組織細胞培養(yǎng)技術.doc

組織細胞培養(yǎng)技術課程教學大綱課程編碼：25590214課程名稱：組織細胞培養(yǎng)技術英文名稱：開課學期：授課對象：統(tǒng)招碩士開課院系：基礎醫(yī)學院開課教研室：學時：40（其中理論20，實驗學時20）學分：0。5課程類型：公共選修課選用教材：主要參考書： 一、 課程目的與任務組織細胞培養(yǎng)技術是研究組織和細胞的技術方法，被培養(yǎng)的組織和細胞也是實驗研究的對象，本課程是醫(yī)學臨床與基礎專業(yè)碩士研究生的公共選修課程之一，在醫(yī)學各專業(yè)高級人才培養(yǎng)中具有重要地位。本課程系統(tǒng)介紹了組織和細胞培養(yǎng)技術有關的概念，基本原理、操作程序和關鍵技術，及其在醫(yī)學研究和臨床實踐中的應用，該領域的研究歷史和最新發(fā)展動態(tài)，轉基因動物技術的概念、研究進展、技術方法、建立方法、應用及前景展望。旨在提升醫(yī)學專業(yè)碩士大研究生的知識結構，掌握現(xiàn)代生物技術的基本實驗技能，培養(yǎng)學生開拓創(chuàng)新的能力，適應未來學科發(fā)展對人才的需求。二、 教學基本要求本課程系統(tǒng)論述了組織細胞培養(yǎng)技術的理論和方法，簡要介紹了轉基因動物技術及應用，要求學生全面系統(tǒng)地掌握組織細胞培養(yǎng)的操作過程，了解各種操作的基本原理，在判定細胞生長好壞和是否發(fā)生污染的能力，熟悉體外培養(yǎng)細胞的生存條件，細胞的生物學性狀和與此有關的基本理論知識，了解國內外細胞培養(yǎng)的最新動態(tài)和研究進展，了解轉基因動物的概念、研究進展、技術方法、建立方法、應用，并能自行根據(jù)需要設計實驗，運用所學技術解決科研中的實際問題，提高學生綜合分析問題，系統(tǒng)利用專業(yè)知識的綜合素質。三、 各章節(jié)內容及學時分配第一章 組織培養(yǎng)技術的基本理論知識（4。5學時）目的與要求1、 掌握組織培養(yǎng)基本概念：了解對組織培養(yǎng)的評價；熟悉對組織培養(yǎng)工作者的要求和工作方法。2、 了解體內外細胞的差異與分化；掌握培養(yǎng)細胞形態(tài)分類及培養(yǎng)細胞的人體形態(tài)；熟悉組織培養(yǎng)細胞的生長和增殖過程3、 熟悉培養(yǎng)細胞生存環(huán)境和條件4、 掌握體外培養(yǎng)細胞成功的關鍵步驟；熟悉體外培養(yǎng)細胞成功所需要的條件5、 熟悉體處培養(yǎng)細胞的種類和命名；掌握建立細胞系或細胞胞株的要求；熟悉已建軍立細胞系或細胞株的鑒定，管理和使用的規(guī)則。教學內容第一節(jié) 組織培養(yǎng)基本概念（0。5學時）1、 組織培養(yǎng)基本概念；組織培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)2、 對組織培養(yǎng)的評價；組織培養(yǎng)的優(yōu)點與缺點3、 對組織培養(yǎng)工作者的要求和工作方法本節(jié)重點、難點：組織細胞培養(yǎng)所涉及的基本概念第二節(jié) 組織培養(yǎng)細胞生物學（2學時）1、 體內外細胞的差異與分化；體內外細胞的差異的表現(xiàn)，分化的概念、機制、細胞分化的關鍵2、 培養(yǎng)細胞形態(tài)分類；貼附型和懸浮型；貼附型；成纖維型；游走型、上皮型和多形型3、 培養(yǎng)細胞的人體形態(tài)；貼附型和懸浮型；體外培養(yǎng)細胞的形態(tài)及細胞機能狀態(tài)不良的形態(tài)4、 組織培養(yǎng)細胞的生長和增殖過程，傳代；組織培養(yǎng)細胞生命期；原代培養(yǎng)期、傳代期、衰退期本節(jié)重點、難點：體內外細胞的差異與分化；培養(yǎng)細胞的形態(tài)分類；傳代的概念，原代培養(yǎng)期、傳代期、衰退期的概念及特征第三節(jié) 培養(yǎng)細胞生存環(huán)境和條件（0。