DNA的粗提取課標(biāo)要求（一）、能力要求1. 掌握DNA粗提取與鑒定的原理2. 能夠掌握提取DNA的實(shí)驗(yàn)操作中的主要步驟3. 熟練進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，掌握實(shí)驗(yàn)方法4. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵筮M(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（二）、內(nèi)容要求1. 了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)，DNA的溶解性2. 二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。重難熱點(diǎn)歸納課題重點(diǎn)：DNA的粗提取和鑒定方法。課題難點(diǎn)：DNA的粗提取和鑒定方法。復(fù)習(xí)策略1. 了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)，DNA的溶解性2. 二苯胺法鑒定DNA的方法和原理3. 說(shuō)明實(shí)驗(yàn)原理；明確每一步操作的道理；能夠設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)裝置；學(xué)會(huì)控制實(shí)驗(yàn)條件；分析和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方案、實(shí)驗(yàn)裝置、實(shí)驗(yàn)成敗的原因經(jīng)典例題剖析例1 在DNA分子的粗提取實(shí)驗(yàn)中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是（ ）A. 稀釋血液、沖洗樣品B. 使血細(xì)胞破裂，降低NaCl濃度使DNA析出C. 使血細(xì)胞破裂，增大DNA溶解度D. 使血細(xì)胞破裂，提取含雜質(zhì)較少的DNA解析：在該實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，第一次加入蒸餾水的目的是使血細(xì)胞過(guò)度吸水而破裂，以便核物質(zhì)溶解。第二次加入蒸餾水是為了降低NaCl濃度至0.14mol/l，因?yàn)榇藭r(shí)的DNA溶解度最小，可使DNA析出。例2 在制備雞血細(xì)胞液的過(guò)程中，加入檸檬酸鈉的目的是（ ）A. 防止凝血 B. 加快DNA析出 C. 加快DNA溶解 D. 加速凝血解析：檸檬酸鈉的作用是利用檸檬酸根離子與血漿中Ca2+離子結(jié)合成檸檬酸鈉，降低Ca2+離子濃度，使有關(guān)凝血酶活性降低。因此檸檬酸鈉是抗凝血物質(zhì)，防止凝血，有利于雞血細(xì)胞液的制備。答案：A例3 去除DNA雜質(zhì)時(shí)，可直接在濾液中加入（ ），反應(yīng)1015minA. 嫩肉粉 B. 蒸餾水 C. 2mol/lNaCl D. 酒精解析：嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)答案： A例4 DNA在NaCl溶液中溶解度有二重性，隨著NaCl溶液的變化而變化。（1）請(qǐng)?jiān)谙铝蠳aCl溶液中選出溶解度能使DNA析出最徹底的一種（ ）和溶解度最高的一種（ ）A. 0.14mol/l B. 2mol/l C. 0.15mol/l D. 0.3mol/l（2）DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些物質(zhì)卻可以溶于酒精溶液，利用這一原理可以_，可以推測(cè)溶于酒精中的物質(zhì)可能有_。（3）利用DNA與_變藍(lán)色的特性，將該物質(zhì)作為鑒定_的試劑。其實(shí)驗(yàn)過(guò)程要點(diǎn)是向放有_的試管中加熱4ml的_?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜赺5min，待試管_，觀察試管中溶液顏色的變化，這個(gè)實(shí)驗(yàn)也說(shuō)明DNA耐_溫。解析：根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理可知DNA在0.14mol/l的NaCl溶液中溶解度最低，在高濃度2mol/l中，溶解度最高。