醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件.ppt

生物化學(xué)BIOCHEMISTRY 王澤平生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 第1章 StructureandFunctionofProtein 什么是蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì) protein 是由許多氨基酸 aminoacids 通過(guò)肽鍵 peptidebond 相連形成的高分子含氮化合物 蛋白質(zhì)研究的歷史 1833年 從麥芽中分離淀粉酶 隨后從胃液中分離到類似胃蛋白酶的物質(zhì) 1864年 血紅蛋白被分離并結(jié)晶 19世紀(jì)末 證明蛋白質(zhì)由氨基酸組成 并合成了多種短肽 20世紀(jì)初 發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu) 完成胰島素一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定 20世紀(jì)中葉 各種蛋白質(zhì)分析技術(shù)相繼建立 促進(jìn)了蛋白質(zhì)研究迅速發(fā)展 1962年 確定了血紅蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu) 20世紀(jì)90年代 功能基因組與蛋白質(zhì)組研究地展開(kāi) 蛋白質(zhì)的生物學(xué)重要性 分布廣 所有器官 組織都含有蛋白質(zhì) 細(xì)胞的各個(gè)部分都含有蛋白質(zhì) 含量高 蛋白質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)最豐富的有機(jī)分子 占人體干重的45 某些組織含量更高 例如脾 肺及橫紋肌等高達(dá)80 1 蛋白質(zhì)是生物體重要組成成分 作為生物催化劑 酶 代謝調(diào)節(jié)作用免疫保護(hù)作用物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和存儲(chǔ)運(yùn)動(dòng)與支持作用參與細(xì)胞間信息傳遞 2 蛋白質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能 3 氧化供能 蛋白質(zhì)的分子組成TheMolecularComponentofProtein 第一節(jié) 組成蛋白質(zhì)的元素 主要有C H O N和S 有些蛋白質(zhì)含有少量磷或金屬元素鐵 銅 鋅 錳 鈷 鉬 個(gè)別蛋白質(zhì)還含有碘 各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近 平均為16 由于體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主 因此 只要測(cè)定生物樣品中的含氮量 就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質(zhì)的大致含量 100克樣品中蛋白質(zhì)的含量 g 每克樣品含氮克數(shù) 6 25 100 1 16 蛋白質(zhì)元素組成的特點(diǎn) 一 組成人體蛋白質(zhì)的20種氨基酸均屬于L 氨基酸 存在自然界中的氨基酸有300余種 但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種 且均屬L 氨基酸 甘氨酸除外 C N H 3 C O O H 非極性脂肪族氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸 二 氨基酸可根據(jù)側(cè)鏈結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進(jìn)行分類 一 側(cè)鏈含烴鏈的氨基酸屬于非極性脂肪族氨基酸 二 側(cè)鏈有極性但不帶電荷的氨基酸是極性中性氨基酸 三 側(cè)鏈含芳香基團(tuán)的氨基酸是芳香族氨基酸 四 側(cè)鏈含負(fù)性解離基團(tuán)的氨基酸是酸性氨基酸 五 側(cè)鏈含正性解離基團(tuán)的氨基酸屬于堿性氨基酸 幾種特殊氨基酸 脯氨酸 亞氨基酸 半胱氨酸 胱氨酸 三 20種氨基酸具有共同或特異的理化性質(zhì) 兩性解離及等電點(diǎn) 氨基酸是兩性電解質(zhì) 其解離程度取決于所處溶液的酸堿度 等電點(diǎn) isoelectricpoint pI 在某一pH的溶液中 氨基酸解離成陽(yáng)離子和陰離子的趨勢(shì)及程度相等 成為兼性離子 呈電中性 此時(shí)溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點(diǎn) 一 氨基酸具有兩性解離的性質(zhì) pH pI pH pI pH pI 氨基酸的兼性離子 陽(yáng)離子 陰離子 二 含共軛雙鍵的氨基酸具有紫外吸收性質(zhì) 色氨酸 酪氨酸的最大吸收峰在280nm附近 大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這兩種氨基酸殘基 所以測(cè)定蛋白質(zhì)溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的快速簡(jiǎn)便的方法 芳香族氨基酸的紫外吸收 三 氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色化合物 氨基酸與茚三酮水合物共熱 可生成藍(lán)紫色化合物 其最大吸收峰在570nm處 由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關(guān)系 因此可作為氨基酸定量分析方法 四 蛋白質(zhì)是由許多氨基酸殘基組成的多肽鏈 肽鍵 peptidebond 是由一個(gè)氨基酸的 羧基與另一個(gè)氨基酸的 氨基脫水縮合而形成的化學(xué)鍵 一 氨基酸通過(guò)肽鍵連接而形成肽 peptide 甘氨酰甘氨酸 肽鍵 肽是由氨基酸通過(guò)肽鍵縮合而形成的化合物 兩分子氨基酸縮合形成二肽 三分子氨基酸縮合則形成三肽 