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文檔簡介
精品文檔1、限制性核酸內切酶、DNA連接酶、載體2、限制性內切酶、磷 酸二酯鍵、黏性末端、黏性末端、平末端3、細菌的質粒、 噬菌體的衍生物、動植物病毒、 DNA、 能夠在宿主細胞中復制 并穩(wěn)定地保存、載體DNA必須有一個或多個限制酶切點, 以便目的基因插入到載體上去、具有某些標記基 因,便于進行篩選4、目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定5、人工合成法、反轉錄法、根據已知的氨基酸序列合成DNA、基因文庫、基因 組文庫、部分基因組文庫、PCR、DNA6、聚合酶鏈式 反應、體外復制特定DNA片段的核苷酸合成、DNA雙鏈復制、指數、引物、高溫變性解螺旋、低溫復性恢復雙鏈、中溫延伸7、目的基因 、 啟動子 、 終止子 、 標記基因8、轉化、農桿 菌轉化法基因槍法、花粉管通道法、植物細胞組織培養(yǎng)、細胞的全能性、顯微注射技術、動物細胞培養(yǎng)9、Ga2+(GaCl2)、感受態(tài)10、檢測轉基因生物染色體的DNA上是否插入目的基因、 DNA分子雜交技術、 檢測目的基因是否轉錄了mRMA、 DNA分子雜交技術、 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質、抗原抗體雜交、 個體生物學水平鑒定11、正?;?、遺傳病、12、基因工程能夠打破種屬的界限、在基因水平上定向改變生物遺傳性、已有基因的重新組合,產生的蛋白質是自然界已經存在的13、從預期的蛋白質功能出發(fā)、設計預期的蛋白質結構、推測應有的按基酸序列、找到相對應的脫氧核苷酸序列、 基因、蛋白質、蛋白質、第二代基因工程選修三專題二細胞工程 填空1、細胞工程:研究的水平: 細胞整體水平或細胞器水平種類: 植物細胞工程、動物細胞工程2、植物細胞工程技術有:植物體細胞雜交和植物組織培養(yǎng);植物細胞工程所采用技術的理論基礎是細胞的全能性。動物細胞工程技術有動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)、單克隆抗體技術、核移植、胚胎移植等。3、生物體的細胞具有使后代細胞形成完整個體的潛能的特性叫細胞的全能性。其原理是生物體的細胞一般地包含有該物種所特有的全套遺傳物質,都有發(fā)育成為完整個體所必需的全部基因,。細胞全能性的大小依次為受精卵生殖細胞體細胞。細胞表達全能性的條件是:離體狀態(tài);有一定營養(yǎng)物質、激素和其他外界條件4、讓已經分化的細胞,經過誘導后,失去其特有的結構和功能而轉變成未分化細胞的過程叫脫分化;愈傷組織由一團排列疏松而無規(guī)則,高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞組成,在組織培養(yǎng)誘導其形成時的光照條件必需是避光培養(yǎng)。脫分化產生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個過程叫再分化。5、組織培養(yǎng)過程(流程圖) 離體的植物器官、組織或細胞-愈傷組織-胚狀體或叢芽-試管苗6、植物體細胞雜交是指將不同的植物體細胞,在一定條件下融合成雜種細胞,并把雜種細胞培育成新的植物體的技術。與傳統的有性雜交相比,其優(yōu)點在于:打破了不同種生物間的生殖隔離限制,大大擴展了可用于雜交的親本組合范圍、克服不同生物的遠緣雜交的不親和性。7、植物體細胞雜交中用酶解法(纖維素酶、果膠酶)先去細胞壁得到原生質體,然后再讓其融合,誘導融合的方法有物理法(包括離心、振動、電刺激)和化學法(一般用聚乙二醇(PEG) ),標志著兩原生質體融合成功的是雜種細胞再生細胞壁。9、植物細胞工程的實際應用(一)植物繁殖的新途徑微型繁殖:快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術。其特點是: 保持優(yōu)良品種的遺傳特性;高效快速地實現種苗的大量繁殖.作物脫毒:材料: 無病毒的莖尖(2)切取莖尖進行組織培養(yǎng)獲得脫毒苗,用之進行繁殖的作物不會或極少感染病毒。神奇的人工種子優(yōu)點:后代無性狀分離不受氣候、季節(jié)和地域限制、方便貯存和運輸(與植物組織培養(yǎng)相比)。(2)技術: 植物組織培養(yǎng)(3)結構人工薄膜(可提供營養(yǎng),似胚乳成分)+胚狀體或不定芽或頂芽或腋芽。(二)作物新品種的培育單倍體育種:方法: 花藥的離體培養(yǎng)優(yōu)點: 后代穩(wěn)定遺傳,都是純合體; 明顯縮短育種年限突變體的利用產生: 植物組織培養(yǎng)利用: 篩選對人們有利突變體,進而培育新品種(三)細胞產物的工廠化生產1.種類:蛋白質,脂肪,糖類,藥物,香料,生物堿等.2.技術: 植物的組織培養(yǎng)(一般在在愈傷組織時的細胞中可以獲得相應細胞產物)10、動物細胞培養(yǎng):就是從動物有機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細胞生長和增殖。