DNA存在于染色體上，為了把DNA和其他物質(zhì)分開(kāi)，采取DNA不溶于酒精的方法，目的是除去雜質(zhì)；利用DNA與二苯胺（沸水浴）成藍(lán)色的特性，可以鑒定提取的DNA。答案：（1）A；B （2）除去雜質(zhì)；某些脂類(lèi)、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)或其他大分子物質(zhì) （3）二苯胺；DNA；DNA；二苯胺試劑；沸水中水浴加熱；冷卻后；高例5 關(guān)于DNA在NaCl溶液中的溶解度，下面敘述中正確的時(shí)（ ）A. 隨著NaCl溶液濃度的增大，DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大B. 隨著NaCl溶液濃度的減少，DNA在NaCl溶液中的溶解度也減少C. DNA在NaCl溶液中的溶解度與NaCl溶液的濃度無(wú)關(guān)D. 當(dāng)NaCl溶液的濃度為0.14mol/l時(shí)，DNA的溶解度最低答案：D例6 在“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)中，將提取獲得的含有DNA的粘稠物（還含有較多雜質(zhì)）分別處理如下：第一， 放入0.14mol/l的NaCl溶液，攪拌后過(guò)濾，得濾液A和粘稠物a第二， 放入2mol/l的NaCl溶液，攪拌后過(guò)濾，得濾液B和粘稠物b第三， 放入冷卻的95%的酒精溶液中，攪拌后過(guò)濾，得濾液C和粘稠物c 以上過(guò)程獲得的濾液和粘稠物中因含DNA少而可以放棄的是_。解析：在不同濃度的NaCl溶液中DNA的溶解度是不同的。在0.14mol/l的NaCl溶液中DNA的溶解度最小，呈絲狀物析出。在2mol/l的NaCl溶液中DNA的溶解度最大，所以DNA呈溶解狀態(tài)，過(guò)濾后存在于濾液中。酒精溶液可使DNA分子凝集，呈絲狀物，過(guò)濾后存在于粘稠物中。答案：A、b、C基礎(chǔ)試題訓(xùn)練1. 下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說(shuō)法正確的是（ ） A、氯化鈉的濃度越低，對(duì)DNA的溶解度越大 B、人血也可代替雞血進(jìn)行實(shí)驗(yàn) C、檸檬酸鈉的主要作用是加速血細(xì)胞破裂D、DNA不能溶于酒精2. 在破碎雞血細(xì)胞時(shí)，要先加入20ml的蒸餾水，其作用是（ ）A. DNA溶解于水B. 血細(xì)胞破裂，DNA釋放C. 稀釋血液，防止凝固D. 有利于攪拌3. 在DNA的粗提取過(guò)程中，為了提取雞血細(xì)胞中的核物質(zhì)，需向雞血細(xì)胞液中注入適量的液體，既使條件很不充分的條件下，所注液體也不能用（ ）A、未滅菌處理的但無(wú)污染的池水 B、未長(zhǎng)期靜置的自來(lái)水C、滅菌后的蒸餾水 D、滅菌后的生理鹽水4. 在DNA粗提取實(shí)驗(yàn)中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是（ ） A、有利于溶解DNAB、有利于溶解雜質(zhì)C、減少DNA的溶解度D、減少雜質(zhì)的溶解度5. 下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說(shuō)法正確的是 （ ）A、氯化鈉的濃度越低，對(duì)DNA的溶解度越大B、人體的血液不可代替雞血進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)C、檸檬酸鈉的主要作用是加速血細(xì)胞破裂D、利用DNA易溶于酒精的特點(diǎn)可除去DNA中的部分雜質(zhì)6. 下列操作中，對(duì)DNA的提取量影響較小的是（ ）A. 使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂，發(fā)出DNA等核物質(zhì)B. 攪拌時(shí)，要用玻璃棒沿一個(gè)方向輕緩攪動(dòng)C. 在析出DNA粘稠物時(shí)，要緩緩加蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增多D. 在用酒精沉淀DNA時(shí)，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻7. 有關(guān)DNA粗提取的描述中，正確的是（ ）A. NaCl溶液的濃度越大，DNA的溶解度越大B. DNA易溶于酒精C. 在破裂的雞血細(xì)胞中加入蒸餾水，可使其破裂，放出DNA D. 在破裂的雞血細(xì)胞溶液中，加入2mol/l的NaCl溶液，可使DNA大量析出8. 