肽鏈中的氨基酸分子因?yàn)槊撍s合而基團(tuán)不全 被稱為氨基酸殘基 residue 由十個(gè)以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽 oligopeptide 由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽 polypeptide N末端 多肽鏈中有游離 氨基的一端C末端 多肽鏈中有游離 羧基的一端 多肽鏈有兩端 多肽鏈 polypeptidechain 是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結(jié)構(gòu) N末端 C末端 牛核糖核酸酶 二 體內(nèi)存在多種重要的生物活性肽 1 谷胱甘肽 glutathione GSH GSH過(guò)氧化物酶 GSH還原酶 NADPH H NADP GSH與GSSG間的轉(zhuǎn)換 體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽 神經(jīng)肽 neuropeptide 2 多肽類激素及神經(jīng)肽 蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)TheMolecularStructureofProtein 第二節(jié) 蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括 一級(jí)結(jié)構(gòu) primarystructure 二級(jí)結(jié)構(gòu) secondarystructure 三級(jí)結(jié)構(gòu) tertiarystructure 四級(jí)結(jié)構(gòu) quaternarystructure 定義 蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指在蛋白質(zhì)分子從N 端至C 端的氨基酸排列順序 一 氨基酸的排列順序決定蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu) 主要的化學(xué)鍵 肽鍵 有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵 一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ) 但不是決定蛋白質(zhì)空間構(gòu)象的唯一因素 二 多肽鏈的局部主鏈構(gòu)象為蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu) 主要的化學(xué)鍵 氫鍵 一 參與肽鍵形成的6個(gè)原子在同一平面上 參與肽鍵的6個(gè)原子C 1 C O N H C 2位于同一平面 C 1和C 2在平面上所處的位置為反式 trans 構(gòu)型 此同一平面上的6個(gè)原子構(gòu)成了所謂的肽單元 peptideunit 一 參與肽鍵形成的6個(gè)原子在同一平面上 參與肽鍵的6個(gè)原子C 1 C O N H C 2位于同一平面 C 1和C 2在平面上所處的位置為反式 trans 構(gòu)型 此同一平面上的6個(gè)原子構(gòu)成了所謂的肽單元 peptideunit 螺旋 helix 折疊 pleatedsheet 轉(zhuǎn)角 turn 無(wú)規(guī)卷曲 randomcoil 二 螺旋結(jié)構(gòu)是常見(jiàn)的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu) 螺旋 三 折疊使多肽鏈形成片層結(jié)構(gòu) 四 轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)卷曲在蛋白質(zhì)分子中普遍存在 轉(zhuǎn)角 無(wú)規(guī)卷曲是用來(lái)闡述沒(méi)有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結(jié)構(gòu) 五 模體是具有特殊功能的超二級(jí)結(jié)構(gòu) 在許多蛋白質(zhì)分子中 可發(fā)現(xiàn)二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段 在空間上相互接近 形成一個(gè)有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合 被稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu) 二級(jí)結(jié)構(gòu)組合形式有3種 二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段 在空間上相互接近 形成一個(gè)特殊的空間構(gòu)象 稱為模體 motif 模體是具有特殊功能的超二級(jí)結(jié)構(gòu) 鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體 鋅指結(jié)構(gòu) 螺旋 轉(zhuǎn)角 或環(huán) 螺旋模體鏈 轉(zhuǎn)角 鏈模體鏈 轉(zhuǎn)角 螺旋 轉(zhuǎn)角 鏈模體 模體常見(jiàn)的形式 六 氨基酸殘基的側(cè)鏈對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)形成的影響 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)是以一級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的 一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適合形成 螺旋或 折疊 它就會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的二級(jí)結(jié)構(gòu) 三 在二級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上多肽鏈進(jìn)一步折疊形成蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu) 整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對(duì)空間位置 即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置 定義 一 三級(jí)結(jié)構(gòu)是指整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對(duì)空間位置 肌紅蛋白 Mb 纖連蛋白分子的結(jié)構(gòu)域 二 結(jié)構(gòu)域是三級(jí)結(jié)構(gòu)層次上的局部折疊區(qū) 分子量較大的蛋白質(zhì)?？