病理技術專業(yè)知識1.doc

（一）單純固定液甲醛：1 濃度：40%，氣體2 滲透力強，固定均勻，組織收縮小，3 不能使白蛋白和核蛋白沉淀4 保存脂類，必須用冷凍切片。是糖的保護劑5 可固定高爾基體，線粒體重鉻酸鉀1. 濃度：1%-3%水溶液，有毒，橘紅色結晶2. 穿透速度快，幾乎不收縮，經乙醇脫水后明顯收縮，3. 未酸化的重鉻酸鉀不能使蛋白質沉淀，但可使蛋白質變?yōu)橹軇?。酸化后可使蛋白質沉淀，此時染色體可被保存，但線粒體破壞。4. 固定高爾基體和線粒體有良好效果。5. 酸性染料著色好，堿性染料著色差6. 固定的組織需經流水沖洗12-24h，或用亞硫酸鹽洗滌?？辔端?. 黃色結晶體，是一種強酸，易燃易爆，配成飽和溶液儲藏2. 穿透慢，組織收縮明顯，無明顯硬化。3. 能沉淀一切蛋白質4對脂肪和類脂無固定作用。5. 可軟化皮膚和火棉膠，不宜用火棉膠包埋6. 固定時間不宜超過24h，7. 固定的組織應盡快放入70%乙醇，滴加飽和碳酸鋰或濃氨水，有助于除去苦味酸固定產生的黃色。升汞1. 濃度為5%-7%的水溶液，針狀結晶2穿透力低，只宜固定薄片組織，單獨應用組織收縮明顯3, 對蛋白質有固定作用，4. 對類脂和糖類無固定作用5. 臨用時加冰醋酸醋酸1. 刺激性氣味的無色液體，低于15為冰醋酸5%的醋酸PH為2-8，可抑制細菌和酶的活性，可防止自溶。2. 穿透力強3 不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4 不能固定脂肪和內酯，不能保存糖5 .固定線粒體和高爾基復合體不能用高濃度的醋酸，可較好的保存染色體6, 缺點是組織膨脹明顯，尤其對于膠原纖維和纖維蛋白鉻酸1. 為三氧化鉻的水溶液，濃度0.5%-1%，強氧化劑，不能與乙醇，甲醛等混合 2 穿透力弱，一般組織需固定12-24h，固定的組織有收縮，3 能沉淀蛋白質，核蛋白固定良好。4 對脂肪無固定作用5 固定線粒體和高爾基復合體6. 宜避光保存，以防蛋白質溶解。7. 必須徹底流水沖洗（24h）。鋨酸（四氧化鋨）1.淡黃色結晶，劇毒，濃度1%-2%，強氧化劑，不能與乙醇，甲醛等混合2. 滲透力極弱，易使組織變硬，延長固定時間，組織的脆性增加，對染色不利。3. 固定均勻，不沉淀蛋白質。4為脂類固定劑5. 適用于線粒體和內質網的固定6. 為電鏡研究的必須固定劑。7. 固定目的不同，配方和濃度根據(jù)需要改變8. 固定后對堿性染料親和力強，細胞核的染色效果好9. 應在臨用前前幾天配制以保證充分溶解。丙酮1易揮發(fā)，易燃的無色液體，可與水，醇，氯仿，醚混合2. 滲透力強，對核的固定差3. 可使蛋白質沉淀4. 作用基本與乙醇相同，但對糖原無固定作用5廣泛用于酶組織化學中各種酶的固定乙醇1. 無色液體，還原劑，可與水無限相溶，有固定兼脫水作用 用于固定的濃度為80%-95%2滲透力弱，固定速度較慢，易使組織變脆，無水乙醇固定時，穿透速度快，滲透力差，使組織收縮3.，能沉淀白蛋白，球蛋白，核蛋白4. 用于糖原的固定5. 50%以上乙醇可溶解脂肪和類脂體，并可溶解血紅蛋白，對其他色素也有破壞。三氯醋酸 1. 為無色易潮解的結晶體，水溶液為強酸性，易溶于醇和醚，應密封保存 2. 也是一種良好的脫鈣劑 （二）混合固定液 B-5固定液（醋酸鈉-升汞-甲醛） 1多用于固定淋巴組織， 2. 染色前應進行脫汞處理 3. 配方：無水醋酸鈉1.25g，升汞6g，甲醛10ml，蒸餾水90ml.Bouin液1. 有一定毒性，應避免吸入或與皮膚接觸2. 固定液偏酸，對抗原有一定損害，使組織收縮，不適宜標本的長期保存3. 固定效果好，組織細胞結構完整。細胞核著色鮮明，細胞質著色較差。4. 