若選擇的實(shí)驗(yàn)材料為植物細(xì)胞，破碎細(xì)胞時(shí)要加入一定量的洗滌劑和食鹽，加入食鹽的目的是（ ）A. 利于DNA的溶解B. 分離DNA和蛋白質(zhì)C. 溶解細(xì)胞膜D. 溶解蛋白質(zhì)9. 蛋白酶能將蛋白質(zhì)水解而使染色質(zhì)中的DNA分離出來(lái)，下列藥品可達(dá)到上述同一目的的是（ ）A. 蒸餾水 B. NaCl溶液 C. NaOH溶液 D. 鹽酸10. DNA不溶于（ ） A. NaCl溶液 B. KCl溶液 C. C2H5OH溶液 D. MgCl溶液11. 提取含雜質(zhì)較少的DNA所用的溶液是（ ）A. NaCl溶液B. 冷卻的酒精體積分?jǐn)?shù)為90的溶液C. 加熱的酒精體積分?jǐn)?shù)為90的溶液D. 冷卻的酒精體積分?jǐn)?shù)為90的溶液12. 如果在除去雜質(zhì)時(shí)選擇方案三，為什么要將濾液放在6075的恒溫水浴箱中保溫1015min（ ）A. 使DNA變性B. 使蛋白質(zhì)變性C. 使DNA和蛋白質(zhì)變性D. 分解蛋白質(zhì)13. 在研究DNA的基因樣本前，采集來(lái)的血樣需用蛋白水解酶處理，然后用有機(jī)溶劑除去蛋白質(zhì)。請(qǐng)問(wèn)：用蛋白質(zhì)水解酶處理血樣的目的（ ）A. 除去血漿中的蛋白質(zhì)B. 除去染色體上的蛋白質(zhì)C. 除去血細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)D. 除去血細(xì)胞中的所有蛋白質(zhì)，使DNA釋放，便于進(jìn)一步提純14. 回答下列關(guān)于DNA粗提取實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題：（1）實(shí)驗(yàn)中，在雞血細(xì)胞液中加入20ml蒸餾水的目的是_，當(dāng)過(guò)濾取得濾液后，再向溶液中加入2mol/l的NaCl溶液的目的是_。接著向NaCl溶液中加蒸餾水的目的是_。（2）DNA在NaCl溶液中的溶解度是變化的，當(dāng)絲狀物不再增加時(shí)，NaCl溶液的濃度相當(dāng)于_。創(chuàng)新應(yīng)用訓(xùn)練以花椰菜為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)： （1） 準(zhǔn)備材料：將新鮮的花椰菜和體積分?jǐn)?shù)為95的酒精溶液放入冰箱冷卻24h。（2） 研磨細(xì)胞，獲取含DNA的濾液：將花椰菜中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行成分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集濾液 加入洗滌劑的作用是什么？ 加入食鹽的作用是什么？ 這一步是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵，如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？ 此步驟獲得的濾液中可能會(huì)有哪些細(xì)胞成分？（3） 去除溶液中的雜質(zhì)，也就是DNA的純化 DNA的純化利用了DNA的哪些特性？ 根據(jù)實(shí)際情況，寫(xiě)出你去除雜質(zhì)的設(shè)計(jì)方案并寫(xiě)出方案依據(jù)的原理？（4） DNA的析出與鑒定 常溫下的酒精溶液也可使DNA析出，可實(shí)驗(yàn)一般要求采用預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為95的酒精溶液，從理論上分析，冷卻的酒精溶液有什么特點(diǎn)？ DNA鑒定的方法有哪些？ 參考答案：1.D 2.B 3.A 4.C 5.B 6.B 7.C 8.A 9.B 10.C 11.D 12.B 13.D 14.(1) 稀釋雞血細(xì)胞，使細(xì)胞破裂，放出DNA；溶解DNA；降低NaCl溶液的濃度，使更多的DNA析出。 （2）0.14mol/l 課題2 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段課標(biāo)要求（一）、能力要求1. 掌握PCR技術(shù)的基本原理2. 能夠掌握PCR實(shí)驗(yàn)操作中的主要步驟3. 了解PCR實(shí)驗(yàn)中每個(gè)步驟所發(fā)生的變化4. 