中國(guó)藥典微生物培訓(xùn)菌種的保藏和管理.ppt

2020 3 25 1 菌種的保藏和管理 2010年06月 2020 3 25 2 菌種保藏 微生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中 實(shí)驗(yàn)菌株可能是最敏感的 因?yàn)樗鼈兊纳锘钚院吞匦砸蕾囉诤线m的試驗(yàn)操作和貯藏條件 2020 3 25 3 實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化 使盡可能減少菌種污染和生長(zhǎng)特性的改變 按統(tǒng)一操作程序制備菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證 2020 3 25 4 菌種保藏是微生物學(xué)檢驗(yàn)工作中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù) 菌種的科學(xué)保藏和管理直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的正確性試驗(yàn)菌種應(yīng)是從國(guó)家菌種中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌種 經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后保存 2020 3 25 5 菌種保藏的中心任務(wù)是廣泛收集各種有用的微生物菌種 選擇最適宜的保藏方法 避免在保藏和傳代過(guò)程中死亡 變異 衰退及活力減弱 以保持菌種原有的各種生物學(xué)特性 從而達(dá)到保證研究 檢驗(yàn) 交換和使用要求的目的 2020 3 25 6 菌種保藏機(jī)構(gòu) 中國(guó)菌種保藏管理委員會(huì) CCCCM 成立于1979年 下設(shè)7個(gè)菌種保藏管理中心及有關(guān)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室 共12個(gè)單位實(shí)行統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo) 按專業(yè)分工管理 國(guó)外的菌種保藏機(jī)構(gòu) 2020 3 25 7 常用菌種保藏方法 菌種保藏的原則根據(jù)微生物菌種的生理 生化特性 在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度 使細(xì)胞基本上處于休眠狀態(tài) 生長(zhǎng)繁殖受到抑制但由不至于死亡 以減低菌種的變異率 2020 3 25 8 標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說(shuō)明或按驗(yàn)證的方法進(jìn)行 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株 從國(guó)內(nèi) 外菌種收藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后 既為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株 常用菌種保藏方法 2020 3 25 9 低溫 干燥 缺氧 缺乏營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代謝和生長(zhǎng)繁殖 因此低溫 干燥和真空是菌種保藏的重要手段 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株經(jīng)純度和特性確認(rèn)后保存 2020 3 25 10 工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株 標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株 2020 3 25 11 不同的微生物 應(yīng)根據(jù)其生物特征來(lái)選擇最適宜的保藏方法 菌種的保藏方法一般分四個(gè)階段 2020 3 25 12 挑選特征典型的純菌菌落 確定保藏的合適菌體形態(tài) 選擇最適宜的方法保藏 定期對(duì)保藏的菌種進(jìn)行檢查 2020 3 25 13 二 菌種的傳代和使用 工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制 不得超過(guò)5代 從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代 防止過(guò)度的傳代造成菌種變異 1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中 任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次 必要時(shí) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn) 2020 3 25 14 細(xì)菌的接種 分離和培養(yǎng)接種 分離 培養(yǎng)是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本作技術(shù) 要求嚴(yán)格的無(wú)菌操作和在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行 2020 3 25 15 常用培養(yǎng)基種類斜面接種半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基 2020 3 25 16 接種方法涂布法劃線法穿刺法直接加入法等 2020 3 25 17 分離 分段劃線法 連續(xù)劃線法 涂布分離法 傾注分離法等 2020 3 25 18 培養(yǎng) 接種后的培養(yǎng)基 根據(jù)不同微生物生長(zhǎng)條件的要求 置培養(yǎng)基于適宜微生物生長(zhǎng)的環(huán)境中 使其生長(zhǎng)繁殖的過(guò)程 需氣培養(yǎng)法厭氧培養(yǎng)法 2020 3 25 19 培養(yǎng)后微生物的生長(zhǎng)判斷固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 2020 3 25 20 菌種的傳代和使用菌液的制備和使用 2020 3 25 21 三 菌種的檢查與復(fù)壯 菌種的衰退菌種經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期人工傳代培養(yǎng)或保藏 由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象 2020 3 25 22 控制菌種的衰退方法 控制傳代次數(shù) 創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件 用不同類型的細(xì)胞進(jìn)行傳代 采用有效的保藏方法 2020 3 25 23 定期檢查菌種在保藏期間必須定期檢查 發(fā)現(xiàn)變異或衰退 應(yīng)及時(shí)給予恢復(fù) 2020 3 25 24 菌種的復(fù)壯使衰退的菌種重新恢復(fù)原來(lái)的優(yōu)良特性的過(guò)程 實(shí)驗(yàn)室主要采用分離純化的方法 2020 3 25 25 四 菌種的管理 1 使用菌種的單位 應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備 菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理 管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識(shí)和技術(shù)水平 并應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心 2020 3 25 26 2 實(shí)驗(yàn)室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度 3 菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存 保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品 放置菌種的專門冰箱 應(yīng)上鎖管理 2020 3 25 27 4 應(yīng)由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進(jìn)行傳代 并定期對(duì)保存的菌種進(jìn)行檢查 一般每年1 2次 或定期更換棟干菌種 2020 3 25 28 詳細(xì)記錄菌種的來(lái)源 接收 傳代 分離 復(fù)壯 使用和鑒定等均應(yīng)做好詳細(xì)記錄 包括菌種傳代或使用時(shí)間 名稱 菌號(hào) 代數(shù) 傳代或保存形式 分離復(fù)壯方式 使用內(nèi)容 鑒定情況等都應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的記錄 2020 3 25 29 菌種不得隨意帶出實(shí)驗(yàn)室 外單位索取 購(gòu)買應(yīng)由登記 并包裝嚴(yán)密 菌種處理應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行 滅