艾滋病實驗室質(zhì)量管理.doc

此文檔收集于網(wǎng)絡，如有侵權，請聯(lián)系網(wǎng)站刪除天馬行空官方博客：/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632艾滋病實驗室質(zhì)量管理1 范圍本章規(guī)定了艾滋病實驗室質(zhì)量管理，包括質(zhì)量保證、質(zhì)量控制和質(zhì)量評價，適用于全國各級各類艾滋病實驗室的質(zhì)量管理。2 規(guī)范性引用文件全國艾滋病檢測工作規(guī)范，衛(wèi)生部，1997。ISO 15189, Medical Laboratories-Particular requirements for quality and competence (formerly Qualily Management in the Medical Laboratory).NCCLS C24-A2. Statistical Quality Control for Quantitatire Measurements; Principles and Definitions; Approved Guideline-Second Edition. 3 質(zhì)量保證（QA）3.1 行政支持行政部門和領導要關心艾滋病實驗室的建設和發(fā)展，保證實驗室負責人和主要技術人員隊伍的穩(wěn)定，保證實驗室建筑和設備需要，給予充足的經(jīng)費支持，并進行經(jīng)常性監(jiān)督檢查。3.2 實驗室規(guī)范化建設艾滋病實驗室的設置及其建筑、設施、設備必須符合全國艾滋病檢測工作規(guī)范的要求。3.3 人員培訓及其評價實驗室工作人員上崗前必須接受技術培訓并獲得合格證書。在工作中要定期或不定期接受復訓。實驗室主管領導應定期對工作人員進行評價，包括工作的準確性、效率、執(zhí)行安全條例和規(guī)章制度情況、職業(yè)道德、出勤率以及上崗資格等。3.4 標本采集、運送和處理嚴格遵照本規(guī)范第一章。3.5 檢測方法和試劑的選擇應使用可靠的檢測方法和敏感性高、特異性好的試劑，并定期進行質(zhì)量評價。3.6 設備維護與校準設立常用儀器的維護及校準制度，以保證正常運轉(zhuǎn)。3.6.1 酶標讀數(shù)儀、洗板機每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護光學零件不沾灰塵。每月：檢查洗滌時各孔是否與相應的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規(guī)定要求。每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準并保留記錄。實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應隨時進行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。3.6.2 移液器1年至少應該標定1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應隨時進行校準。標定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準盒等。校準多道移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)、準確地加樣。移液器的精密度應在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。范例 用蒸餾水稱量法標定移液器：在室溫22無風的工作室中，在萬分之一級別天平上放置一個小三角燒瓶，用待校準的移液器吸取存放過夜的蒸餾水加入燒瓶底部，稱重并計算蒸餾水重量，連續(xù)稱重10次。加蒸餾水的量根據(jù)待校準移液器的規(guī)格而不同（表6），10次校準稱量均在要求的重量范圍內(nèi)為合格，貼上合格標簽，注明校準日期，不合格移液器要請生產(chǎn)廠家進行校準。填寫和保存校準記錄。表6 稱重法校準移液器方案移液器規(guī)格蒸餾水量要求重量范圍0.510l2l1.75 2.25 mg540l10l9.8 10.2 mg40200l70l69.4 70.6 mg2001000l300l298.0 302.0 mg15ml2000l1990.0 2010.0 mg210ml3500l3485.0 3515.0 mg3.6.3 冰箱和孵育箱必須每天檢查和記錄低溫、超低溫冰箱及孵育箱的溫度，并做好記錄。3.6.4 定期檢查其它儀器設備精密儀器及出具實驗結果的儀器必須定期校準，其它儀器定期檢查并做好記錄。3.7 文件和文件管理3.7.1 標準操作程序 (SOP) 艾滋病實驗室要建立覆蓋主要工作內(nèi)容的SOP文件。艾滋病實驗室應建立以下SOP：（1）樣品的接收、登記和處理，（2）檢測方法和步驟，（3）儀器的使用維護和校準，（4）實驗中的質(zhì)量控制，（5）結果解釋與報告，（6）保密程序，（7）檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存，（8）追蹤和處理，（9）實驗室的清理和消毒，（10）實驗室安全防護。 SOP通常包括（但不限于）以下內(nèi)容：（1）標題和編號（2）編寫和修改日期（3）編寫和修訂人員姓名（4）方法、目的和應用范圍（5）相應的職業(yè)規(guī)范（6）檢測設備和試劑（7）安全防護相關步驟（8）結果的解釋和報告（9）附錄，包括相關的附加文件如標準表格、設備和試劑盒說明書等。 SOP由各崗位工作人員起草，實驗室主任審定，并應定期修訂。修訂應該在實驗室主管人員（技術負責人）的領導下進行，每年至少1次。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關內(nèi)容。3.7.2 實驗原始記錄表應按實驗要求，設計操作的原始記錄表，標明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導實驗人員加樣。要注明試劑盒廠家、測定方法、批號、效期、操作人員和復核人員姓名及檢測日期。3.7.3 標本的登記收到標本后，及時登記有關參數(shù)，包括受檢者姓名或代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗結果、送檢日期、報告日期、備注 ( 必要時記錄通信地址 )等。3.7.4 HIV陽性標本的保存記錄包括HIV陽性標本的類型、貯存量、貯存溫度、貯存起始時間以及標本保管人姓名。3.7.5 文件存檔實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、免疫印跡試驗的膜反應條帶或其照片、檢測記錄表、標本登記、標本保存記錄以及儀器設備維修和校準記錄等都應該妥善存檔保存15年以上。最好同時使用計算機保存各種文件和記錄。4 質(zhì)量控制（QC）4.1 質(zhì)控血清的制備和保存（以ELISA試驗檢測HIV抗體為例）在每次實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設置的一套對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設置一個弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的23倍為宜。4.1.1 外部對照質(zhì)控血清的制備HIV抗體陽性和陰性血清，56 30min滅活，3000r/min，離心15min。弱陽性對照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并標定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測結果的防腐劑）用0.2m濾膜過濾除菌。4.1.2 外部對照質(zhì)控血清的保存 按一周實驗用量分裝、分類、標記、封口、-20凍存于非自動除霜冰箱中。 外部對照血清不可反復凍融，一旦融化后應該存放28，供一周內(nèi)使用。4.1.3 外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。