中國藥典微生物培訓菌種的保藏和管理.ppt

2020 3 25 1 菌種的保藏和管理 2010年06月 2020 3 25 2 菌種保藏 微生物實驗過程中 實驗菌株可能是最敏感的 因為它們的生物活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件 2020 3 25 3 實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化 使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變 按統(tǒng)一操作程序制備菌株是微生物試驗結果一致性的重要保證 2020 3 25 4 菌種保藏是微生物學檢驗工作中的一項常規(guī)技術 菌種的科學保藏和管理直接關系到檢驗結果的正確性試驗菌種應是從國家菌種中心獲得的標準菌種 經過實驗室復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后保存 2020 3 25 5 菌種保藏的中心任務是廣泛收集各種有用的微生物菌種 選擇最適宜的保藏方法 避免在保藏和傳代過程中死亡 變異 衰退及活力減弱 以保持菌種原有的各種生物學特性 從而達到保證研究 檢驗 交換和使用要求的目的 2020 3 25 6 菌種保藏機構 中國菌種保藏管理委員會 CCCCM 成立于1979年 下設7個菌種保藏管理中心及有關專業(yè)實驗室 共12個單位實行統(tǒng)一領導 按專業(yè)分工管理 國外的菌種保藏機構 2020 3 25 7 常用菌種保藏方法 菌種保藏的原則根據微生物菌種的生理 生化特性 在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度 使細胞基本上處于休眠狀態(tài) 生長繁殖受到抑制但由不至于死亡 以減低菌種的變異率 2020 3 25 8 標準菌株的復活或培養(yǎng)物的制備應按供應商提供的說明或按驗證的方法進行 標準儲備菌株 從國內 外菌種收藏機構獲得的標準菌株經復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后 既為標準儲備菌株 常用菌種保藏方法 2020 3 25 9 低溫 干燥 缺氧 缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代謝和生長繁殖 因此低溫 干燥和真空是菌種保藏的重要手段 標準儲備菌株經純度和特性確認后保存 2020 3 25 10 工作菌株不可代替標準菌株 標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株 2020 3 25 11 不同的微生物 應根據其生物特征來選擇最適宜的保藏方法 菌種的保藏方法一般分四個階段 2020 3 25 12 挑選特征典型的純菌菌落 確定保藏的合適菌體形態(tài) 選擇最適宜的方法保藏 定期對保藏的菌種進行檢查 2020 3 25 13 二 菌種的傳代和使用 工作菌種的傳代次數應嚴格控制 不得超過5代 從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第0代 防止過度的傳代造成菌種變異 1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中 任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉種或傳代一次 必要時 實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認 2020 3 25 14 細菌的接種 分離和培養(yǎng)接種 分離 培養(yǎng)是微生物學實驗的基本作技術 要求嚴格的無菌操作和在無菌環(huán)境下進行 2020 3 25 15 常用培養(yǎng)基種類斜面接種半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基 2020 3 25 16 接種方法涂布法劃線法穿刺法直接加入法等 2020 3 25 17 分離 分段劃線法 連續(xù)劃線法 涂布分離法 傾注分離法等 2020 3 25 18 培養(yǎng) 接種后的培養(yǎng)基 根據不同微生物生長條件的要求 置培養(yǎng)基于適宜微生物生長的環(huán)境中 使其生長繁殖的過程 需氣培養(yǎng)法厭氧培養(yǎng)法 2020 3 25 19 培養(yǎng)后微生物的生長判斷固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 2020 3 25 20 菌種的傳代和使用菌液的制備和使用 2020 3 25 21 三 菌種的檢查與復壯 菌種的衰退菌種經過長期人工傳代培養(yǎng)或保藏 由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變弱或消失的現(xiàn)象 2020 3 25 22 控制菌種的衰退方法 控制傳代次數 創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件 用不同類型的細胞進行傳代 采用有效的保藏方法 2020 3 25 23 定期檢查菌種在保藏期間必須定期檢查 發(fā)現(xiàn)變異或衰退 應及時給予恢復 2020 3 25 24 菌種的復壯使衰退的菌種重新恢復原來的優(yōu)良特性的過程 實驗室主要采用分離純化的方法 2020 3 25 25 四 菌種的管理 1 使用菌種的單位 應具備從事微生物工作的條件和設備 菌種應由專人負責管理 管理人員應具有微生物專業(yè)知識和技術水平 并應具有較強的責任心 2020 3 25 26 2 實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度 3 菌種應冷藏或冷凍保存 保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品 放置菌種的專門冰箱 應上鎖管理 2020 3 25 27 4 應由專人按操作規(guī)程和有關要求定期進行傳代 并定期對保存的菌種進行檢查 一般每年1 2次 或定期更換棟干菌種 2020 3 25 28 詳細記錄菌種的來源 接收 傳代 分離 復壯 使用和鑒定等均應做好詳細記錄 包括菌種傳代或使用時間 名稱 菌號 代數 傳代或保存形式 分離復壯方式 使用內容 鑒定情況等都應進行詳細的記錄 2020 3 25 29 菌種不得隨意帶出實驗室 外單位索取 購買應由登記 并包裝嚴密 菌種處理應嚴格按操作規(guī)程進行 滅