熟練進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，掌握實(shí)驗(yàn)方法（二）、內(nèi)容要求1. PCR的反應(yīng)過(guò)程2. DNA的合成方向3. PCR反應(yīng)所需的實(shí)驗(yàn)條件4. PCR反應(yīng)緩沖液的組成成分5. Taq DNA聚合酶的應(yīng)用6. PCR實(shí)驗(yàn)中的具體操作步驟和實(shí)驗(yàn)操作中的注意事項(xiàng)7. PCR產(chǎn)物檢測(cè)的方法重難熱點(diǎn)歸納課題重點(diǎn)：PCR的原理和PCR的基本操作 課題難點(diǎn)：PCR的原理復(fù)習(xí)策略4. PCR技術(shù)的基本原理5. PCR技術(shù)的反應(yīng)過(guò)程、實(shí)驗(yàn)條件、反應(yīng)物的各種組成成分6. PCR實(shí)驗(yàn)中具體操作步驟和實(shí)驗(yàn)操作中的注意事項(xiàng) 7. PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法經(jīng)典例題剖析例1 在（ ）的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi) A. 1020 B. 80100 C. 2030 D. 4060解析：蛋白質(zhì)大多不能忍受6080的高溫，而DNA在80以上才會(huì)變性。答案：B例2 關(guān)于DNA的復(fù)制，下列敘述正確的是（ ）A. DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA，只能從5端延伸DNA鏈B. DNA復(fù)制不需要引物C. 引物與DNA母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)進(jìn)行結(jié)合D. DNA的合成方向總是從子鏈的3端向5端延伸解析：由于DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA，只能從引物的3端即復(fù)制方向由3端向5端延伸；由于DNA分子是反向平行的，子鏈?zhǔn)且罁?jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，在DNA聚合酶作用下合成的，其合成方向是從子鏈5端向3端延伸。答案：C例3 下列有關(guān)PCR描述，不正確的是（ ）A. 是一種酶促反應(yīng)B. 引物決定了擴(kuò)增的特異性C. 擴(kuò)增產(chǎn)量按y（1X）nD. 擴(kuò)增對(duì)象是氨基酸序列E. 擴(kuò)增對(duì)象是DNA序列解析：PCR是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，它以極少量的DNA為模板，以四種脫氧核苷酸為原理，在引物的作用下使DNA聚合酶從引物的3端連接脫氧核苷酸，短時(shí)間內(nèi)迅速?gòu)?fù)制上百萬(wàn)份的DNA拷貝，其擴(kuò)增產(chǎn)量為y（1X）n，y代表DNA片段擴(kuò)增后的拷貝數(shù)，x表示平均每次的擴(kuò)增效率，n代表循環(huán)次數(shù)，因此答案選D。答案：D例4：（1）PCR反應(yīng)需要的條件：緩沖溶液、DNA模板、引物、四種脫氧核苷酸、耐熱的DNA聚合酶，為什么？（2）在PCR反應(yīng)中與解旋酶作用相同的操作是：_。解析：生物體外，利用DNA的熱變性原理：80100時(shí)DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體，雙鏈分開(kāi)。答案：（1）PCR 反應(yīng)的本質(zhì)是DNA復(fù)制，其需要條件類(lèi)似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制 （2）95變性例5 空難之后對(duì)面目全非的航天員遺體殘骸辨認(rèn)可借助DNA雜交技術(shù)。該技術(shù)是從尸體和死者家屬提供的死者生前的生活用品中分別提取DNA，在一定溫度下水浴共熱，使DNA的氫鍵斷裂，雙鏈打開(kāi)。若兩份DNA樣本來(lái)自同一個(gè)體，在溫度降低時(shí)，兩份樣本中的DNA單鏈會(huì)通過(guò)氫鍵連接在一起；反之，則不能互補(bǔ)。