重慶醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)考博試題.doc

臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)1. 病例分析（全英文的病例）去年考的是梗阻性黃疸2. 名詞解釋?zhuān)?）APTT（2）CTnT CTnI （3）FQ-PCR(4) 增強(qiáng)免疫比濁法（5）DNA芯片/基因芯片（6）TrFIA（7）AG（陰離子間隙）3. 簡(jiǎn)答題，分析題（1）脂蛋白與AS的關(guān)系？（2）影響酶促動(dòng)力學(xué)的因素？（3）腎小管與集合管的功能檢測(cè)？（4）實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)？（5）對(duì)一個(gè)已知基因序列片段的功能分析（其蛋白質(zhì)水平上的功能分析），設(shè)計(jì)你的實(shí)驗(yàn)思路分析化學(xué)1. 名詞解釋?zhuān)?）DNA芯片采用光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方法，將大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至組織切片、細(xì)胞等等生物樣品有序地高密度固化于支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝膠、尼龍膜等載體）的表面，制成點(diǎn)陣，然后與已標(biāo)記的待測(cè)生物樣品中靶分子雜交，通過(guò)特定的儀器比如激光共聚焦掃描對(duì)雜交信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測(cè)分析，從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。根據(jù)芯片上固定的探針不同，生物芯片包括基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片。如果芯片上固定的是肽或蛋白，則稱(chēng)為肽芯片或蛋白芯片；如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探針或DNA，就是DNA芯片。DNA芯片技術(shù)包含四個(gè)基本要點(diǎn)：DNA方陣的構(gòu)建、樣品的制備、雜交,雜交圖譜的檢測(cè)及讀出。DNA芯片技術(shù)的應(yīng)用：基因表達(dá)分析，基因型和多態(tài)性分析，疾病的診斷與治療，腫瘤檢測(cè)研究及抗腫瘤藥物篩選，臨床應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片(protein array)是近年來(lái)蛋白質(zhì)組學(xué)研究中興起的一種新的方法，它類(lèi)似于基因芯片，是將蛋白質(zhì)點(diǎn)到固相物質(zhì)上，然后與要檢測(cè)的組織或細(xì)胞等進(jìn)行“雜交”，再通過(guò)自動(dòng)化儀器分析得出結(jié)果。這里所指的“雜交”是指蛋白與蛋白之間如(抗體與抗原)在空間構(gòu)象上能特異性的相互識(shí)別。此方法與傳統(tǒng)的研究方法相比具有如下優(yōu)點(diǎn): 蛋白質(zhì)芯片是一種高通量的研究方法，能在一次實(shí)驗(yàn)中提供相當(dāng)大的信息量，使我們能夠全面、準(zhǔn)確的研究蛋白表達(dá)譜，這是傳統(tǒng)的蛋白研究方法無(wú)法做到的。蛋白質(zhì)組芯片的靈敏度高，它可以檢測(cè)出蛋白樣品中微量蛋白的存在，檢測(cè)水平已達(dá)ng 級(jí)。蛋白質(zhì)芯片具有高度的準(zhǔn)確性。 蛋白質(zhì)芯片的運(yùn)用：蛋白質(zhì)組芯片可用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的各個(gè)領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)大致可分為三個(gè)方面: 研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用，篩選新的蛋白質(zhì)。用于現(xiàn)在其它方法不能檢測(cè)到的，如蛋白質(zhì)-藥物、蛋白質(zhì)-脂質(zhì)之間的相互作用。還可用于檢測(cè)蛋白與小分子物質(zhì)的作用，例如蛋白質(zhì)與DNA ，RNA分子等。