5學時）1、 無污染環(huán)境2、 溫度3、 氣體環(huán)境和氫離子濃度4、 體外培養(yǎng)細胞生存所需基本物質：糖、氨基酸、促生長因子、元素、促細胞貼附物質5、 滲透壓6、 培養(yǎng)基；合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基7、 附著底物，依賴性的概念，幾種常見的附著底物玻璃、一次性塑料、微載體、飼細胞8、 抑制細胞生長因素9、 細胞代謝與調控本節(jié)重點、難點：無污染環(huán)境；溫度；氣體環(huán)境和氫離子濃度；培養(yǎng)基；附著物第四節(jié) 體外培養(yǎng)細胞成功率的分析（1學時）1、 組織和細胞供體年齡2、 培養(yǎng)條件3、 貼附底物4、 培養(yǎng)方法本節(jié)重點、難點：體外培養(yǎng)細胞優(yōu)的關鍵步驟第五節(jié) 建立細胞系或細胞株（0。5學時）1、 體外培養(yǎng)細胞的種類和命名；初代培養(yǎng)、細胞系、克隆細胞株、腫瘤細胞系或株、有限細胞系、無限細胞系、亞系、二倍體細胞、遺傳缺陷細胞；幾個常見的腫瘤細胞系或株的名稱2、 建立細胞系或細胞株的要求：組織來源、細胞生物檢測、培養(yǎng)條件和方法3、 已建立細胞系或細胞株的鑒定，管理和使用本節(jié)重點、難點：初代培養(yǎng)、細胞系、克隆細胞株、腫瘤細胞系或株的概念；建立細胞系或細胞株的要求。第二章 組織培養(yǎng)設施和基本條件（2學時）目的與要求1、 掌握組織細胞培養(yǎng)實驗室的設計原則和組織培養(yǎng)工作包括的內容2、 熟悉無菌操作設施和工作間的布局與使用3、 熟悉實驗室設備及使用原理4、 熟悉器械及培養(yǎng)器皿教學內容第一節(jié) 實驗室設計設計原則和組織培養(yǎng)工作包括的內容第二節(jié) 無菌操作設施和工作間1、 凈化工作臺2、 無菌操作室3、 無菌操作箱4、 清洗和準備區(qū)5、 溫育和貯存區(qū)6、 觀察和研究區(qū)第三節(jié) 實驗室設備1、 電熱恒溫箱2、 電熱干燥箱3、 冰箱4、 顯微鏡5、 水純化裝置6、 洗刷裝置7、 抽濾裝置8、 細胞冷凍貯存器9、 離心機10、 天平11、 加樣器第四節(jié) 器械第五節(jié) 培養(yǎng)器械1、 玻璃瓶皿2、 塑料平皿本章重點、難點：無菌操作設施和工作間的布局與使用，培養(yǎng)室內的無菌操作程序第三章 培養(yǎng)用液（2學時）目的與要求1、 掌握組織培養(yǎng)用水的標準和各種平衡鹽溶液的配制及用途2、 了解天然培養(yǎng)基的成分及用途3、 熟悉合成培養(yǎng)基的種類、成分，掌握合成培養(yǎng)基的配制；熟悉無血清培養(yǎng)基的成分及適用范圍4、 熟悉培養(yǎng)基的選擇方法5、 掌握消化液、PH值調整液、抗生素液的作用教學內容第一節(jié) 水和平衡鹽溶液1、 水2、 平衡鹽溶液（BSS）第二節(jié) 天然培養(yǎng)基第三節(jié) 合成培養(yǎng)基1、 合成培養(yǎng)基的種類2、 合成培養(yǎng)基的成分3、 合成培養(yǎng)基的配制4、 無血清培養(yǎng)基第四節(jié) 培養(yǎng)基的選擇1、 經(jīng)驗法2、 實驗法第五節(jié) 其它常用液1、 消化液2、 PH值調整液3、 抗生素液本節(jié)重點、難點：合成培養(yǎng)基的配制；無血清培養(yǎng)基的適用范圍第四章 清洗與消毒（1。5學時）目的要求1、 掌握清洗的主要目的，玻璃器皿，膠塞、塑料器皿的清洗方法；掌握包裝的目的和方法2、 掌握物理消毒法、化學消毒法、抗生素消毒液（滅菌）的適用范圍教學內容第一節(jié) 清洗1、 玻璃器皿的清洗2、 膠塞的清洗3、 塑料器皿的清洗4、 包裝第二節(jié) 消毒1、 物理消毒法2、 化學消毒法3、 抗生素消毒液（滅菌）本章重點、難點：玻璃器皿、膠塞的清洗、塑料器皿的清洗方法；包裝的方法；物理消毒法，化學消毒，抗生素消毒液（滅菌）的適用范圍第五章 基本培養(yǎng)技術（3學時）目的要求1、 掌握培養(yǎng)室內的無菌操作、取材及組織的分離，細胞計數(shù)法，細胞凍存及復蘇，細胞運送2、 掌握初代培養(yǎng)法、傳代培養(yǎng)法3、 了解特殊培養(yǎng)法教學內容第一節(jié) 組織培養(yǎng)的基本操作和培養(yǎng)技術（1。5學時）1、 培養(yǎng)室內的無菌操作2、 取材及組織的分離3、 細胞計數(shù)法4、 細胞凍存與復蘇5、 細胞運送本節(jié)重點、難點：培養(yǎng)室內的無菌操作、取材及組織的分離，細胞凍存與復蘇，細胞運送第二節(jié) 常規(guī)組織培養(yǎng)法（1學時）1、 初代培養(yǎng)法2、 傳代培養(yǎng)法本節(jié)重點、難點：初代培養(yǎng)法第三節(jié) 特殊培養(yǎng)；單細胞分離（克?。?。