已知某DNA單鏈堿基組成為ATCCGAT，則與它互補(bǔ)的另一條單鏈組成為_(kāi)，為保證準(zhǔn)確性，需用較多的DNA樣品，這可以通過(guò)一定的技術(shù)使DNA分子大量復(fù)制，若一個(gè)DNA分子中，腺嘌呤含量為15，復(fù)制所用的原料均為3H標(biāo)記的脫氧核苷酸，經(jīng)四次復(fù)制后，不含3H的DNA單鏈占全部單鏈的_，子代DNA分子中胞嘧啶的比例為_(kāi)。解析：在DNA中，兩條鏈上的堿基是互補(bǔ)的，即：A和T，G和C相互配對(duì)。答案：TAGGCTA；1/16；35基礎(chǔ)試題訓(xùn)練1. 引物的作用是（ ） A. 打開(kāi)DNA雙鏈 B. 催化合成DNA子鏈 C. 使DNA聚合酶能夠從引物的3端開(kāi)始復(fù)制 D. 提供模板2. DNA復(fù)制過(guò)程中的前提是（ ） A. 獲得引物 B. 催化合成DNA子鏈 C. 解旋 D. 4種脫氧核苷酸3. PCR操作中，從第二輪循環(huán)開(kāi)始擴(kuò)增的DNA片段（ ） A. 固定長(zhǎng)度 B. 一端固定 C. 都不固定 D. 不能確定4. 從第二次循環(huán)開(kāi)始，復(fù)制的DNA片段呈（ ）擴(kuò)增。 A. 直線 B. 指數(shù) C. 對(duì)數(shù) D. 不變5. 有關(guān)PCR的敘述中正確的是（ ） A. PCR反應(yīng)所需要的引物只是RNA B. PCR反應(yīng)所需要的材料是核糖核苷酸 C. PCR反應(yīng)所需要的酶在60會(huì)變性 D. PCR反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中進(jìn)行6. 下列操作過(guò)程的敘述中錯(cuò)誤的是（ ） A. PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌 B. PCR所用緩沖液和酶從冰箱拿出之后，迅速融化 C. PCR所用的緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在20儲(chǔ)存 D. 在微量離心管中添加反應(yīng)成分時(shí)，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換7. PCR利用了DNA的（ ）原理，來(lái)控制DNA的解聚和結(jié)合 A. 特異性 B. 穩(wěn)定性 C. 熱變性 D. 多樣性8. 假設(shè)PCR反應(yīng)中，只有一個(gè)DNA的片段作為模板，在5次循環(huán)后，反應(yīng)物中大約有（ ）個(gè)這樣的DNA片段。 A. 8 B. 16 C. 32 D. 649. 解旋酶的作用是（ ） A. 打開(kāi)DNA雙鏈 B. 提供DNA復(fù)制的模板 C. 催化合成DNA子鏈 D. 增加PCR的效率10. 在PCR反應(yīng)中，只有一個(gè)DNA的片段作為模板，經(jīng)過(guò)一次循環(huán)后，含引物I的DNA單鏈占DNA總鏈數(shù)的（ ） A. 1/2 B. 1/4 C. 1 D. 1/811. TaqDNA聚合酶的特點(diǎn)是（ ） A. 耐高溫 B. 耐鹽酸 C. 耐強(qiáng)堿 D. 不耐熱12. PCR的每次循環(huán)都可以分為三步，按循環(huán)的順序排列是（ ） A. 變性、延伸、復(fù)性 B. 變性、復(fù)性、延伸 C. 復(fù)性、變性、延伸 D. 延伸、變性、復(fù)制13. DNA復(fù)制時(shí)，合成DNA新鏈之前必須合成（ ） A. DNA引物 B. RNA引物 C. 新的脫氧核苷酸 D. 核苷酸14. （1）PCR與生物體內(nèi)的DNA復(fù)制有何區(qū)別？ （2）PCR每次循環(huán)都可分為_(kāi)、_和_三步。（3）_的發(fā)現(xiàn)和使用大大增加了PCR的效率，使PCR技術(shù)趨向_。（4）PCR通過(guò)控制_來(lái)控制雙鏈的_與_。（5）PCR反應(yīng)需要一定的緩沖溶液中提供_分別與兩條模板結(jié)合的_、_種脫氧核苷酸、_的DNA聚合酶。（6）從第二輪循環(huán)開(kāi)始，DNA聚合酶只能特異的復(fù)制_的DNA序列，使這段_的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。15. 