——人教版選修一微生物的實驗室培養(yǎng) 教案.doc

江蘇省新沂市棋盤中學(xué)高二生物選修一1.1微生物的實驗室培養(yǎng)教案一課題： 使用時間： 主備人： 教學(xué)目標：1、知識與技能：了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識；掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸汽滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)2、過程與方法：分析實驗思路的確定和形成的原因，分析實驗流程，對比前面的實驗設(shè)計，歸納共性，分析差異，增加印象3、情感態(tài)度價值觀：形成勇于實踐、嚴謹求實的科學(xué)態(tài)度和科學(xué)精神教學(xué)重點：無菌技術(shù)的操作教學(xué)難點：無菌技術(shù)的操作教學(xué)方法：啟發(fā)式教學(xué)教具使用：多媒體課件，高壓蒸汽滅菌鍋及有關(guān)設(shè)備共案部分個案部分教學(xué)過程教師主導(dǎo)活動學(xué)生主體活動課前：高壓蒸汽滅菌鍋及有關(guān)設(shè)備的準備，布置學(xué)生預(yù)習(xí)。及時了解學(xué)生的預(yù)習(xí)情況，認真準備課堂教學(xué)內(nèi)容。完成預(yù)習(xí)任務(wù)。課中：引入：在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用中，都利用了微生物的發(fā)酵作用，其中的微生物來自于制作過程中的自然感染。而在工業(yè)化生產(chǎn)中，為了提高發(fā)酵的質(zhì)量，需要獲得優(yōu)良菌種，并保持發(fā)酵菌種的純度。這就要涉及到微生物的培養(yǎng)、分離、鑒別等基本技術(shù)。現(xiàn)在我們開始學(xué)習(xí)微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用。根據(jù)學(xué)生預(yù)習(xí)情況引導(dǎo)學(xué)生合作探究，成果展示。重點強調(diào)高壓蒸汽滅菌鍋使用的注意事項及安全問題。教師進行實驗演示，并指導(dǎo)學(xué)生進行實驗。3結(jié)果分析與評價31培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。32在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。33培養(yǎng)12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。原因是時間越長，菌落中細菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動，但菌落數(shù)增多。思考1在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。思考2頻繁使用的菌種利用臨時保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4冰箱中，每36個月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點是保存時間較短，容易發(fā)生污染和變異；后者將菌種與無菌體積等量混合后保存在20冷凍箱中。安排學(xué)生進行課堂檢測并進行講評和總結(jié)。學(xué)生展示：11 培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用：12 培養(yǎng)基的化學(xué)成分從細胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有哪些營養(yǎng)成分？13 培養(yǎng)基應(yīng)滿足微生物生長要求。牛肉膏和蛋白胨主要為微生物提供哪些營養(yǎng)物質(zhì)。活動2：閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：14 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？。15 無菌技術(shù)包括哪些？16消毒和滅菌區(qū)別？17 常用的消毒和滅菌方法分別有哪些？高壓蒸汽滅菌鍋使用注意事項有哪些？培養(yǎng)基的配制原則有哪些？完成課堂檢測。（見學(xué)案）課后：布置課外作業(yè)及下一節(jié)預(yù)習(xí)提綱。（見導(dǎo)學(xué)案）學(xué)生完成課外作業(yè)及下一節(jié)預(yù)習(xí)。板書設(shè)計微生物的實驗室培養(yǎng)培養(yǎng)基無菌技術(shù)純化大腸桿菌培養(yǎng)基的配制配制培養(yǎng)基的原則配制培養(yǎng)基的方法計算稱量溶化調(diào)ph分裝加棉塞滅菌倒平板平板劃線法稀釋涂布法系列稀釋平板涂布教學(xué)札記三、其他補充教學(xué)資料（各位教師根據(jù)各班教學(xué)特點選擇補充資料，可另附紙）1基礎(chǔ)知識11 培養(yǎng)基的種類包括 固體 培養(yǎng)基和 液體 培養(yǎng)基等。思考1瓊脂是從紅藻中提取的 多糖 ，在配制培養(yǎng)基中用作為 凝固劑 。【補充】培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用：標準培養(yǎng)基類型配制特點主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多菌種分離,鑒定,計數(shù)半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少菌種保存液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生，產(chǎn)降低成本目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥劑菌種的鑒別選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學(xué)成分菌種的分離12 培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括 水 、 無機鹽 、 碳源 、 氮源 四類營養(yǎng)成分。思考2從細胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？c、h、o、n、p、s是構(gòu)成細胞原生質(zhì)的基本元素，約占原生質(zhì)總量的97以上?！狙a充】碳源：如co2、糖類、脂肪酸等有機物，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和分泌物，并提供能量。氮源：如n2、氨鹽、硝酸鹽、牛肉膏、蛋白胨等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝物等。含有c、h、o、n的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等。