11、懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上稱細胞貼壁:12、當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時,細胞就會停止分裂增殖,這種現象稱為細胞的接觸抑制。13、動物細胞培養(yǎng)過程; 胰蛋白酶、膠原蛋白酶 加培養(yǎng)液稀釋制成動物胚胎或幼齡動物的組織、器官-單個細胞-原代培養(yǎng)細胞懸液-10代細胞-50代細胞-無限傳代(傳代培養(yǎng)) 細胞株 細胞系 (遺傳物質未改變)(遺傳物質已改變)14、動物細胞培養(yǎng)的條件(1)無菌、無毒的環(huán)境 (添加一定量的抗生素,定期更換培養(yǎng)液)(2)營養(yǎng):葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。(3)溫度和pH:溫度36.5+(-)0.5度;pH:7.2-7.4(4)氣體環(huán)境:所需的氣體主要是O2和CO2(95%空氣和5% CO2 )15、植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理細胞的全能性細胞增殖培養(yǎng)基性質固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、動物血清培養(yǎng)結果植物體細胞株、細胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株等獲得細胞或細胞產物16、動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核,移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中。使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體.用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物17、體細胞核移植過程流程圖供體體細胞細胞培養(yǎng)供體細胞核減中期 注入 細胞融合 重組細胞 發(fā)育 重組胚胎 移入 代孕母體 卵母細胞- 去核生出與供體遺傳基礎相同的個體(性別等多數性狀相同)18、動物體細胞核移植技術和克隆動物()、原理:動物體細胞核的全能性()、供體細胞:優(yōu)良動物體體細胞培養(yǎng),取10代以內細胞()、受體細胞:減數第二分裂中期()去核卵母細胞()、結論:動物體細胞核具有全能性()、實質:是一種無性生殖(克隆動物絕大多數性狀與提供細胞核的一方相同)19、動物細胞融合的誘導因素除了有物理(如電激)、化學(如PEG)之外還有滅活的病毒。20、動物細胞融合過程不同DNA的兩個細胞 (滅活的病毒、電激)細胞融合(有絲分裂) 雜交細胞(單核)21、由單個B淋巴細胞經過無性繁殖(克隆),形成基因型相同的細胞群,這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。其特點有:特異性強、靈敏度高,并可大量制備 22、單克隆抗體制備過程23、雜交瘤細胞具有的特點有:能迅速繁殖,又能產生專一的抗體24、單克隆抗體應用主要有:(1)作為診斷試劑;(2)用于治療疾病和運載藥物(運載抗癌藥物,形成“生物導彈”治療腫瘤)25、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞膜的流動性細胞融合的方法去除細胞壁后誘導原生質體融合使細胞分散后誘導細胞融合誘導方法物理(離心、振蕩、電刺激)化學(聚乙二醇)物理、化學方法(同左)滅活的病毒用途獲得雜種植株制備單克隆抗體選修三專題三胚胎工程 填空1、胚胎工程指對動物早期胚胎或配子所進行的多種顯微操作和處理技術,如胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細胞培養(yǎng)等技術。經過處理后獲得的胚胎,還需要移植到雌性動物體內生產后代,以滿足人類大各種需求。其理論基礎:哺乳動物的受精卵和早期胚胎 的發(fā)育規(guī)律2、精子的發(fā)生(1)發(fā)生場所:睪丸 (2)時間:初情期生殖機能衰老(3)精子細胞變形中的主要變化:細胞核精子頭的主要部分 高爾基體-頭部的頂體中心體精子的尾 線粒體線粒體鞘膜(尾的基部)細胞內其他物質原生質滴(球狀,最后脫落)3、卵子的發(fā)生(1)發(fā)生部位:卵巢和輸卵管(2)時間:減數第一次分裂是在雌性動物排卵前后完成;減數第二次分裂是在精子和卵子結合的過程完成的。4、受精(1)概念:是精子和卵子結合形成合子(即受精卵)的過程。(2)場所:輸卵管(3)受精完成標志:在卵黃膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個極體時(兩個極體指第一極體和次級卵母細胞減數第二次分裂產生的第二極體)。(4)過程:受精前的準備階段和受精階段精子必須在雌性動物的生殖道發(fā)生相應的生理變化后,才獲得受精能力的生理現象叫精子獲能。