生化測量系統(tǒng)的校準-南京.pptVIP

生化測量系統(tǒng)的校準 南通大學附屬醫(yī)院王惠民 一 與校準相關的一些基本問題 校準 Calibration 重要嗎 實驗室中測量不合格約15 由校準誤差所致臨床醫(yī)生往往認為檢驗結果的 不準 是由不正確的校準造成的陳文祥主任認為 檢驗結果互認的前提是 測量結果是否具有可比性 溯源 方法性能評價 校準 可比性的標準參考測量區(qū)間 一致化問題 校準受到重視了嗎 一般由組長進行校準一般無SOP 或SOP不夠詳細CLSI或去其他的國際組織尚未有相應的標準或指南一般的實驗室無校準的記錄科主任一般不過問校準的正確與否 校準什么 測量儀器 測量系統(tǒng) 調標 或 定標 測量儀器 單獨或與輔助設備組合 用于測量的裝置 測量系統(tǒng) 由一臺或多臺測量儀器所組成的用于特定測量的成套系統(tǒng) 包括試劑和電源等 校準實際上就是將測量系統(tǒng)與 參考系統(tǒng) 進行比較 并將測量系統(tǒng)調整至參考系統(tǒng)相一致水平的過程 實際上 有些情況下不需要對測量系統(tǒng)進行校準臨床化學測量常根據(jù)系數(shù)進行計算例 酶催化活性濃度的測量 F值又稱為K值 校準K值與理論K值的比較 DiaSysRandox 為什么用校準品后得到的K值與理論K值不一致 校準品是如何定值的 方法不一樣 參考方法 儀器不一樣 最好的儀器 每次定值前都必須對儀器進行校準 試劑不一樣 最好的試劑 參考方法與常規(guī)方法測量儀器的差異 二 校準前的準備 1 生化分析儀的準備生化分析儀的校準或檢定生化分析儀的性能驗證2 試劑的準備試劑是否獲準入試劑的性能驗證3 水的準備 1 生化分析儀的準備生化分析儀的校準或檢定由廠家根據(jù)其標準對生化分析儀進行校準由有關計量部門根據(jù)國家標準 JJG494 2005 對儀器進行檢定 生化分析儀的性能驗證 根據(jù)中華人民共和國生化分析儀檢定規(guī)程JJG494 2005進行 零點漂移波長準正確度及重復性雜散光吸光度正確度吸光度重復性吸光度線性誤差交叉污染率溫度正確度比色杯間差距 生化分析儀檢定用標準物質 用于吸光度正確度與重復性檢定的標準物質雜散光檢定的標準物質吸光度線性檢定的標準物質交叉污染檢定的標準物質中國計量科學研究院 北京市北三環(huán)東路18號 電話 010 64524710 64278838 零點漂移 開機30min 用蒸餾水調吸光度至0 000處 10min內吸光度的最大變化值應符合下表規(guī)定 復興儀器的零點飄移 復興儀器340nm零點漂移 復興儀器340nm零點漂移 復興儀器405nm零點漂移 復興儀器405nm零點漂移 復興儀器340 405nm零點漂移 復興儀器340 405nm零點漂移 復興儀器405 505nm零點漂移 出現(xiàn)零點飄移可能原因 電壓不穩(wěn)光電倍增管或光接收元件老化儀器靈敏度過高儀器設計與制造的缺陷 波長的正確度 波長正確度的測定方法根據(jù)分光原理不同而異分光式儀器 光柵由于不需傳動調節(jié)波長 一般不需校準 低壓汞燈 氘燈 干涉濾光片鐠釹濾光片 氧化鈥濾光片濾光式儀器將濾光片拆下在已校準的分光光度計上進行波長掃描 測定波長和半波寬一般儀器不容易拆卸 特征譜線 低壓汞燈 253 7nm氘燈 486nm 656 1nm鐠釹濾光片 529nm 808nm 400nm 900nm內至少有10個吸收峰 氧化鈥濾光片 200 700nm共12條譜線干涉濾光片 長波通濾光片 200 1100nm 光學分辨率為1nm短波通濾光片 400 700nm 光學分辨率為1nm 波長的重復性 指多次波長測試數(shù)據(jù)的離散性 或者多次波長測試數(shù)據(jù)的符合程度 一般取波長正確度的3次測試結果中最大值與最小值之差作為波長重復性 波長正確度及重復性的要求 nm 雜散光 雜散光與波長的半波寬有關 半波寬越大 雜散光越多 測定50g L亞硝酸鈉 NaNO2 標準溶液相對于蒸餾水在340nm處的吸光度 了解雜散光的多少 亞硝酸鈉溶液的配制方法將分析純亞硝酸鈉固體試劑放入稱量瓶置于烘箱中 在箱溫為105 5 下烘2h 取出置于干燥器中冷卻至室溫 在分析天平上 精度為0 1mg 精確稱取10g 置于200mL燒杯中 用小半杯蒸餾水溶解后移入200mL容量瓶中 以少量蒸餾水沖洗燒杯三次 均倒入容量瓶中 然后用蒸餾水稀釋至刻度線反復搖勻 置于陰涼干燥處備用 雜散光 1 在波長340nm 第一個試劑位放入蒸餾水 以蒸餾水為樣本 