13 培養(yǎng)基除滿足微生物生長的 ph 、 特殊營養(yǎng)物質(zhì) 和 氧氣 等要求。【補充】生長因子：某些微生物正常生長代謝過程中必須從培養(yǎng)基中吸收的微量有機小分子，如某些氨基酸、堿基、維生素等。思考3牛肉膏和蛋白胨主要為微生物提供 糖 、 維生素 和 有機氮 等營養(yǎng)物質(zhì)。思考4培養(yǎng)乳酸桿菌時需要添加 維生素 ，培養(yǎng)霉菌時需要將培養(yǎng)基ph調(diào)節(jié)為 酸性 ，培養(yǎng)細菌時需要將ph調(diào)節(jié)為 中性或微堿性 ?；顒?：閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：14 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 防止外來雜菌的入侵 。15 無菌技術(shù)包括：（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進行 清潔和消毒 ；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行 滅菌 ；（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在 酒精燈火焰附近 旁進行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與 周圍物品 相接觸。16 比較消毒和滅菌（填表）比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強烈全部微生物能思考5無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是 防止感染實驗操作者 。17 消毒方法：生活經(jīng)常用到的是 煮沸 消毒法；（2）對一些不耐高溫的液體，則使用 巴氏 消毒法（作簡要介紹）；（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑 石炭酸或煤酚皂 等溶液以增強消毒效果，然后使用 紫外線 進行物理消毒。（4）實驗操作者的雙手使用 酒精 進行消毒；（5）飲水水源用 氯氣 進行消毒。18滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用 灼燒 滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用 干熱 滅菌法，所用器械是 干熱滅菌箱 ；（3）培養(yǎng)基、無菌水等使用 高壓蒸汽 滅菌法，所用器械是 高壓蒸汽滅菌鍋 。（4）表面滅菌和空氣滅菌等使用 紫外線 滅菌法，所用器械是 紫外燈 。思考6對接種環(huán)滅菌時要用酒精燈的 充分燃燒 層火焰灼燒可能伸入試管或培養(yǎng)皿的部位。思考7利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時物品不能擺得太擠，目的是避免妨礙熱空氣流通。思考8物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是 有利于鍋內(nèi)溫度升高 ；隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至 100k pa，溫度為 121 ，并維持 1530 min；最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至 零 時打開鍋蓋，其目的是防止 容器中的液體暴沸 ?！狙a充】培養(yǎng)基的配制原則：目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。例如：碳氮比41時，谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為31時，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。ph要適宜：細菌培養(yǎng)基ph中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。高二年級第二學(xué)期生物學(xué)科 總第二課時導(dǎo)學(xué)案課題：微生物的實驗室培養(yǎng)使用時間： 編制：一、學(xué)習(xí)目標： 通過本節(jié)課學(xué)習(xí)了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識；掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸汽滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，分析實驗思路的確定和形成的原因，分析實驗流程，對比前面的實驗設(shè)計，歸納共性，分析差異，增加印象。二、知識構(gòu)成：1基礎(chǔ)知識11 培養(yǎng)基的種類包括 培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基等。思考1瓊脂是從紅藻中提取的 ，在配制培養(yǎng)基中用作為 。12 培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括 、 、 、 四類營養(yǎng)成分。思考2從細胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？ 13 培養(yǎng)基除滿足微生物生長的 、 和 等要求。思考3牛肉膏和蛋白胨主要為微生物提供 、 和 等營養(yǎng)物質(zhì)。思考4培養(yǎng)乳酸桿菌時需要添加 ，培養(yǎng)霉菌時需要將培養(yǎng)基ph調(diào)節(jié)為 ，培養(yǎng)細菌時需要將ph調(diào)節(jié)為 ?；顒?：閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：14 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 。15 無菌技術(shù)包括：（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進行 ；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行 ；（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在 旁進行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與 相接觸。16 比較消毒和滅菌（填表）比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌思考5無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是 。