4.1.4 外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預期的變異（cv20%），并且質(zhì)控物的成分應在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應無菌，并不含有影響ELISA反應的防腐劑。4.2 質(zhì)控圖的建立及應用（以ELISA試驗檢測HIV抗體為例）最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，使用累計和技術或趨勢分析技術的圖形可提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。4.2.1 建立質(zhì)控圖參數(shù)外部對照質(zhì)控物的平均值和標準差應建立在實驗室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物重復測定的基礎上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質(zhì)控物測定結果，以建立一個臨時性的平均值和標準差，當達到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的平均值和標準差。 算術平均值 ( )： 代表一組S/CO值的平均值。為了統(tǒng)計學上有顯著性意義，應該采用至少20次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結果計算出平均值。 標準差(s)：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個指標，是與對照質(zhì)控血清S/CO值均值有關的預期范圍。一組S/CO值的標準差以s表示。 變異系數(shù)(cv)：是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個指標，可以用來衡量檢測的重復性或精密度。 控制限：由實驗室根據(jù)對質(zhì)控物檢測結果的平均值和標準差來確定。例如12S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減2個標準差；13S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減3個標準差。計算公式為： x = n s 計算公式為： ( xn - )2 s = n-1 cv 計算公式為： s cv = - x 100 % 4.2.2 繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的（計算出的）“控制限”進行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并按時間順序點入本實驗室每次試驗質(zhì)控血清的測定值。質(zhì)控圖的繪制步驟： 在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)( )和標準差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應刪除。 將均值( )和標準差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱座標(Y軸)，每一次(天)試驗作橫座標(x軸)，繪制質(zhì)控圖。 從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。4.2.3 質(zhì)控規(guī)則及使用實驗室在報告實驗結果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結果來決定。目前許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，常用的是12S和13S規(guī)則。 告警（12S）：當外部對照的S/CO值超出 +2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。 失控（13S）：當外部對照的S/CO值超出 +3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。 位移：連續(xù)幾次（35次）外部對照S/CO值都落在均值的一側則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。 趨勢：連續(xù)幾次（57次）外部對照S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。質(zhì)控規(guī)則的使用應檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時應具有較低的假失控概率?？疾煸囼炏到y(tǒng)的可靠性應采用多標準質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點為：出現(xiàn)一次2s范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。出現(xiàn)下列情況時，應暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)10次結果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側。4.2.4 質(zhì)控圖的分析及失控處理實驗室應建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當質(zhì)控已有計劃并恰當?shù)貓?zhí)行時，要求可靠的平均值和標準差用于計算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當出現(xiàn)失控時進行如重復質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的方法，必須找出問題原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。4.2.5 繪制和分析質(zhì)控圖的要點 要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到20個數(shù)據(jù)，求均值( )和標準差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應刪除。 由專人負責建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月的質(zhì)量控制情況。 建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒也應重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。 發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結果失控，應填寫報告單，上交質(zhì)量負責人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告。 使用新批次的外部對照質(zhì)控物時，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20，表示外部對照處于穩(wěn)定狀態(tài)。4.3 “即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對第3次檢驗結果進行質(zhì)控。具體計算方法如下：4.3.1 將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3xn(x1為最小值，xn為最大值)。4.3.2 計算 和s。4.3.3 計算SI上限值 和SI下限值。SI上限=X最大值-sSI下限=-X最小值s4.3.4 將SI上限、SI下限與SI值表（表7）中的數(shù)字比較。表7 SI值表nn3sN2snn3sn2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.88（1）當SI上限和SI下限 n3s值時說明該值已在3s范圍之外，屬“失