對脂肪固定效果好，尤適用于含脂肪的淋巴結，乳腺組織和脂肪瘤標本5. 適用于結締組織染色，尤其是三色染色更為理想。6. 配方：飽和苦味酸水溶液：甲醛水溶液：冰醋酸=15：5:：1Carnoy液1有防止乙醇的硬化和收縮作用，增加滲透力，外膜致密的組織可用其固定2. 固定速度快，3mm厚組織塊1h內即可固定，大塊組織不超過4h。3，固定細胞質和細胞核，對于染色體固定佳，顯示DNA，RNA效果好。4. 常用于糖原和尼氏體的固定5不能保存脂類，不適用脂肪染色。6. 配方：冰醋酸10ml，氯仿30ml，無水乙醇60ml Muller液1. 作用緩慢，固定均勻，組織收縮小2. 多用于媒染和硬化神經組織3. 固定過程中，需常更換新鮮的液體4.配方：重鉻酸鉀2-2.5g，硫酸鈉1.0g，蒸餾水100mlOrth液1. 滲透力強，組織收縮小2. 應臨時配置，在暗處固定，固定24h左右，固定液變?yōu)楹谏珪r不可用，固定后流水沖洗12-24h。3. 固定胚胎組織，神經組織。脂肪組織4. 配方：重鉻酸鉀2.5g，硫酸鈉1.0g，蒸餾水100ml，37%-40%的甲醛10ml（用時加入）PFG液1. 適用于多種肽類抗原的固定，多用于免疫電鏡研究2. 對細胞抗原性和結構保存好3. 配方：對苯醌20g，多聚甲醛15g，25%戊二醛40ml，0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液1000ml。PLP和PLPD液1. 均含過碘酸鹽2. 對細胞抗原性和結構保存好，適用于富含糖類組織的固定Rossman液1. 對糖原固定好，固定12-24h，用95%的乙醇洗2. 配方：無水乙醇苦味酸飽和液90ml，甲醛10mlZenker液1用于固定多種組織，對于病毒包涵體固定效果也較好2. 使細胞核和細胞質染色清晰，常用于三色染色，對免疫球蛋白染色最好3. 不適用含血量較多的標本，如充血的脾臟和肺梗死等標本4.不能用金屬容器盛放，且固定后不能用金屬鑷夾取。4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸緩沖液1. 適用于光鏡免疫組織化學法，2. 動物先用此液灌注固定，取材后再用該液浸泡固定3. 可用于標本的較長時間的保存4%多聚甲醛-磷酸二鈉/氫氧化鈉1. 適用于光鏡和電鏡免疫組織化學法，2. 用于免疫電鏡時，應加入新鮮配置的戊二醛。使其終濃度為0.5-1%3. 性質溫和，可長期保存組織。 4配置后PH值應調至7.2-7.4, 4保存甲醛-鈣液. 適用于固定脂肪組織和組織化學染色乙醇-甲醛液 有脫水作用，對皮下組織中肥大細胞的固定好乙醚-乙醇液 滲透性強，固定效果好，用于細胞涂片的固定。去除甲醛色素：Verocay液脫汞鹽結晶： Lugol液脫黑色素： 0.25%高錳酸鉀藍化作用： 稀氨水組織的脫水（一）乙醇 乙醇脫水的濃度：70%80%90%95%100%進行糖原和尿酸鹽結晶染色的標本應直接用無水乙醇固定，更換一次無水乙醇脫水即可。（二）丙酮 與乙醇作用相似，但對組織塊的收縮作用比乙醇更嚴重，快速脫水或固定兼脫水時應用，脫水時間為1-3h.丙酮可作為染色后的脫水劑，用于DNA和RNA染色。（三）異丙醇 是乙醇的良好替代品，不含水，可代替無水乙醇使用，對火棉膠和染料不溶，因此不能用于火棉膠包埋和染料配制。（四）正丁醇和叔丁醇（電鏡標本制作時常用作中間脫水劑。） 正丁醇：無色液體，脫水能力較弱，可與水，乙醇和石蠟混合，因此，這種這種脫水的組織塊可直接浸蠟包埋，叔丁醇：無毒，可與水，乙醇和二甲苯混合，與正丁醇相比，它不易使組織收縮或變硬，而且脫水后可不經透明直接浸蠟，（五）還氧已環(huán)還氧已環(huán)能于水和乙醇混合，也能溶解石蠟，可代替乙醇進行脫水，也可代替二甲苯進行透明，不引起組織收縮和硬化，用于制備植物標本較好，易揮發(fā)，價格昂貴。