17 消毒方法：生活經(jīng)常用到的是 消毒法；（2）對一些不耐高溫的液體，則使用 消毒法；（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑 等溶液以增強消毒效果，然后使用 進行物理消毒。（4）實驗操作者的雙手使用 進行消毒；（5）飲水水源用 進行消毒。18滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用 滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用 干熱 滅菌法，所用器械是 ；（3）培養(yǎng)基、無菌水等使用 高壓蒸汽 ，所用器械是 。（4）表面滅菌和空氣滅菌等使用 滅菌法，所用器械是 。思考6對接種環(huán)滅菌時要用酒精燈的 層火焰灼燒可能伸入試管或培養(yǎng)皿的部位。思考7利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時物品不能擺得太擠，目的是 。思考8物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是 ；隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至 ，溫度為 ，并維持 min；最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至 時打開鍋蓋，其目的是防止 。三、學(xué)法和自檢：1要將從土壤中提取的自生固氮菌與其他的細菌分離出來，應(yīng)將它們接種在 a加入氮源和殺菌劑的培養(yǎng)基上 b不加入氮源和不加殺菌劑的培養(yǎng)基上c加入氮源，不加殺菌劑的培養(yǎng)基上 d不含氮源和殺菌劑的培養(yǎng)基上課題 四、達標檢測1不可能作為異養(yǎng)微生物碳源的是a牛肉膏 b含碳有機物 c石油 d含碳無機物2根瘤菌能利用的營養(yǎng)物質(zhì)的組別是anh3，（ch2o），nacl bn2，（ch2o），cacl2 c銨鹽，co2，nacl dno2，co2，cacl23配制培養(yǎng)基的敘述中正確的是a制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂 b加入青霉素可得到放線菌c培養(yǎng)自生固氮菌不需氮源 d發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基4自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別是a碳源 b氮源 c無機鹽 d特殊營養(yǎng)物質(zhì)5下表是有關(guān)4種生物的能源、碳源、氮源和代謝類型的概述。其中正確的是( )生 物硝化細菌根瘤菌酵母菌谷氨酸棒狀桿菌能 源氧化nh3n2的固定分解糖類等有機物光 能碳 源c02糖類糖類糖類氮 源nh3n2nh4+、no3-尿 素代謝類型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)兼性厭氧型自養(yǎng)需氧型 a根瘤菌、谷氨酸棒狀桿菌 b硝化細菌、酵母菌 c酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌 d硝化細菌、根瘤菌五、學(xué)習(xí)小結(jié)和課外作業(yè)：1、學(xué)習(xí)小結(jié)：2、上本作業(yè)：簡述培養(yǎng)基的主要成分、生理功能和類型。3、課本或資料選題：、收集生活中與微生物有關(guān)的實例，并通過所學(xué)知識對其進行解釋。、我們打針輸液時，首先要用酒精擦拭針刺處，為什么？4、補充練習(xí)：a甲、乙、丙是三種微生物，下表、是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在種正常生長繁殖；甲能在中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是 （ ）粉狀硫10gk2hpo44gfeso40.5g蔗糖10g（nh4）2so40.4gh2o100mlmgso49.25gcacl20.5g+-+-+a、甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物b、甲、乙、丙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物c、甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物d、甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物b微生物（除病毒外）需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。下列有關(guān)微生物營養(yǎng)的說法正確的是a乳酸菌與硝化細菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的b微生物生長中不可缺少的一些微量的無機物稱為生長因子 c培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對微生物的增殖越有利 d生長因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長因子的能力往往不足。高二年級第二學(xué)期生物學(xué)科 總第三課時教案 課題 微生物的實驗室培養(yǎng)2 使用時間： 主備人：教學(xué)目標：1、知識與技能：鞏固微生物的培養(yǎng)操作平板劃線法等基本操作技術(shù)2、過程與方法：通過練習(xí)微生物的接種方法掌握微生物的實驗操作技術(shù)3、情感態(tài)度價值觀：培養(yǎng)學(xué)生動手能力和熱愛生物科學(xué)。教學(xué)重點：微生物的接種方法平板劃線法等基本操作技術(shù)教學(xué)難點：平板劃線法等基本操作技術(shù)教學(xué)方法：實驗法、自學(xué)指導(dǎo)。教具使用：接種材料等實驗儀器。共案部分個案部分教學(xué)過程教師主導(dǎo)活動學(xué)生主體活動課前：接種材料及有關(guān)設(shè)備的準備，布置學(xué)生預(yù)習(xí)。及時了解學(xué)生的預(yù)習(xí)情況，認真準備課堂教學(xué)內(nèi)容。完成預(yù)習(xí)任務(wù)。課中：活動一：思考熟悉。 1什么叫接種?接種的方法有哪些?常用的接種工具有哪些? 2接種過程中，酒精燈有哪些用途?接種時應(yīng)注意哪些問題? 提示：接種前后兩次用來灼燒試管口，防止空氣中的微生物污染管口并浸入試管；接種前后兩次用來灼燒接種環(huán)；為接種操作提供一個無菌區(qū)域，避免雜菌污染。 3微生物培養(yǎng)的操作過程中，為防雜菌，應(yīng)采取哪些措施? 提示：培養(yǎng)基要高壓高溫滅菌；接種環(huán)要用火焰灼燒來滅菌；雙手應(yīng)用75酒精消毒； 整個接種過程要在火焰旁邊的無菌區(qū)進行。 4接種操作為什么一定要在火焰旁邊進行? 提示：空氣中存在大量的微生物，而接種燈的火焰旁能形成一個無菌區(qū)域，在這里操作，可以避免雜菌污染。 