5學時）本節(jié)重點、難點：單細胞分離（克?。┡囵B(yǎng)方法第六章 組織污染的檢測與排除（1。5學時）目的與要求1、 熟悉污染途徑2、 熟悉污染對細胞的影響3、 掌握微生物污染的排除方法教學內容第一節(jié) 污染途徑第二節(jié) 污染對細胞的影響一、污染對細胞的影響1、 支原體2、 病毒、細菌、真菌3、 化學物二、微生物污染的檢測1、真菌污染2、細菌污染3、支原體污染第三節(jié) 微生物污染的排除1、 抗生素除菌法2、 加溫除菌法3、 動物體內 種除菌法4、 巨噬細胞吞噬法本節(jié)重點、難點：微生物污染的檢測、微生物污染的排除第七章 腫瘤細胞培養(yǎng)（2。5學時）目的要求1、 熟悉組織培養(yǎng)腫瘤細胞生物學特性2、 熟悉腫瘤細胞的培養(yǎng)方法教學內容1、 培養(yǎng)腫瘤細胞生物學特性2、 培養(yǎng)方法；要點；成纖維細胞的排除法，提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率措施；體外培養(yǎng)增殖細胞生物學檢測本章重點、難點：腫瘤細胞培養(yǎng)的要點，成纖維細胞的排除法，提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率措施第八章 轉基因動物技術及其應用（3學時）目的要求了解轉基因動物技術的概念產(chǎn)、研究進展、技術方法、建立方法、應用及前景展望教學內容第一節(jié) 轉基因動物技術和轉基因動物的概念1、 轉基因動物技術；概念，特點，前景2、 轉基因動物、嵌合體動物；概念，特點第二節(jié) 轉基因動物研究進展1、 轉基因動物研究進展2、 我國的轉基因動物研究第三節(jié) 轉基因動物技術常用方法1、 顯微注射技術2、 逆子轉錄病毒載體技術3、 胚胎亞細胞（ES細胞）介導技術4、 精子載體技術5、 電轉移技術6、 基因直接導入技術第四節(jié) 轉基因動物的建立方法1、 顯微注射技術；主要儀器，附屬設備，優(yōu)點2、 顯微注射法建立轉基因鼠的一般程序第五節(jié) 轉基因動物技術在生物醫(yī)學研究中的應用1、 腫瘤學研究2、 免疫學研究3、 遺傳學研究4、 病毒疾病研究5、 改良和培育動物新品種6、 生物活性物質研制生產(chǎn)第六節(jié) 轉基因動物技術前景展望本節(jié)重點、難點： 轉基因動物技術、轉基因動物有嵌合體動物的概念；轉基因動物的建立方法；顯微注射法建立轉基因的一般程序四、 實驗1、 實驗目的與任務 掌握組織細胞培養(yǎng)技術中的基本實驗操作方法，加深對基本理論和基本方法的認識，培養(yǎng)學生科研實驗的能力，適應未來學科發(fā)展對人才的要求2、 實驗教學基本要求1） 掌握組織細胞實驗器皿的清洗，包裝與消毒2） 掌握各種培養(yǎng)用液的配置與過濾或消毒的方法3） 掌握培養(yǎng)室內的無菌操作、取材及組織的分離、細胞凍存、復蘇與細胞運送的方法及原理4） 掌握原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)的方法5） 掌握小鼠腹水瘤細胞小鼠腹腔傳代、抽腹水、細胞接種培養(yǎng)、小鼠胞妹剖取材的方法6） 熟悉微生物污染的檢測、微生物污染的排除7） 了解腫瘤細胞培養(yǎng)與單細胞分離培養(yǎng)的實驗要點3、 實驗教材或指導書 實驗項目一覽表序號實驗項目內容提要實驗類型學時分配主要儀器設備實驗地點備注1組織細胞培養(yǎng)的器皿準備及動物實驗1、清洗器皿2、腫瘤細胞小鼠腹腔傳代實驗驗證性實驗、設計性實驗4培養(yǎng)液、試管、移液管、注射器、小鼠、腫瘤細胞病理學教研室、細胞培養(yǎng)室2腫瘤細胞原肛培養(yǎng)及傳代1、包裝2、腫瘤細胞原代培養(yǎng)3、貼壁細胞解凍、培養(yǎng)驗證性實驗、設計性實驗4液氮罐、搪瓷盆、離心機、凈化工作臺、倒置顯微鏡、眼科剪、青霉素上瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)液病理學教研室、細胞培養(yǎng)室3腫瘤細胞計數(shù)、接種1、抽濾、高壓、高溫消毒2、克隆化方法示教驗證性實驗4濾器、高壓蒸氣消毒罐、高溫電熱箱、試管、移液管、光學顯微鏡病理學教研室、細胞培養(yǎng)室4腹水抽取、細胞解凍、凍存、運輸1、抽腹水、細胞計