華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院《生物技術(shù)》復(fù)習(xí)題(附答案).doc

華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院生物技術(shù)復(fù)習(xí)題（附答案）一、有關(guān)名詞遺傳標(biāo)記 指可穩(wěn)定遺傳的、易于識(shí)別的特殊的遺傳多態(tài)性形式。遺傳多態(tài)性 現(xiàn)代遺傳學(xué)中是指基因組中任何座位上的相對(duì)差異或DNA序列的差異。 形態(tài)標(biāo)記 簡(jiǎn)單性狀的遺傳（普通遺傳學(xué)）細(xì)胞學(xué)標(biāo)記 染色體變異與細(xì)胞學(xué)特征（細(xì)胞遺傳學(xué)）生化標(biāo)記 同工酶與電泳技術(shù)（生化遺傳學(xué)）同工酶 是指具有功能相同而結(jié)構(gòu)及組成有差異的一類酶分子標(biāo)記 DNA標(biāo)記，以染色體DNA上特定的核苷酸序列作為標(biāo)記。PCR 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法，故又稱為基因的體外擴(kuò)增法。RFLP 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性。不同樣品DNA經(jīng)限制性酶酶解所產(chǎn)生片段大小的差異。RAPD 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA。是以一個(gè)寡聚脫氧核苷酸單鏈作隨機(jī)引物(primer) ，通過(guò)PCR擴(kuò)增基因組DNA，獲得長(zhǎng)度不同的多態(tài)性DNA片段，然后用凝膠電泳分離擴(kuò)增片段，經(jīng)染色來(lái)顯示擴(kuò)增片段的多態(tài)性。SSR 簡(jiǎn)單序列重復(fù)。是一類由幾個(gè)核苷酸組成的基序（motif）為重復(fù)單元串聯(lián)組成的DNA序列，廣泛分布于基因組的不同位置。AFLP 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性。 是一種通過(guò)限制性內(nèi)切酶酶切DNA產(chǎn)生不同長(zhǎng)度DNA片段，再結(jié)合PCR技術(shù)來(lái)檢測(cè)DNA多態(tài)性的分子標(biāo)記技術(shù)。FM遺傳圖譜 又稱遺傳連鎖圖譜。指反映基因組內(nèi)基因(遺傳標(biāo)記)在染色體上線性排列順序及其相對(duì)位置的圖譜。分子遺傳圖譜 不同分子標(biāo)記在染色體上的相對(duì)位置或排列情況。作圖群體 是指用于遺傳作圖的符合孟德?tīng)柖傻姆蛛x群體。RIL群體 即重組近交系群體，是由重組近交系組成的分離群體，由F2經(jīng)多代自交一粒傳使后代基因組相對(duì)純合的群體。 DH群體 是由通過(guò)對(duì)F1進(jìn)行花藥離體培養(yǎng)或通過(guò)特殊技術(shù)獲得單倍體植株再經(jīng)染色體加倍而獲得的加倍單倍體群體。 主效基因 又稱主基因，是一類控制質(zhì)量性狀的基因，其性狀表現(xiàn)為不連續(xù)的變異。微效基因 是一類控制數(shù)量性狀的基因，因此通常稱為數(shù)量性狀座位QTL，其性狀表現(xiàn)為連續(xù)的變異。 基因座位 基因在遺傳圖譜上的位置。等位基因 在相同的基因座上，兩種或多種變異基因之一。 基因定位 指通過(guò)遺傳作圖的方法，確定基因與遺傳標(biāo)記之間的關(guān)系及其在染色體上的位置。數(shù)量性狀 在分離群體中表現(xiàn)為連續(xù)性變異，表現(xiàn)型與基因型沒(méi)有明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系，不能夠明顯分組的性狀；通常受多基因控制，且易受環(huán)境影響。QTL 數(shù)量性狀基因座。指控制數(shù)量性狀的基因在基因組中的位置。QTL定位 利用分子標(biāo)記進(jìn)行連鎖分析，可以檢測(cè)出QTL。MAS 分子標(biāo)記輔助選擇。