疑難解析 1接種時注意事項： (1)對接種所用的器具及用品要徹底消毒滅菌，在腦子里要建立起“有菌”的觀念。 (2)接種始終都要在無菌條件下進行(酒精燈火焰附近構(gòu)成無菌區(qū))。不能隨意說話、談笑。 (3)接種畫線時要注意： 畫線的方向應(yīng)該從里往外。 線條要細且密。 不要重復(fù)畫線。 2無菌技術(shù)： (1)概念： (2)消毒與滅菌： 接種與培養(yǎng)大腸桿菌在第一個實驗的基礎(chǔ)上，用學(xué)生配制好的培養(yǎng)基進行接種實驗。教師可用課件配合本實驗進行實驗的演示，幫助學(xué)生理解接種的無菌操作過程，也可以請學(xué)生演示，大家討論操作的規(guī)范性。尤其要注意接種過程的無菌操作。學(xué)生根據(jù)導(dǎo)學(xué)案展示：實驗操作的過程包括哪幾步？1微生物接種的最常用方法有哪些？2平板劃線法的操作步驟哪些？3稀釋涂布平板法的過程及系列稀釋操作步驟包括哪些？學(xué)生活動安排： 熟悉基本實驗過程。 動手進行試驗操作。課堂檢測：見學(xué)案課后：布置課外作業(yè)及下一節(jié)預(yù)習(xí)提綱。完成課外作業(yè)及下一節(jié)預(yù)習(xí)提綱。板書設(shè)計教學(xué)札記三、其他補充教學(xué)資料（各位教師根據(jù)各班教學(xué)特點選擇補充資料，可另附紙）2實驗操作21 計算：根據(jù)配方比例，計算100ml培養(yǎng)基各成分用量。22 稱量：準確稱取各成分。稱取牛肉膏和蛋白胨時動作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空氣中水分。23 溶化：加水加熱熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化鈉繼續(xù)加熱；加入瓊脂；用蒸餾水定容到100ml。整個過程不斷用玻棒攪拌，目的是防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。24 調(diào)ph：用1mol/lnaoh溶液調(diào)節(jié)ph至偏堿性。25 滅菌：將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加塞包扎后用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌；所用培養(yǎng)皿用報紙包扎后用干熱滅菌箱滅菌。26 倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50左右時在酒精燈火焰附近操作進行。其過程是：在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出棉塞；右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰；左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋。待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。思考1錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是消滅瓶口的雜菌，防止雜菌感染培養(yǎng)基。思考2倒平板的目的是防止培養(yǎng)基冷卻過程中形成的水滴落到培養(yǎng)基表面。思考3若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基，則該平板能否培養(yǎng)微生物？為什么？不能?？諝庵须s菌會在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖，并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基。思考4配制斜面培養(yǎng)基中，試管要加塞棉塞的目的是保持通氣并防止雜菌感染。思考5試管培養(yǎng)基形成斜面的作用是增大接種面積。27 接種271微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布法，另外還有穿刺接種和斜面接種等。272平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。其操作步驟是：將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅。在酒精燈火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞。將菌種試管口通過火焰達到消滅試管口雜菌的目的。將冷卻的接種環(huán)伸入到菌液中取出一環(huán)菌種。將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞。將皿蓋打開一條縫隙，把接種環(huán)伸入平板內(nèi)劃35條平行線，蓋上皿蓋，不要劃破培養(yǎng)基。灼燒接種環(huán)，冷卻后從第一區(qū)劃線末端開始向第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)上述過程，完成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將第五區(qū)的劃線與第一區(qū)劃線相連。將平板倒置放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。思考6取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上的微生物；除第一次劃線外，其余劃線前都要灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種；取菌種和劃線前都要求接種環(huán)冷卻后進行，其目的是防止高溫殺死菌種；最后灼燒接種環(huán)的目的是防止細菌污染環(huán)境和操作者。思考7在第1次劃線后都從上次劃線末端開始的目的是獲得由單個細菌形成的標準菌落。273稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。當稀釋倍數(shù)足夠高時，即可獲得單個細菌形成的標準菌落。274系列稀釋操作：取盛有9ml水的無菌試管6支，編號101、102、103、104、105、106。用灼燒冷卻的移液管吸取1ml菌液注入編號為101試管中，并吹打3次，使之混勻。從101倍液中吸取1ml菌液注入到編號為102試管內(nèi)吹打均勻，獲得102倍液。依此類推。思考8操作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰12cm處。整個操作過程中使用了1支移液管。3實驗操作大腸桿菌的培養(yǎng)與純化： (1)平板劃線法： 通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落(colony)。 平板劃線操作：a將接種環(huán)放在火焰上燃燒，直到接種環(huán)燒紅。b在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。c將試管口通過火焰。