在試管中合成DNA的實(shí)驗(yàn)過(guò)程是：先把高能磷酸鍵基因接到四種脫氧核糖上，然后將這四種磷酸脫氧核苷酸放入一支試管中，還要加入從某種生物內(nèi)提取的DNA聚合酶等酶系，最后放入少量的15N標(biāo)記的人體DNA分子，將試管放在適宜的溫度環(huán)境中，根據(jù)下列實(shí)驗(yàn)結(jié)果回答問(wèn)題：（1）生化分析得知：新合成的DNA分子中，A=T, G=C，這個(gè)事實(shí)說(shuō)明DNA的合成遵循_，新合成DNA分子中（A+T）/(G+C)的比率與15N標(biāo)記的DNA一樣，這說(shuō)明新的DNA分子是_。生化分析還得知，新合成的DNA分子中帶有15N標(biāo)記的DNA鏈占50，這個(gè)事實(shí)說(shuō)明_。（2）如果以不同生物的DNA為模板合成的各個(gè)新DNA分子之間，（A+T）/(G+C)的比值是否相同，為什么？_。（3）分別以不同生物的DNA為模板合成的各個(gè)新DNA分子之間存在著差異，這些差異是什么？_。（4）在一個(gè)新合成的DNA分子中，（A+T）/(G+C)的值是否與它的模板DNA的另一條單鏈相同？_。參考答案：1. D 2. D 3. D 4. B 5. D 6. B 7. B 8. C 9. A 10. B 11. A 12. A 13. B 14. （1）PCR反應(yīng)不需要解旋酶，而生物體內(nèi)DNA復(fù)制時(shí)需要解旋酶；PCR需要耐熱的DNA聚合酶，而生物體內(nèi)DNA聚合酶在高溫的時(shí)候會(huì)變性。PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，而生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要生物體自身的控制。 （2）變性；復(fù)性；延伸 （3）Taq聚合酶；自動(dòng)化 （4）溫度；解聚；結(jié)合 （5）DNA模板；兩種引物；四；耐熱 （6）處于兩個(gè)引物之間；固定長(zhǎng)度 15. （1）堿基互補(bǔ)配對(duì)原則；以DNA分子為模板的復(fù)制產(chǎn)物；DNA復(fù)制是半保留復(fù)制 （2）相同；因?yàn)樗蠨NA雙鏈中，A與T數(shù)目相同，C與G數(shù)目相同 （3）堿基的數(shù)目、比例和排列序列不同 （4）相同課題3 血紅蛋白的提取和分離課標(biāo)要求（一）、能力要求1. 血紅蛋白提取和分離的基本原理2. 血紅蛋白提取和分離的實(shí)驗(yàn)操作步驟3. 電泳分離樣品的原理4. 熟練進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，掌握實(shí)驗(yàn)方法（二）、內(nèi)容要求1. 了解凝膠色譜法的用途2. 掌握凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理。3.了解緩沖溶液的組成和作用機(jī)理4. 熟悉一般緩沖溶液的配制方法5. 電泳的基本原理6. 了解不同類(lèi)型的電泳。重難熱點(diǎn)歸納課題重點(diǎn)：凝膠色譜法的原理和方法。課題難點(diǎn)：樣品的預(yù)處理；色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填。復(fù)習(xí)策略8. 血紅蛋白提取和分離的基本原理和實(shí)驗(yàn)操作步驟9. 凝膠色譜法的原理和方法。10. 樣品的預(yù)處理；色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填。11. 熟悉一般緩沖溶液的配制方法12. 了解電泳的基本原理和不同類(lèi)型的電泳經(jīng)典例題剖析例1 利用凝膠色譜法，什么樣的蛋白質(zhì)先洗脫出來(lái)（ ）A. 相對(duì)分子質(zhì)量大的B. 溶解度高的C. 相對(duì)分子量小的D. 所代電荷多的解析：凝集色譜法使根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)能進(jìn)入凝膠內(nèi)部通道，路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢；相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，路程較短，移動(dòng)速度較快，首先洗脫出來(lái)。答案：A例2 蛋白質(zhì)提取和分離分為哪幾步（ ）A. 樣品處理、凝膠色譜操作、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳B. 樣品處理、凝膠色譜操作、純化C. 樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定D. 