重復測定5次吸光度值 第二個試劑位放入NaNO2溶液 以NaNO2溶液為樣本 重復測定5次吸光度值 或將蒸餾水和NaNO2溶液分別加入同一比色杯讀取吸光度 可消除比色杯誤差 重復測定5次 共得5個蒸餾水和5個NaNO2溶液的吸光度 2 最小NaNO2溶液吸光度 最大蒸餾水吸光度 2 3 復興儀器的雜散光測定 復興儀器的雜散光測定 復興儀器的雜散光測定 空白 吸光度正確度 指吸光度實際測定值與理論值之差 該偏差越小吸光度正確度越高 間接說明波長的正確度與雜散光的多少 1 國家標準物質法2 己糖激酶法 吸光度正確度 1 國家標準物質法 使用國家標準物質研究中心制備的標準物質溶液 其吸光度分別為0 5和1 0 在340nm波長 比色杯光徑1cm時 以標準物質標示的參比液作參比 測吸光度值 重復測量3次 計算3次測量值的算術平均值與標準值之差 0 5的標準液允許誤差為 0 025 1 0的標準液 允許誤差為 0 07 測定結果 標準物質的吸光度 A1 1 0 489A1 2 0 980 不確定度 0 005 檢測結果 A1 1 0 4916 0 4836 0 4812 均值為0 4855A1 2 0 9703 0 9714 0 9722 均值為0 9713結果判定 A1 1誤差 0 025 A1 2誤差 0 07 即0 464 A1 1 0 514 0 910 A1 2 1 050 吸光度正確度 2 己糖激酶法用己糖激酶 HK 法測定葡萄糖濃度時 反應產生NADH 在340nm測定吸光度 間接測NADH的 理論值為6220 以此為標準校正 以HK測葡萄糖為例 試劑反應過程如下 HK葡萄糖 ATP 6 P 葡萄糖 ADP G6PDH6 P 葡萄糖 NAD 葡萄糖酸 NADH 影響吸光度準確度的主要因素 雜散光多波長不正確標準液不正確儀器的靈敏度或其他原因 吸光度重復性 1 以重鉻酸鉀標準溶液為樣本 在波長340nm 吸光度為0 3 0 5 以蒸餾水為空白 試劑量為全自動生化分析儀標稱的最小試劑量 測定時間為10min 每30秒讀取吸光度 連續(xù)20次 得到20個吸光度值 計算CV 應 1 0 2 采用吸光度約為0 5生化分析儀用吸光度標準物質 在340nm處連續(xù)測定5次 然后計算其中最大值與最小值之差 吸光度的重復性均應不大于0 005 檢測結果 A1 1 0 4828 0 4831 0 4836 0 4812 0 4820 4836 0 4812 0 0024 0 005 吸光度線性誤差 分別用濃度為2 0 4 0 6 0 8 0 10 0g L的氯化鈷標準溶液 以蒸餾水為對照 在510nm 500 520nm 測定各溶液吸光度 連續(xù)測量3次 然后將所得數(shù)據(jù)求相關系數(shù) r 0 995 或按下列公式計算 線性誤差符合規(guī)定要求 結論 符合吸光度線性要求 交叉污染率 概念 由測量系統(tǒng)將一個檢測樣品反應攜帶到另一個檢測樣品反應的分析物不連續(xù)量 由此錯誤地影響了另一個檢測樣品的表現(xiàn)量 1 氯化鈷方法2 桔紅G方法3 臨床標本的檢測 50U L與250U L的AST或ALT測定 測定方法 將氯化鈷標準溶液按儀器規(guī)定的最小樣品量 先用質量濃度為2 0g L的氯化鈷標準溶液將比色杯沖洗三次 接著對該溶液連續(xù)測量四次 按上述方法依次循環(huán)對2 0和10 0g L氯化鈷標準溶液重復測得七組在510nm處的測量值 四組低濃度值和三組高濃度值 然后按以下公式將每相鄰兩組值進行計算 得到三個低濃度到高濃度的計算值和三個高濃度到低濃度的計算值 即為交叉污染率 均應 1 5 L1 0 1634 L2 0 1691 L3 0 1639 L4 0 1668H1 0 8316 H2 0 8331 H3 0 8305CoLH 0 8317 0 8316 0 8317 0 1666 100 0 CoHL 0 1634 0 1666 0 8317 0 1666 100 0 4 結論 交叉污染率符合要求 溫度正確度 用分度值小于0 1 專用測溫裝置 測定比色杯的設定溫度 當儀器升到設定溫度范圍內 每隔30s記錄一次溫度 連續(xù)測10次 計算平均值 Fluke1521點溫度計 0 001 C 比色杯間差距 以重鉻酸鉀標準溶液為樣本 在波長340nm 吸光度為0 3 0 5 以蒸餾水為空白 每比色杯重復測定3次 平均吸光度值應小于0 05 Olympus 極差 0 4213 0 3958 0 0255 2 試劑的準備試劑是否獲準入是否有SFDA證書試劑的性能驗證精密度線性延遲時間 