根據(jù)分子標(biāo)記與基因的連鎖關(guān)系，借助分子標(biāo)記對(duì)目標(biāo)性的基因型進(jìn)行選擇。前景選擇 是指對(duì)目標(biāo)基因的選擇背景選擇 指對(duì)除了目標(biāo)基因之外的其他部分（遺傳背景）的選擇。 基因聚合 將分散在不同品種中的多個(gè)有利基因聚合在一起的育種方法?；蜣D(zhuǎn)移 指將供體親本中的有用基因轉(zhuǎn)移或滲入到受體親本的遺傳背景中，從而達(dá)到改良受體親本個(gè)別性狀的目的?；蚬こ?實(shí)現(xiàn)基因克隆所采用的方法和相關(guān)工作，統(tǒng)稱為重組DNA技術(shù)或基因工程。基因重組 是指在體外用酶學(xué)方法將不同來(lái)源的DNA進(jìn)行切割、連接，組成一個(gè)新的DNA分子的過(guò)程，又稱DNA重組基因克隆 將重組DNA分子導(dǎo)入到合適的受體細(xì)胞中，使其擴(kuò)增和繁殖，以獲得大量的同一DNA分子，稱此為基因克隆、DNA克隆或分子克隆。1、 遺傳標(biāo)記的基本特征和類型。（1）親本間存在著多態(tài)性（即差異），可通過(guò)肉眼直接觀察到，借助顯微鏡或可通過(guò)電泳等手段觀察到，也就是說(shuō)具有可識(shí)別性。（2）親本間存在的多態(tài)性在后代中可以重演，即具有可遺傳性。 類型：形態(tài)標(biāo)記：簡(jiǎn)單性狀的遺傳（普通遺傳學(xué)） 細(xì)胞學(xué)標(biāo)記：染色體變異與細(xì)胞學(xué)特征（細(xì)胞遺傳學(xué)） 生化標(biāo)記：同工酶與電泳技術(shù)（生化遺傳學(xué)） 分子標(biāo)記：DNA序列變異與檢測(cè)技術(shù)（分子遺傳學(xué)）2、DNA分子標(biāo)記的主要類型及其應(yīng)用。A、基于分子雜交技術(shù)的分子標(biāo)記 RFLP VNTRB、基于PCR技術(shù)的分子標(biāo)記 （1）隨機(jī)引物：RAPD DAF （2）特異引物：SSR SCAR STS C、基于限制性酶切和PCR技術(shù)的分子標(biāo)記 AFLP CAPS D、基于DNA測(cè)序的分子標(biāo)記 SNP Indels EST FM應(yīng)用最普遍的是：RFLP、RAPD、AFLP和SSR標(biāo)記3、與其它遺傳標(biāo)記相比，分子標(biāo)記有什么優(yōu)勢(shì)？ 直接以DNA的形式表現(xiàn)，在生物體的各個(gè)組織、各個(gè)發(fā)育階段均可檢測(cè)到，不受季節(jié)、環(huán)境限制，不存在表達(dá)與否等問(wèn)題； 數(shù)量多，遍布整個(gè)基因組，可檢測(cè)座位幾乎無(wú)限； 多態(tài)性高，自然界存在許多等位變異，無(wú)須人為創(chuàng)造特殊的遺傳材料； 表現(xiàn)為“中性”，即不影響目標(biāo)性狀的表達(dá)，與不良性狀無(wú)必然的連鎖； 許多分子標(biāo)記表現(xiàn)為共顯性，能鑒別出純合基因型和雜合基因型。4、 PCR的概念、原理及其主要步驟。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) PCR：是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法，故又稱為基因的體外擴(kuò)增法。 PCR的基本原理:PCR是根據(jù)DNA復(fù)制的基本原理設(shè)計(jì)的體外酶促合成（擴(kuò)增）特定DNA片段的一種方法。模板DNA在高溫下解鏈成為單鏈模板，人工合成的寡核苷酸引物在低溫條件下與模板DNA鏈互補(bǔ)結(jié)合，DNA聚合酶(Taq酶)在適溫條件下將單核苷酸從引物3端開(kāi)始摻入，沿模板由53方向延伸，合成DNA新鏈。主要步驟：1、高溫變性（ 94C ）：置待擴(kuò)增雙鏈DNA模板于高溫下解鏈成為單鏈模板。2、低溫退火(3065C) ：人工合成的兩個(gè)寡聚核苷酸引物在低溫條件下分別與目的片段兩側(cè)的兩條鏈互補(bǔ)結(jié)合，形成局部雙鏈區(qū)。 3、適溫延伸(72C) ：DNA聚合酶（ Taq酶）將單核苷酸從引物3端開(kāi)始摻入，沿模板53方向延伸，合成DNA新鏈，形成兩條互補(bǔ)雙鏈，完成第一輪變性、退火和聚合反應(yīng)循環(huán)。