烧郫B成多個(gè)結(jié)構(gòu)較為緊密的區(qū)域 并各行其功能 稱為結(jié)構(gòu)域 domain 三 分子伴侶參與蛋白質(zhì)折疊 分子伴侶 chaperon 通過(guò)提供一個(gè)保護(hù)環(huán)境從而加速蛋白質(zhì)折疊成天然構(gòu)象或形成四級(jí)結(jié)構(gòu) 分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結(jié)合隨后松開(kāi) 如此重復(fù)進(jìn)行可防止錯(cuò)誤的聚集發(fā)生 使肽鏈正確折疊 分子伴侶也可與錯(cuò)誤聚集的肽段結(jié)合 使之解聚后 再誘導(dǎo)其正確折疊 分子伴侶在蛋白質(zhì)分子折疊過(guò)程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用 伴侶蛋白在蛋白質(zhì)折疊中的作用 亞基之間的結(jié)合主要是氫鍵和離子鍵 四 含有二條以上多肽鏈的蛋白質(zhì)具有四級(jí)結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用 稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu) 有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多條多肽鏈 每一條多肽鏈都有完整的三級(jí)結(jié)構(gòu) 稱為蛋白質(zhì)的亞基 subunit 由2個(gè)亞基組成的蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)中 若亞基分子結(jié)構(gòu)相同 稱之為同二聚體 homodimer 若亞基分子結(jié)構(gòu)不同 則稱之為異二聚體 heterodimer 血紅蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu) 五 蛋白質(zhì)的分類 根據(jù)蛋白質(zhì)組成成分 根據(jù)蛋白質(zhì)形狀 六 蛋白質(zhì)組學(xué) 一 蛋白質(zhì)組學(xué)基本概念 蛋白質(zhì)組是指一種細(xì)胞或一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì) 即 一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì) 二 蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)平臺(tái) 蛋白質(zhì)組學(xué)是高通量 高效率的研究 雙向電泳分離樣品蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)點(diǎn)的定位 切取蛋白質(zhì)點(diǎn)的質(zhì)譜分析 三 蛋白質(zhì)組學(xué)研究的科學(xué)意義 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系TheRelationofStructureandFunctionofProtein 第三節(jié) 一 一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ) 一 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)是高級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ) 天然狀態(tài) 有催化活性 尿素 巰基乙醇 去除尿素 巰基乙醇 非折疊狀態(tài) 無(wú)活性 二 一級(jí)結(jié)構(gòu)相似的蛋白質(zhì)具有相似的高級(jí)結(jié)構(gòu)與功能 三 氨基酸序列提供重要的生物化學(xué)信息 一些廣泛存在于生物界的蛋白質(zhì)如細(xì)胞色素 cytochromeC 比較它們的一級(jí)結(jié)構(gòu) 可以幫助了解物種進(jìn)化間的關(guān)系 四 重要蛋白質(zhì)的氨基酸序列改變可引起疾病 例 鐮刀形紅細(xì)胞貧血 這種由蛋白質(zhì)分子發(fā)生變異所導(dǎo)致的疾病 稱為 分子病 肌紅蛋白 血紅蛋白含有血紅素輔基 血紅素結(jié)構(gòu) 二 蛋白質(zhì)的功能依賴特定空間結(jié)構(gòu) 一 血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結(jié)構(gòu)相似 肌紅蛋白 myoglobin Mb 肌紅蛋白是一個(gè)只有三級(jí)結(jié)構(gòu)的單鏈蛋白質(zhì) 有8段 螺旋結(jié)構(gòu) 血紅素分子中的兩個(gè)丙酸側(cè)鏈以離子鍵形式與肽鏈中的兩個(gè)堿性氨基酸側(cè)鏈上的正電荷相連 加之肽鏈中的F8組氨酸殘基還與Fe2 形成配位結(jié)合 所以血紅素輔基與蛋白質(zhì)部分穩(wěn)定結(jié)合 血紅蛋白 hemoglobin Hb 血紅蛋白具有4個(gè)亞基組成的四級(jí)結(jié)構(gòu) 每個(gè)亞基可結(jié)合1個(gè)血紅素并攜帶1分子氧 Hb亞基之間通過(guò)8對(duì)鹽鍵 使4個(gè)亞基緊密結(jié)合而形成親水的球狀蛋白 Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合 Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb 氧合Hb占總Hb的百分?jǐn)?shù) 稱百分飽和度 隨O2濃度變化而改變 二 血紅蛋白亞基構(gòu)象變化可影響亞基與氧結(jié)合 肌紅蛋白 Mb 和血紅蛋白 Hb 的氧解離曲線 協(xié)同效應(yīng) cooperativity 一個(gè)寡聚體蛋白質(zhì)的一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后 能影響此寡聚體中另一個(gè)亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象 稱為協(xié)同效應(yīng) 如果是促進(jìn)作用則稱為正協(xié)同效應(yīng) positivecooperativity 如果是抑制作用則稱為負(fù)協(xié)同效應(yīng) negativecooperativity 血紅素與氧結(jié)合后 鐵原子半徑變小 就能進(jìn)入卟啉環(huán)的小孔中 繼而引起肽鏈位置的變動(dòng) 變構(gòu)效應(yīng) allostericeffect 蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化 稱為變構(gòu)效應(yīng) 三 蛋白質(zhì)構(gòu)象改變可引起疾病 蛋白質(zhì)構(gòu)象疾病 若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯(cuò)誤 盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變 但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變 仍可影響其功能 嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生 蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導(dǎo)致疾病的機(jī)理 有些蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊后相互聚集 常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀 產(chǎn)生毒性而致病 表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變 這類疾病包括 人紋狀體脊髓變性病 老年癡呆癥 亨停頓舞蹈病 瘋牛病等 瘋牛病是由朊病毒蛋白 prionprotein PrP 引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變 正常的PrP富含 螺旋 稱為PrPc PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為 折疊的PrPsc 從而致病 瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變 第四節(jié) 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)ThePhysicalandChemicalCharactersofProtein 一 蛋白質(zhì)具有兩性電離的性質(zhì) 蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外 氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán) 在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán) 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí) 蛋白質(zhì)解離成正 負(fù)離子的趨勢(shì)相等 即成為兼性離子 凈電荷為零 此時(shí)溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) isoelectricpoint pI 二 蛋白質(zhì)具有膠體性質(zhì) 蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一 分子量可自1萬(wàn)至100萬(wàn)之巨 其分子的直徑可達(dá)1 100nm 為膠粒范圍之內(nèi) 顆粒表面電荷水化膜 蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素 水化膜 帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) 溶液中蛋白質(zhì)的聚沉 三 蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)破壞而引起變性 在某些物理和化學(xué)因素作用下 其特定的空間構(gòu)象被破壞 也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無(wú)序的空間結(jié)構(gòu) 從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失 蛋白質(zhì)的變性 denaturation 造成變性的因素 如加熱 乙醇等有機(jī)溶劑 強(qiáng)酸 強(qiáng)堿 重金屬離子及生物堿試劑等 應(yīng)用舉例 臨床醫(yī)學(xué)上 變性因素常被應(yīng)用來(lái)消毒及滅菌 此外 防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑 如疫苗等 的必要條件 若蛋白質(zhì)變性程度較輕 去除變性因素后 蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能 稱為復(fù)性 renaturation 天然狀態(tài) 有催化活性 尿素 巰基乙醇 去除尿素 巰基乙醇 非折疊狀態(tài) 無(wú)活性 在一定條件下 蛋白疏水側(cè)鏈暴露在外 