問(wèn)題：蛋白質(zhì)芯片的制作是決定其運(yùn)用的關(guān)鍵因素之一， 蛋白質(zhì)組芯片的制作比當(dāng)前流行DNA 芯片制作要復(fù)雜，（2）變性高效液相色譜（DHPLC）（Denaturing High Performance Liquid Chromatography，DHPLC）又稱(chēng)為溫度調(diào)控的雜合雙鏈色譜（Temperature Modulated HeteroduplexChromatography，TMHC），是一種檢測(cè)DNA突變的HPLC技術(shù)。DHPLC檢測(cè)DNA突變主要是在適當(dāng)?shù)牟糠肿冃詼囟群拖疵摋l件下，通過(guò)離子對(duì)反相高效液相色譜技術(shù)使不匹配的異源雙鏈DNA與匹配的同源雙鏈DNA得以分離和檢測(cè)。已廣泛用于基因突變檢測(cè)、單核苷酸多態(tài)性分析（SNPs）和短片段串聯(lián)重復(fù)序列分析（STRs）。在色譜分離過(guò)程中，帶正電荷的TEAA離子與帶負(fù)電荷的DNA締合為離子對(duì)，TEAA/DNA離子對(duì)通過(guò)TEAA分子中的烷基鏈在固定相上產(chǎn)生保留。DNA片段越長(zhǎng)，所帶負(fù)電荷越多，與之結(jié)合的TEAA分子就越多。因此，DNA片段越長(zhǎng)，與固定相的親和力就越強(qiáng)。所以，在不變性溫度條件下，可分離長(zhǎng)度不同的純合雙鏈DNA分子。（3）化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法（ECLIA）化學(xué)發(fā)光免疫分析包含兩個(gè)部分, 即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化, 形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體, 當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí), 同時(shí)發(fā)射出光子(hM) , 利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器測(cè)量光量子產(chǎn)額。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)(在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體) 直接標(biāo)記在抗原(化學(xué)發(fā)光免疫分析) 或抗體(免疫化學(xué)發(fā)光分析) 上, 或酶作用于發(fā)光底物?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析( chemi luminescent enzyme immunoassay,CLEIA ) , 應(yīng)屬酶免疫分析, 只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑, 操作步驟與酶免分析完全相同 5 : 以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)(如酶標(biāo)記的抗原或抗體) 進(jìn)行免疫反應(yīng), 免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物, 在信號(hào)試劑作用下發(fā)光, 用發(fā)光信號(hào)測(cè)定儀進(jìn)行發(fā)光測(cè)定。目前常用的標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶(HRP) 和堿性磷酸酶(AL P) , 它們有各自的發(fā)光底物。增強(qiáng)發(fā)光酶免疫分析(enhanced lum ines2cence enzym e imm unoassay, EL E IA )在發(fā)光系統(tǒng)中加入增強(qiáng)發(fā)光劑, 如對(duì)2碘苯酚等, 以增強(qiáng)發(fā)光信號(hào), 并在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定, 便于重復(fù)測(cè)量, 從而提高分析靈敏度和準(zhǔn)確性。