4、反復(fù)進(jìn)行這種變性、退火和聚合反應(yīng)循環(huán)，可使兩端引物限定范圍內(nèi)的DNA序列以指數(shù)形式擴(kuò)增。5、 影響PCR反應(yīng)的因素有哪些？A、DNA模板質(zhì)量：DNA中含雜質(zhì)多或DNA降解；B、引物：引物設(shè)計(jì)不合理或合成質(zhì)量差、引物變質(zhì)降解；C、Mg2+濃度：過(guò)低或過(guò)高均會(huì)影響PCR擴(kuò)增D、 Taq DNA聚合酶：酶失活，或忘記加酶；E、 dNTP濃度F、循環(huán)參數(shù)：變性不完全、退火溫度過(guò)高影響模板與引物的結(jié)合。6、 RFLP、SSR、AFLP的基本原理。RFLP技術(shù)的基本原理利用特定的限制性內(nèi)切酶識(shí)別并切割（消化）不同生物個(gè)體的基因組DNA，得到許多大小不等的DNA片段（限制性片段）；通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳將這些片段按大小順序分離開(kāi)來(lái)，然后將它們按原來(lái)的順序和位置轉(zhuǎn)移至尼龍膜或硝酸纖維膜后，用放射性同位素（如P）或非放射性物質(zhì)（如生物素、地高辛等）標(biāo)記的DNA作探針，與膜上的DNA進(jìn)行雜交（即Southern印跡雜交）。若某一位置的DNA酶切片段與探針序列相似，則標(biāo)記好的探針就結(jié)合于這個(gè)位置上，經(jīng)放射性自顯影或酶學(xué)檢測(cè)，則可顯示出不同材料對(duì)該探針的限制性酶切片段多態(tài)性情況（形成不同帶譜），即反映個(gè)體特異性的RFLP圖譜。SSR標(biāo)記的基本原理：由于基因組中某一特定的微衛(wèi)星的側(cè)翼序列通常是保守性較強(qiáng)的單一序列，因此可將微衛(wèi)星的側(cè)翼序列的DNA片段克隆、測(cè)序，然后根據(jù)微衛(wèi)星兩端互補(bǔ)序列 人工設(shè)計(jì)合成引物，通過(guò)PCR反應(yīng)擴(kuò)增微衛(wèi)星片段，再將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了聚丙烯酰胺凝膠電泳。 由于不同等位基因間微衛(wèi)星序列的重復(fù)次數(shù)不同，導(dǎo)致擴(kuò)增片段長(zhǎng)度的不同而產(chǎn)生的多態(tài)性，稱為簡(jiǎn)單序列長(zhǎng)度多態(tài)性。AFLP 是RFLP 和PCR 結(jié)合的產(chǎn)物，其基本原理是： 將基因組DNA 進(jìn)行限制性內(nèi)切酶雙酶切后，形成分子量大小不等的隨機(jī)限制性片段；在所有的限制性片段兩端加上帶有特定序列的“接頭”，根據(jù)接頭序列設(shè)計(jì)引物（接頭互補(bǔ)序列+其3端加上幾個(gè)隨機(jī)選擇的核苷酸），通過(guò)接頭序列和PCR引物3末端的識(shí)別，選擇特定的片段進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，再在高分辨率的測(cè)序膠上將這些特異的限制性片段分離開(kāi)來(lái)，這種技術(shù)又稱為選擇性限制性片段擴(kuò)增。7、 什么是功能標(biāo)記，發(fā)展功能標(biāo)記需要什么條件？8、 分子遺傳圖譜構(gòu)建的主要環(huán)節(jié)有哪些？（1） 選擇適合作圖的分子標(biāo)記，根據(jù)遺傳材料之間的多態(tài)性確定親本組合（2）建立作圖群體，即具有大量分子標(biāo)記處于分離狀態(tài)的分離群體或衍生系（3）群體中不同植株或品系的標(biāo)記基因型分析（4）借助計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行標(biāo)記之間的連鎖分析（5）構(gòu)建飽和連鎖圖9、 分子遺傳圖譜構(gòu)建中，對(duì)作圖群體有那些基本要求？常用的作圖群體有那些？作圖群體的基本要求：群體要足夠 群體隨機(jī)分離 雙親間的多態(tài)性高常用的作圖群體：F2群體 BC1群體（回交一代群體）RIL群體：即重組近交系群體，是由重組近交系組成的分離群體，由F2經(jīng)多代自交一粒傳使后代基因組相對(duì)純合的群體。 