樣品處理、純化、粗分離、純度鑒定解析：蛋白質(zhì)的提取和分離分為樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定四步。A中凝膠色譜操作及SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳為實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的技術(shù)答案：C例3 在電場(chǎng)作用下，帶電分子會(huì)如何移動(dòng)？解析：生物大分子中有些可解離的基因，在一定PH作用下，這些基因會(huì)帶上正電或負(fù)電，在電場(chǎng)作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。答案：這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。例4 本課題中需要用緩沖液，緩沖溶液在一定范圍內(nèi)能抵制外界酸、堿對(duì)溶液PH值的影響，維持PH基本不變。那么在其他的科學(xué)實(shí)驗(yàn)中，我們會(huì)用到哪些緩沖實(shí)驗(yàn)?zāi)?？解析：注意?lián)系化學(xué)知識(shí)來(lái)綜合解答答案：在PCR技術(shù)進(jìn)行DNA擴(kuò)增時(shí)也用到了緩沖溶液；取人體的血液做體外實(shí)驗(yàn)，仍要維持人體血液7.357.45的PH范圍，而血漿中本來(lái)就存在緩沖對(duì)H2CO3/NaHCO3。可以抵抗外來(lái)酸、堿對(duì)PH造成的變化；在研究光合作用時(shí)，一般用NaHCO3溶液作為CO2的緩沖液等?；A(chǔ)試題訓(xùn)練1. 凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是（ ） A. 對(duì)其他分子的親和力 B. 溶解度 C. 所帶電荷多少 D. 相對(duì)分子質(zhì)量的大小2. 凝膠色譜法中所用的凝膠化學(xué)本質(zhì)大多是（ ） A. 糖類(lèi)化合物 B. 脂質(zhì) C. 蛋白質(zhì) D. 核酸3. 選用紅細(xì)胞作為分離蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)材料，有何好處（ ） A. 血紅蛋白是有色蛋白 B. 紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核 C. 紅細(xì)胞蛋白質(zhì)含量高 D. 紅細(xì)胞DNA含量高4. 將攪拌好的混合液離心來(lái)分離血紅蛋白溶液時(shí)，第二層是（ ） A. 甲苯 B. 血紅蛋白水溶液 C. 脂溶性物質(zhì)的沉淀層 D. 其他雜質(zhì)的沉淀5. 血紅蛋白因含有（ ）而呈紅色 A. O2 B. CO C. CO2 D.血紅素6. 下列操作正確的是（ ） A. 分離紅細(xì)胞時(shí)采用低速長(zhǎng)時(shí)間離心 B. 紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾水就可 C. 分離血紅蛋白溶液是低速短時(shí)間離心 D. 透析時(shí)要用20mmol/l的磷酸緩沖液，透析12h7. 樣品的加入和洗脫的敘述正確的是（ ） A. 先加入1ml透析后的樣品 B. 加樣前要使緩沖液緩慢下降全部流出 C. 如果紅色帶均勻一致的移動(dòng)，說(shuō)明色譜柱制作成功 D. 洗脫時(shí)可以用緩沖液也可以用清水8. 下列有關(guān)提取和分離血紅蛋白的程度敘述錯(cuò)誤的是（ ） A. 樣品的處理就是通過(guò)一系列操作收集到血紅蛋白溶液 B. 通過(guò)透析可以去除樣品中分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)，此為樣品的粗提取 C. 可通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化 D. 可通過(guò)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血紅蛋白的純度9. 凝膠色譜法操作正確的是（ ） A. 將橡皮塞上部用刀切出鍋底狀的凹穴 B. 將橡皮塞下部切出凹穴 C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面 D. 將尼龍網(wǎng)剪成與橡皮塞下部一樣大小的圓片10. 樣品的加入和洗脫的操作不正確的是（ ） A. 加樣前