d將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液。 e將試管口通過火焰，并塞上棉塞。 f左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種 的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上 皿蓋，注意不要劃破培養(yǎng)基。 g灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線 的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在 三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線 與第一區(qū)相連。 h將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 問題討論： a 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么? 提示：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。 b在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線? 提示：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 b 在做第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線? 提示：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的 數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 (2)稀釋平板法和涂抹平板法： 將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀 釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進 行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的 微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面 形成單個的菌落。 稀釋平板操作(如下圖)： a將分別盛有9 ml水的6支試管滅菌，并按 10叫10叫的順序編號。 b用無菌移液管吸取1 ml培養(yǎng)的菌液，注入 第二支試管中。取另一支無菌移液管，用手指輕壓 移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分 混勻。 c從10倍稀釋的試管中吸取1 ml稀釋液，注入10。倍稀釋的試管中，重復(fù)第2步的操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。 提示：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時，試管口和移液管應(yīng)在離火焰12 cm處。 涂抹平板操作： a將涂布器末端浸在盛有體積分數(shù)為70的酒精的燒杯中。取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。 b操作中一定要注意防火!不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。 (3)培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放人37c恒溫箱中，培養(yǎng)12 h和24 h，分析觀察并記錄結(jié)果。 微生物的實驗室培養(yǎng)2導(dǎo)學(xué)案 使用時間： 主備人： 一、學(xué)習(xí)目標： 通過練習(xí)微生物的接種方法掌握微生物的實驗操作技術(shù)二、知識構(gòu)成：1通常把在 條件下將微生物接入 的操 作過程叫 。 是微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵。 2常用的接種工具有 、 和 三種。3常用的接種方法有 、 和 三種。4衛(wèi)生學(xué)上常以 和 作為飲用水、牛奶、飲料和食品的衛(wèi)生鑒定指標。生活飲用水 中 每1 l不超過 個。 實驗操作的過程包括哪幾步？動手完成實驗操作過程。1 微生物接種的最常用方法有哪些？2 平板劃線法的操作步驟哪些？3 稀釋涂布平板法的過程及系列稀釋操作步驟包括哪些？【問題討論】涂抹平板法的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與稀釋平板的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進行無菌操作? 未接種的培養(yǎng)基表面有茵落生長，說明了什么? 在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了獨立菌落? 三、學(xué)法和自檢：1、培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿，接種環(huán)，實驗操作者的雙手、空氣，牛奶所采用的滅菌，消毒方法依次是 ( ) 化學(xué)消毒 灼燒滅菌 干熱滅菌 紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法 a b c d 2、下列操作與滅菌無關(guān)的是 ( ) a接種前用火焰灼燒接種環(huán) b接種前用酒精擦拭雙手 c將平板倒置，放人培養(yǎng)箱中培養(yǎng) d接種在酒精燈的火焰旁完成 3、有關(guān)稀釋平板法與涂抹平板法，敘述錯誤的是 ( ) a首先將菌液進行一系列的梯度稀釋 b然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面 c適宜條件下培養(yǎng) d結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落 4.根據(jù)實驗原理和材料用具，設(shè)計實驗選擇運載 體質(zhì)粒，明確質(zhì)粒的抗菌素基因所抗的抗菌素類別。 (1)實驗原理：作為運載體的質(zhì)粒，須有標記基因，這一標記基因是抗菌素抗性基因。故凡有抗菌素抗性的細菌，其質(zhì)粒才可用作運載體。 (2)材料用具：青霉素、四環(huán)素的10萬單位溶液，菌種試管，滅菌的含細菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，酒精燈，接種環(huán)，一次性注射器，蒸餾水，恒溫箱。 (3)方法步驟： 第一步：取3個含細菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿并標為1、2、3號，在酒精燈旁，用3支注射器分別向3個培養(yǎng)皿中注入1 ml蒸餾水、青霉素液、四環(huán)素液，并使之分布在整個培養(yǎng)基表面。 第二步： 。 第三步