DH群體：是由通過(guò)對(duì)F1進(jìn)行花藥離體培養(yǎng)或通過(guò)特殊技術(shù)獲得單倍體植株再經(jīng)染色體加倍而獲得的加倍單倍體群體。 10、 質(zhì)量性狀基因定位的原理及其主要程序。基因定位的基本原理是通過(guò)分析分子標(biāo)記與表現(xiàn)型之間的連鎖關(guān)系，確定基因在遺傳圖譜中的位置?；蚨ㄎ坏某绦颍鹤鲌D群體(F2)的構(gòu)建表型調(diào)查分子標(biāo)記基因型檢測(cè)連鎖分析11、 快速篩選與目的基因連鎖分子標(biāo)記的方法及其基本原理。 近等基因系分析法（NIL法）近等基因系除目的基因外，其遺傳背景與輪回親本相似，近等基因系的表現(xiàn)型不受復(fù)雜的遺傳背景的干擾，其表現(xiàn)比較真實(shí)，能較真實(shí)地反映基因效應(yīng)的大小比較輪回親本、NIL及供體親本三者的標(biāo)記基因型，當(dāng)NIL與供體親本具有相同的標(biāo)記基因型，但與輪回親本的標(biāo)記基因型不同時(shí)，則該標(biāo)記就可能與目標(biāo)基因連鎖。集團(tuán)混合分離分析法（BSA法）“混合池”由作圖群體中具有相同相對(duì)性狀個(gè)體的DNA組成。利用分子標(biāo)記對(duì)兩個(gè)混合池及兩個(gè)親本一起進(jìn)行標(biāo)記基因型分析。當(dāng)兩個(gè)親本的標(biāo)記帶型有差異，而兩個(gè)混合池的標(biāo)記帶型無(wú)差異時(shí)，表明該標(biāo)記與目的基因不連鎖；當(dāng)兩個(gè)親本的標(biāo)記帶型有差異，而兩個(gè)混合池的標(biāo)記帶型也呈相應(yīng)的差異時(shí)，表明該標(biāo)記與目的基因可能存在連鎖關(guān)系。 12、 什么是QTL？QTL定位的基本方法有哪些？數(shù)量性狀基因座。指控制數(shù)量性狀的基因在基因組中的位置。1) 按采用的標(biāo)記數(shù)目分類: 單標(biāo)記法 相鄰雙標(biāo)記法 多標(biāo)記法 2) 按使用的統(tǒng)計(jì)方法分類: 方差分析法 回歸分析法 最大似然分析法 3) 按作圖所用區(qū)間數(shù)分類:零區(qū)間作圖法 單區(qū)間作圖法 多區(qū)間作圖法 13、 作物育種的成效主要取決于哪些方面？（1）發(fā)現(xiàn)和創(chuàng)造育種上有利的遺傳變異；（2）采用合理先進(jìn)的育種手段方法，將優(yōu)良基因重組在一起；（3）應(yīng)用準(zhǔn)確有效的選擇鑒定技術(shù)，篩選出優(yōu)良的重組類型。14、 MAS的基本原理、主要條件及其基本方法。分子標(biāo)記輔助選擇的基本原理：分子標(biāo)記輔助選擇（MAS）主要是根據(jù)與目標(biāo)基因的緊密連鎖的分子標(biāo)記基因型的檢測(cè)來(lái)推測(cè)、獲知目標(biāo)基因的基因型。分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)的發(fā)展，是建立在分子標(biāo)記的發(fā)展、遺傳圖譜的構(gòu)建和基因定位的基礎(chǔ)上的。在分子標(biāo)記輔助選擇中，直接選擇的是分子標(biāo)記的基因型，而不是目的基因的基因型，因此利用分子標(biāo)記選擇目的基因的基因型，只是起輔助選擇的作用。分子標(biāo)記輔助選擇的效果取決于標(biāo)記與目標(biāo)基因連鎖的緊密程度。若標(biāo)記與基因共分離，則標(biāo)記的選擇直接就是基因的選擇。選擇正確率隨重組率的增加而迅速下降，重組值越小，其錯(cuò)選率越低。分子標(biāo)記輔助選擇應(yīng)具備的基本條件：與目標(biāo)基因緊密連鎖的分子標(biāo)記： 共分離或緊密連鎖（一般應(yīng)小于5cM）。簡(jiǎn)便快捷的標(biāo)記檢測(cè)方法，以便于大群體分析及操作： 檢測(cè)方法要簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、成本低廉； 檢測(cè)過(guò)程（包括DNA的提取、分子標(biāo)記的檢測(cè)、數(shù)據(jù)分析等）最好能自動(dòng)化； 檢測(cè)技術(shù)在不同實(shí)驗(yàn)室或研究者間應(yīng)有很高的可重復(fù)性，且經(jīng)濟(jì)實(shí)用； 有一套能準(zhǔn)確進(jìn)行多數(shù)據(jù)處理的計(jì)算機(jī)分析軟件； 最好是以PCR為基礎(chǔ)的標(biāo)記。