肽鏈融會(huì)相互纏繞繼而聚集 因而從溶液中析出 變性的蛋白質(zhì)易于沉淀 有時(shí)蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀 但并不變性 蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較堅(jiān)固的凝塊 此凝塊不易再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中 蛋白質(zhì)沉淀 蛋白質(zhì)的凝固作用 proteincoagulation 四 蛋白質(zhì)在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰 由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸 因此在280nm波長(zhǎng)處有特征性吸收峰 蛋白質(zhì)的OD280與其濃度呈正比關(guān)系 因此可作蛋白質(zhì)定量測(cè)定 蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱 呈現(xiàn)紫色或紅色 此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng) 雙縮脲反應(yīng)可用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)水解程度 五 應(yīng)用蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)可測(cè)定蛋白質(zhì)溶液含量 茚三酮反應(yīng) ninhydrinreaction 雙縮脲反應(yīng) biuretreaction 第五節(jié) 蛋白質(zhì)的分離純化與結(jié)構(gòu)分析TheSeparationandPurificationandStructureAnalysisofProtein 一 透析及超濾法可去除蛋白質(zhì)溶液中的小分子化合物 應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過(guò)有一定截留分子量的超濾膜 達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的 透析 dialysis 超濾法 利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開(kāi)的方法 二 丙酮沉淀 鹽析及免疫沉淀是常用的蛋白質(zhì)沉淀方法 使用丙酮沉淀時(shí) 必須在0 4 低溫下進(jìn)行 丙酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積 蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后 應(yīng)立即分離 除了丙酮以外 也可用乙醇沉淀 鹽析 saltprecipitation 是將硫酸銨 硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液 使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞 導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀 免疫沉淀法 將某一純化蛋白質(zhì)免疫動(dòng)物可獲得抗該蛋白的特異抗體 利用特異抗體識(shí)別相應(yīng)的抗原蛋白 并形成抗原抗體復(fù)合物的性質(zhì) 可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白 三 利用荷電性質(zhì)可用電泳法將蛋白質(zhì)分離 蛋白質(zhì)在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒 在電場(chǎng)中能向正極或負(fù)極移動(dòng) 這種通過(guò)蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù) 稱為電泳 elctrophoresis 根據(jù)支撐物的不同 可分為薄膜電泳 凝膠電泳等 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳 常用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定 等電聚焦電泳 通過(guò)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法 雙向凝膠電泳是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù) 幾種重要的蛋白質(zhì)電泳 四 應(yīng)用相分配或親和原理可將蛋白質(zhì)進(jìn)行層析分離 待分離蛋白質(zhì)溶液 流動(dòng)相 經(jīng)過(guò)一個(gè)固態(tài)物質(zhì) 固定相 時(shí) 根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小 電荷多少及親和力等 使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復(fù)分配 并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的 層析 chromatography 分離蛋白質(zhì)的原理 離子交換層析 利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進(jìn)行分離 凝膠過(guò)濾 gelfiltration 又稱分子篩層析 利用各蛋白質(zhì)分子大小不同分離 蛋白質(zhì)分離常用的層析方法 五 利用蛋白質(zhì)顆粒沉降行為不同可進(jìn)行超速離心分離 超速離心法 ultracentrifugation 既可以用來(lái)分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 蛋白質(zhì)在離心場(chǎng)中的行為用沉降系數(shù) sedime