卵子的準備:在輸卵管中發(fā)育到減數第二次分裂的中期,才具有與精子受精的能力受精階段:a.精子穿越放射冠和透明帶頂體反應使頂體內的酶釋放出來并溶解放射冠內的卵丘細胞之間的物質透明帶反應是防止多精入卵受精的第一道屏障b.精子進入卵黃膜 卵黃膜封閉作用是防止多精入卵受精的第二道屏障c.原核形成:雄原核形成和雌原核形成d.配子結合:雌雄原核融合形成合子(受精卵)6、胚胎發(fā)育(1)主要階段(過程):受精卵-卵裂期-桑椹胚-囊胚期-原腸胚(2)個體發(fā)育起點:受精卵,其最初發(fā)育在輸卵管進行有絲分裂(3)卵裂期:在透明帶內進行有絲分裂,特點是:細胞數量不斷增加,但胚胎總體積并不增加,或略有減少。(4)桑椹胚:胚胎細胞數目為32個左右,細胞未分化,為全能細胞(5)囊胚期-:(內含囊胚腔),細胞分化為:內細胞團:發(fā)育成胎兒各組織;滋養(yǎng)層細胞:發(fā)育成胎膜和胎盤(6)囊胚進一步擴大,會導致透明帶破裂,胚胎從其中伸展出來,這一過程叫做孵化(7)原腸胚(內含原腸腔):包括:滋養(yǎng)層:發(fā)育成胎膜和胎盤;外胚層:內細胞團表層細胞;中胚層:內外胚層間最后出現;內胚層:內細胞團下方細胞7、試管動物技術是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精,并通過培養(yǎng)發(fā)育成早期胚胎后,再經移植產生后代的技術。8、體外受精:3步(1)卵母細胞的采集和培養(yǎng):超數排卵法:小鼠、兔、豬、羊等,促性腺激素處理,使其排出更多的卵子,從輸卵管中沖取卵子,直接與獲能的精子在體外受精從卵巢中采集卵母細胞:大型家畜如牛,體外培養(yǎng)成熟到中期,與獲能的精子受精。(2)精子的收集和獲能:收集的方法:假陰道法、手握法和電刺激等獲能處理: 培養(yǎng)法:嚙齒動物、家兔和豬化學誘導法:牛、羊(3)受精:在獲能溶液或專用的受精溶液中完成受精過程9、哺乳動物胚胎培養(yǎng)液成分: 水、無機鹽、有機鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸以及動物血清等. 不同動物進行胚胎移植的時間不同,早期胚胎培養(yǎng)一般不超過囊胚期。10、胚胎移植:將雌性動物的早期胚胎,或者通過其他方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動物的體內,使之發(fā)育為新個體的技術。(1)意義:加速育種工作和品種改良;大量節(jié)省購買種畜的費用;一胎多產;保存品種資源和瀕危物種;可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖潛力,縮短繁殖周期,增加一生繁殖的后代數量。(2)胚胎移植的生理學基礎:供體和受體相同的生理環(huán)境;早期胚胎處于游離狀態(tài),為胚胎的收集提供了可能;受體對移入子宮的胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥;胚胎與受體建立正常的聯系,但遺傳物質沒有改變。(6)胚胎移植的基本程序:供體、受體的選擇和處理:供體:遺傳性能和生產性能優(yōu)秀的個體;受體:健康和正常繁殖能力的個體處理: 同期發(fā)情具體做法:注射促性腺激素采集卵母細胞方法是超數排卵;具體做法:注射促性腺激素配種或進行人工受精:精子來源: 同種優(yōu)良的雄性動物胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存:在配種或輸精后第7天,用特制的沖卵裝置,把供體母牛子宮內的胚胎沖洗出來這個過程叫沖卵(“卵”早期胚胎),移植時胚胎應發(fā)育到桑椹胚或囊胚階段胚胎移植:方法一:手術法:引出受體子宮和卵巢,將胚胎注入子宮角,縫合創(chuàng)口。方法二:非手術法:將裝有胚胎的移植管送入受體母牛子宮的相應部位,注入胚胎。移植后的檢查:11、胚胎分割(1)概念:采用顯微手術(機械方法)的方法將早期胚胎分割成2分胚,4分胚或8分胚,經體內或體外培養(yǎng)后植入受體,以得到同卵雙胎或同卵多胎的技術。(2)特點:后代具有相同的遺傳物質,因此胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法之一。(3)理論基礎:動物胚胎細胞的全能性。(4)選擇的胚胎:發(fā)育良好的,形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。(5)使用的主要儀器:實體顯微鏡和顯微操作儀。(6)具體操作:用分割針或分割刀片將胚胎切開,吸出其中的半個胚胎,注入預先準備好的空透明帶中,或直接將裸半胚移植給受體。(7)操作注意事項:對囊胚階段的胚胎進行分割時,要將內細胞團均等分割。胚胎分割的份數越多,操作的難度會越大,移植的成功率也越低。(8)胚胎分割技術的缺陷:剛出生動物的體重偏低,毛色和斑紋還存在差異; 采用胚胎分割技術產生同卵多胎的可能性是有限的。13、胚胎干細胞(1)概念:簡稱ES或EK細胞,是由早期胚胎或原始性腺中
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