如果有 空白對照3 水的準備 用一級水 三 校準過程中需注意的問題校準品 是否可溯源 配套 互換性 處理 低溫冷凍 凍干品 復溶條件 瓶間差問題 測幾個水平校準品 不同水平校準品K值是否一致 校準品測量次數(shù) 對校準K值的影響 取平均K值 空白測量 對校準K值的影響 校準周期 對校準K值的影響 校準的核查 是否有核查程序 英國RANDOX公司 人基質復合校準血清 以人血清為基質根據(jù)德國臨床化學協(xié)會的規(guī)定賦值由全球3000多家參考實驗室賦值 每種儀器至少由10家實驗室賦值復溶條件 20 25 30分鐘對CO2 ACP與ALP有特殊要求未提供不確定度所有測量系統(tǒng)的值均一樣 德國DiaSys公司 人基質復合校準血清 TruLabN TruLabP和TruCalU以人血清為基質根據(jù)德國臨床化學協(xié)會的規(guī)定賦值復溶條件 25 30分鐘 ALP2小時 美國Roche公司C f a s Calibratorforautomatedsystems 適用于Roche系統(tǒng)的Roche方法在人基質血清中加入了人及各種動物來源的組份加入穩(wěn)定劑在Roche規(guī)定的嚴格的條件下 由Roche的主校準品賦值復溶條件 20 25 30分鐘 美國Beckman公司 SynchonMultiCalibrator 適用于Synchon試劑加入穩(wěn)定劑溯源至NIST液態(tài) 不需復溶 美國Bio Rad公司控制品以人血清基質可任選液體 干粉 定值 不定值產品液體不含甘油和乙二醇提供任何儀器 試劑的定值多個品種 包裝 濃度可供選擇美國FDA認證 某國產檢測系統(tǒng) X 分別與羅氏C fas校準品 Y1 與朗道Level2校準品 Y2 與朗道Level3校準品 Y3 比較 三 校準過程中需注意的問題校準品 是否可溯源 配套 互換性 處理 低溫冷凍 凍干品 復溶條件 瓶間差問題 加溶劑的準確性 測幾個水平校準品 不同水平校準品K值是否一致 校準品測量次數(shù) 對校準K值的影響 取平均K值 空白測量 對校準K值的影響 校準周期 對校準K值的影響 校準的核查 是否有核查程序 室溫復溶條件下校準CK 標準化復溶條件下校準CK 置于18 20 水溫下復溶30 5min 校準品處理的注意點 必須將復溶條件標準化 雖不會對所有被測物產生影響 但對CK 脂蛋白會產生較大影響 應有嚴格SOP 加樣的重復性 0 4 是否有瓶間差 值得研究 0 5 注意排除離群值 嚴格控制校準條件 將K值CV控制在1 內 制定校準的標準 標準化復溶條件下校準LDH 差 6 三 校準過程中需注意的問題校準品 是否可溯源 配套 互換性 處理 低溫冷凍 凍干品 復溶條件 瓶間差問題 測幾個水平校準品 不同水平校準品K值是否一致 校準品測量次數(shù) 對校準K值的影響 取平均K值 空白測量 對校準K值的影響 校準周期 對校準K值的影響 校準的核查 是否有核查程序 在ISO11095 1996 基于標準樣品的線性校準 GB T22554 2010 中確定 對于基本校準方法的最少校準點 水平是3個 EURACHEM 分析方法的目標適用性 指南規(guī)定 對于校準 包括空白至少6個濃度水平 CommissionDecision2002 657 EC規(guī)定 建立一個校準曲線 包括零濃度至少需要5個濃度水平 ISO11095 1996認為校準系統(tǒng)的有效性檢查 至少有2個 最好是3個校準水平通過控制圖監(jiān)控校準的有效性 三 校準過程中需注意的問題校準品 是否可溯源 配套 互換性 處理 低溫冷凍 凍干品 復溶條件 瓶間差問題 測幾個水平校準品 不同水平校準品K值是否一致 校準品測量次數(shù) 對校準K值的影響 取平均K值 空白測量 對校準K值的影響 校準周期 對校準K值的影響 校準的核查 是否有核查程序 標準化復溶條件下校準LDH 差 6 ISO11095 1996要求每個校準水平至少重復2次 并建議盡可能多次 和校準水平的數(shù)量一樣 隨著重復分析次數(shù)的增加 收益可能遞減 因此 每個校準水平重復分析超過5次不能提供大的額外好處 三 校準過程中需注意的問題校準品 是否可溯源 配套 互換性 處理 低溫冷凍 凍干品 復溶條件 瓶間差問題 測幾個水平校準品 不同水平校準品K值是否一致 校準品測量次數(shù) 對校準K值的影響 取平均K值 空白測量 對校準K值的影響 校準周期 對校準K值的影響 校準的核查 是否有核查程序 三 校準過