在全自動(dòng)分析儀上, 還可通過(guò)計(jì)算機(jī)嚴(yán)密控制, 進(jìn)行自動(dòng)操作, 如加試劑, 混合, 溫育, 洗滌, 加發(fā)光試劑, 發(fā)光計(jì)數(shù), 數(shù)據(jù)處理, 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn), 直至完成病人血清樣品的分析并打印出結(jié)果。（4）生物傳感器生物傳感器是用生物活性材料（酶、蛋白質(zhì)、DNA、抗體、抗原、生物膜等）與物理化學(xué)換能器有機(jī)結(jié)合的一門(mén)交叉學(xué)科，是物質(zhì)分子水平的快速、微量分析方法。有著廣泛的應(yīng)用前景。各種生物傳感器有以下共同的結(jié)構(gòu)：包括一種或數(shù)種相關(guān)生物活性材料（生物膜）及能把生物活性表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)的物理或化學(xué)換能器（傳感器），二者組合在一起，用現(xiàn)代微電子和自動(dòng)化儀表技術(shù)進(jìn)行生物信號(hào)的再加工，構(gòu)成各種可以使用的生物傳感器分析裝置、儀器和系統(tǒng)。原理：待測(cè)物質(zhì)經(jīng)擴(kuò)散作用進(jìn)入生物活性材料，經(jīng)分子識(shí)別，發(fā)生生物學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生的信息繼而被相應(yīng)的物理或化學(xué)換能器轉(zhuǎn)變成可定量和可處理的電信號(hào)，再經(jīng)二次儀表放大并輸出，便可知道待測(cè)物濃度。特點(diǎn)：專(zhuān)一性強(qiáng)，分析速度快，準(zhǔn)確度高，操作系統(tǒng)比較簡(jiǎn)單 ，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)分析，成本低（5）生物信息學(xué)（6）代謝組學(xué)一門(mén)對(duì)某生物或細(xì)胞所有低分子量（相對(duì)分子量小于1000）代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析的一門(mén)新科學(xué)。與傳統(tǒng)的代謝研究相比，代謝組學(xué)通過(guò)現(xiàn)代化學(xué)的儀器分析技術(shù)測(cè)機(jī)體整個(gè)代謝產(chǎn)物譜的變化，并通過(guò)多元統(tǒng)計(jì)分析方法研究整體的生物學(xué)功能狀況。 根據(jù)研究對(duì)象的不同，目前科學(xué)界把它分為四個(gè)層面：代謝物靶標(biāo)的分析： 某個(gè)或幾個(gè)特定組分的分析。代謝譜分析： 少數(shù)預(yù)設(shè)的一些代謝產(chǎn)物的定量分析；代謝組學(xué)分析： 限定條件下的特定生物樣品中所有代謝組分的定性和定量。 指紋圖譜分析： 不分離鑒定具體單一組分，而是對(duì)樣品進(jìn)行快速分類(lèi) ；目前代謝組學(xué)研究主要集中于疾病的診斷，營(yíng)養(yǎng)學(xué)，藥物作用機(jī)制，藥物毒理學(xué)及植物學(xué)等方面； 代謝組學(xué)研究過(guò)程包括：前期的樣品制備,中期的代謝產(chǎn)物分離、檢測(cè)與鑒定以及后期的數(shù)據(jù)分析與模型建立三個(gè)部分。（7）LCM不同發(fā)育、生長(zhǎng)期和不同生理、病理?xiàng)l件下不同的細(xì)胞類(lèi)型的基因表達(dá)是不一致的，因此對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)的研究應(yīng)該精確到細(xì)胞甚至亞細(xì)胞水平。可以利用免疫組織化學(xué)技術(shù)達(dá)到這個(gè)目的，但該技術(shù)的致命缺點(diǎn)是通量低。LCM（Laser Capture Microdissection，激光捕獲顯微切割）技術(shù)可以精確地從組織切片中取出研究者感興趣的細(xì)胞類(lèi)型，因此LCM技術(shù)實(shí)際上是一種原位技術(shù)。取出的細(xì)胞用于蛋白質(zhì)樣品的制備，結(jié)合抗體芯片或二維電泳-質(zhì)譜的技術(shù)路線(xiàn)，可以對(duì)蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行原位的高通量的研究。