標(biāo)記輔助選擇的基本方法：（1） 前景選擇 是指對(duì)目標(biāo)基因的選擇。包括單邊標(biāo)記、雙邊標(biāo)記。（2） 背景選擇 指對(duì)除了目標(biāo)基因之外的其他部分（遺傳背景）的選擇。15、 與表型選擇相比，MAS的優(yōu)越性體現(xiàn)在哪些方面？1） 基因型選擇，不受環(huán)境影響，可準(zhǔn)確測(cè)定單株基因型，克服性狀表現(xiàn)型鑒定的困難。 如，表現(xiàn)型鑒定麻煩或需要特別環(huán)境鑒定的性狀（如抗病性等）。2）允許早期（幼苗期階段）選擇，可在生長(zhǎng)發(fā)育任一時(shí)期選擇；3）能同時(shí)選擇控制同一性狀的不同基因和同一基因的不同等位基因；4）可同時(shí)對(duì)多個(gè)性狀/基因進(jìn)行選擇；5）可進(jìn)行性狀非破壞性評(píng)價(jià)和選擇： 如病蟲(chóng)害抗性評(píng)價(jià)以植株生長(zhǎng)不利，嚴(yán)重時(shí)收獲種子減少甚 至失收； 種子品質(zhì)性狀分析損傷種子生活力。6）可加快育種進(jìn)程，提高育種效率： 免除了測(cè)交或后代測(cè)驗(yàn)；早世代選擇，減少分離群體種植規(guī)模。7）除目標(biāo)基因外，還可對(duì)基因組的其他部分（即遺傳背景）進(jìn)行選擇，加快遺傳背景回復(fù)輪回親本的速度，實(shí)現(xiàn)全基因組選擇。16、 舉例說(shuō)明MAS在育種上的應(yīng)用。（1） 基因聚合 指將分散在不同品種中的多個(gè)有利基因聚合在一起的育種方法。 利用分子標(biāo)記，可先在不同的親本中進(jìn)行基因定位，然后通過(guò)雜交或回交將不同的基因轉(zhuǎn)移到一個(gè)品種中，通過(guò)檢測(cè)與不同基因連鎖標(biāo)記的基因型，來(lái)判斷一個(gè)體是否含有某一基因，以幫助選擇。單性狀多個(gè)基因的聚合：把控制同一性狀的多個(gè)基因聚合在一起，使某一性狀表現(xiàn)更加突出。例如，把多個(gè)水稻抗稻瘟病基因聚合在一起，培育出具有高抗、廣譜抗性和持續(xù)抗性的水稻新品種。 多個(gè)性狀基因的聚合：把控制不同性狀的多個(gè)基因聚合在一起，使新品種具有多個(gè)優(yōu)良性狀。例如，把水稻抗白葉枯病基因與抗稻癭蚊基因聚合在一起，培育出既抗白葉枯病、又抗稻癭蚊的水稻新品種。 （2）基因轉(zhuǎn)移 基因滲入。 指將供體親本中的有用基因轉(zhuǎn)移或滲入到受體親本的遺傳背景中，從而達(dá)到改良受體親本個(gè)別性狀的目的。 方法：多代回交結(jié)合前景選擇（正選擇）和背景選擇（負(fù)選擇）17、 與表型選擇相比，分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)具有許多獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但目前在育種中的應(yīng)用還很不夠，為什么？ 一些作物的基因作圖研究進(jìn)展緩慢，重要性狀的基于 PCR技術(shù)的分子標(biāo)記數(shù)量有限；育種家與分子遺傳學(xué)家溝通不夠，基因定位研究與標(biāo)記 輔助選擇應(yīng)用相脫離； 數(shù)量性狀的基因（QTL）定位技術(shù)難度還很大，有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)快速、準(zhǔn)確定位QTL和評(píng)價(jià)各QTL貢獻(xiàn)率以及QTL互作關(guān)系的方法； 標(biāo)記分析技術(shù)在實(shí)用性和成本方面還有待進(jìn)一步改進(jìn)； 多基因選擇技術(shù)體系有待完善。基因工程1 舉例說(shuō)明基因工程在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用利用基因工程生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉。蘇云金芽孢桿菌的代謝過(guò)程中能產(chǎn)生一種Bt殺蟲(chóng)蛋白，它對(duì)多種害蟲(chóng)具有毒殺作用。通過(guò)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)等方法將Bt基因轉(zhuǎn)入棉花植株的細(xì)胞中后，棉株體內(nèi)也能合成Bt殺蟲(chóng)蛋白。棉鈴蟲(chóng)等害蟲(chóng)取食后，Bt蛋白在昆蟲(chóng)的堿性腸道中轉(zhuǎn)變?yōu)槎舅?，從而使害蟲(chóng)的腸道細(xì)胞受到破壞，短時(shí)間內(nèi)使害蟲(chóng)死亡。 2 簡(jiǎn)述基因重組的操作程序分獲取目的基因和載體接目的基因與載體的連接轉(zhuǎn)重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞篩重組DNA的篩選與鑒定3 獲取目的基因的主要途經(jīng)有哪些？目的基因是指所要研究或應(yīng)用的基因，也是需要克隆或表達(dá)的基因。目的基因來(lái)源1）制備基因組DNA 2）制備cDNA3）聚合酶鏈反應(yīng) 4）人工合成基因4 篩選重組DNA分子的方法有哪些？（篩選含重組體的陽(yáng)性菌落，一般有下列幾種方法）1）平板篩選：插入失活（當(dāng)外源DNA序列插入質(zhì)粒中某一抗藥基因內(nèi)，使該基因失活，轉(zhuǎn)化細(xì)胞就不能生長(zhǎng)在含相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)平板上。）；藍(lán)白篩選（當(dāng)在質(zhì)粒中插入外源DNA產(chǎn)生白色菌落）2）限制酶切圖譜篩選3）PCR篩選重組體（抽提少量重組DNAPCR擴(kuò)增電泳鑒定序列分析）4）原位雜交技術(shù)5 植物基因轉(zhuǎn)移的方法有哪些？并舉例說(shuō)明植物基因轉(zhuǎn)移的原理。1.農(nóng)桿菌介導(dǎo)法2.以原生質(zhì)體或細(xì)胞（組織）作為受體的直接基因轉(zhuǎn)移如基因槍法（簡(jiǎn)稱PB）、聚乙二醇法（PEG）、電擊、脂質(zhì)體、磷酸鈣DNA共沉淀（CaP）、微注射、超聲波法。3.種質(zhì)系統(tǒng)介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化：如花粉管通道法、生殖細(xì)胞浸泡法和胚囊、子房注射法?；驑尫ɑ驹硎菍⑼庠碊NA包被在微小的金粒或鎢粒表面，然后在高壓的作用下微粒被高速射入受體細(xì)胞或組織。微粒上的外源DNA進(jìn)入細(xì)胞后，整合到植物染色體上，從而實(shí)現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)化?；ǚ酃芡ǖ婪ㄔ恚菏诜酆笫雇庠碊NA沿著花粉管滲入，經(jīng)過(guò)珠心通道進(jìn)入胚囊，轉(zhuǎn)化尚不具備正常細(xì)胞壁的卵、合子或早期胚胎細(xì)胞6 利用農(nóng)桿菌進(jìn)行植物基因轉(zhuǎn)移時(shí)，T-DNA是如何被導(dǎo)入到植物細(xì)胞體內(nèi)的？農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞、細(xì)菌與植物細(xì)胞共培養(yǎng)、在篩選培養(yǎng)基上篩選、獲得轉(zhuǎn)化細(xì)胞克隆、轉(zhuǎn)化細(xì)胞分化并再生植株。7 舉例說(shuō)明農(nóng)桿菌介導(dǎo)植物基因轉(zhuǎn)移的過(guò)程。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)煙草基因轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，農(nóng)桿菌附著到細(xì)胞后，只留在細(xì)胞間隙中。Ti質(zhì)粒分子受到煙草組織產(chǎn)生的乙酰丁香酮的激活作用之后，virD基因編碼的一種核酸內(nèi)切酶，先在T-DNA的RB序列中的第3和第4堿基之間切開(kāi)一個(gè)單鏈缺口，隨后在T-DNA同一條鏈的LB序列中切出第二個(gè)單鏈缺口。T-DNA便以單鏈形式釋放出來(lái)，并在RB序列的引導(dǎo)下定向地轉(zhuǎn)