很多研究采用勻漿組織制備蛋白質(zhì)樣品的技術(shù)路線(xiàn)，其研究結(jié)論值得懷疑，因?yàn)榻M織勻漿后不同細(xì)胞類(lèi)型的蛋白質(zhì)混雜在一起，最后得到的研究數(shù)據(jù)根本無(wú)法解釋蛋白質(zhì)在每類(lèi)細(xì)胞中的表達(dá)情況。雖然培養(yǎng)細(xì)胞可以得到單一類(lèi)型細(xì)胞，但體外培養(yǎng)的細(xì)胞很難模擬體內(nèi)細(xì)胞的環(huán)境，因此這樣研究得出的結(jié)論也很難用于解釋在體實(shí)際情況。因此在研究中首先應(yīng)該將不同細(xì)胞類(lèi)型分離，分離出來(lái)的不同類(lèi)型細(xì)胞可以用于基因表達(dá)研究，包括mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。 LCM技術(shù)獲得的細(xì)胞可以用于蛋白質(zhì)樣品的制備?？梢愿鶕?jù)需要制備總蛋白，或膜蛋白，或核蛋白等，也可以富集糖蛋白，或通過(guò)去除白蛋白來(lái)減少蛋白質(zhì)類(lèi)型的復(fù)雜程度。 LCM-二維電泳-質(zhì)譜的技術(shù)路線(xiàn)是典型的一條蛋白質(zhì)組學(xué)研究的技術(shù)路線(xiàn)，除此以外，LCM-抗體芯片也是一條重要的蛋白質(zhì)組學(xué)研究的技術(shù)路線(xiàn)。即通過(guò)LCM技術(shù)獲得感興趣的細(xì)胞類(lèi)型，制備細(xì)胞蛋白質(zhì)樣品，蛋白質(zhì)經(jīng)熒光染料標(biāo)記后和抗體芯片雜交，從而可以比較兩種樣品蛋白質(zhì)表達(dá)的異同。Clontech最近開(kāi)發(fā)了一張抗體芯片，可以對(duì)378種膜蛋白和胞漿蛋白進(jìn)行分析。該芯片同時(shí)配合了抗體芯片的全部操作過(guò)程的重要試劑，包括蛋白質(zhì)制備試劑，蛋白質(zhì)的熒光染料標(biāo)記試劑，標(biāo)記體系的純化試劑，雜交試劑等。 我個(gè)人認(rèn)為做2-D的都應(yīng)該來(lái)關(guān)注一下這項(xiàng)技術(shù)，它大大提高了2-D結(jié)果的參考價(jià)值和可信度，也許會(huì)成為以后的一種趨勢(shì)。2. 簡(jiǎn)答題（1）列舉各色譜法的優(yōu)勢(shì)（蛋白質(zhì)的分離方法，選擇不同的色譜分析模式）（2）氨基酸的測(cè)定？生物分析化學(xué)(2003年)1. 生物芯片的概念及其應(yīng)用。生物芯片（biochip）是指采用光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方法，將大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至組織切片、細(xì)胞等等生物樣品有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝膠、尼龍膜等載體）的表面，組成密集二維分子排列，然后與已標(biāo)記的待測(cè)生物樣品中靶分子雜交，通過(guò)特定的儀器比如激光共聚焦掃描或電荷偶聯(lián)攝影像機(jī)（CCD）對(duì)雜交信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測(cè)分析，從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。由于常用玻片/硅片作為固相支持物，且在制備過(guò)程模擬計(jì)算機(jī)芯片的制備技術(shù)，所以稱(chēng)之為生物芯片技術(shù)。根據(jù)芯片上的固定的探針不同，生物芯片包括基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片，另外根據(jù)原理還有元件型微陣列芯片、通道型微陣列芯片、生物傳感芯片等新型生物芯片。如果芯片上固定的是肽或蛋白，則稱(chēng)為肽芯片或蛋白芯片；如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探針或DNA，就是DNA芯片?；虮磉_(dá)譜研究，交測(cè)序和基因組文庫(kù)作圖，檢測(cè)基因突變和多態(tài)性，應(yīng)用于定位克隆2. 毛細(xì)管電泳的概念。3. 色譜分析的概念其應(yīng)用。（幾種柱層析、親和層析、離子交換層析）4. PCR的基本概念與基本操作過(guò)程。5. 蛋白質(zhì)組分析的技術(shù)。6. 核酸的提取原則，基本操作步驟（DNA、RNA）。7. 描述色譜峰的基本參數(shù)。8. 正相與反相色譜的