（六）四氫呋喃 易于水，乙醇，丙醇和苯類混溶，對組織滲透快，易揮發(fā)，無毒，可用作封片溶劑，對染料不溶。（七）環(huán)己酮環(huán)己酮無毒，與苯，二甲苯，氯仿和石蠟混合，可代替無水乙醇脫水后直接浸蠟，組織塊不會變硬。（八）松脂醇 可取代無水乙醇用作脫水劑和隨后的浸透與包埋。樹脂包埋法適用于：不脫鈣骨髓活檢組織，肝、腎穿刺活檢和淋巴結組織等。常用的特殊染色技術一 結締組織染色 Mallory三色 Masson三色 膠原纖維，網狀纖維 藍色 綠色 軟骨，粘液，淀粉樣 淡藍色 神經膠質纖維，肌纖維 紅色 紅色髓鞘，紅細胞 橘紅色 橘紅色 顯示膠原纖維，網狀纖維，彈性纖維三聯(lián)染色膠原纖維：紅，網狀纖維：黑，彈性纖維：綠色肌肉和紅細胞：淡黃色二 膠原纖維染色（一） 顯示膠原纖維，細胞，肌肉的染色法1 試劑：Ponceau（麗春紅）染色液：麗春紅水溶液10-15ml，苦味酸飽和水溶液85-90mlVictoria blue(維多利亞藍)：維多利亞藍，70%乙醇2 結果：膠原纖維： 紅， 細胞核和血細胞： 綠色肌肉： 黃色3注意事項：Ponceau染色后。不能與水接觸，直接用無水乙醇沖洗脫水：膠原纖維切片的厚度需6um,: Victoria blue染色液應盛染色缸內，進行染色。（二）天狼星紅苦味酸染色法1.試劑：天狼星紅飽和苦味酸液： 0.5%天狼星紅10ml，苦味酸飽和水溶液,90ml 天青石藍液：天青石蘭，鐵明礬，蒸餾水，甘油，濃鹽酸 2 結果：膠原纖維： 紅， 細胞核和血細胞： 綠色其他： 黃色3注意事項：細胞核復染可以用Harris蘇木精淡染：必須用偏光顯微鏡觀察 三 網狀纖維染色（一）Gomori銀染色法1.結果：網狀纖維： 黑色膠原纖維： 紅，背景： 黃色3注意事項： 氨性銀溶液：必須器皿洗干凈，滴加氨水不能過量，冰箱保存 氧化液存放時間不能過長，以免失去氧化作用 麗春紅復染用滴染方便，無水乙醇沖洗要傾斜（二）James染色法1.結果：網狀纖維： 黑色膠原纖維： 紅，背景： 淡黃色3注意事項： 5%硝酸銀使用時不能滴染 二氨銀配制時，氨水要一滴一滴的加，以免濃氨水加的太多 甲醛液要新配制四：彈性纖維染色（一）維多利亞藍染色結果：彈力纖維： 藍色 細胞核： 紅色注意事項：配制的溶液放置2周成熟后使用（二）Gomori醛復紅染色法1試劑：醛復紅染液：堿性復紅0.5g，濃鹽酸1ml，70%乙醇100ml，三聚乙醛1ml 室溫下靜置1-2日，待變?yōu)樽仙闯墒欤诒浔４鎮(zhèn)溆谩?橘黃G染液：2：對特殊的蛋白質及含硫酸根的粘多糖有很強的親和力，和彈力纖維結合很緊。 對肥大細胞顆粒，脂褐素，HBsAg,胃主細胞，胰島的細胞，腦垂體的嗜堿性細胞也能很好著色。3 固定液：以甲醛生理鹽水固定的染色效果最佳。結果：彈力纖維 深紫色 粘液 紫色五 顯示彈性，膠原纖維的雙重組合染色結果：彈力纖維： 藍綠色 膠原纖維： 紅色 背景： 淡黃色注意事項：維多利亞藍液可每次反復使用，溶液在室溫中保存可用數(shù)年。 六 肌肉組織染色 （一）橫紋肌組織染色Mallory磷鎢酸蘇木精染色法（PTAH）1. 結果：橫紋肌 藍色 膠原纖維，網狀纖維： 黃色或玫瑰紅色 心?。ㄈ毖毖酰?紫藍色或棕黃色2注意事項： 此液經陽光處理數(shù)周后至數(shù)月才成熟，置冰箱內保存可使用多年時間?？杉尤?.15高錳酸鉀，加快促使成熟95%乙醇分化時應注意在切片上保留一定的紅色，然后用無水乙醇快速脫水，冷風稍干燥后封固。早期心肌病變組織染色 （一）NagarOlsen結果：缺氧心肌，紅細胞 紅色 正常心肌 黃色或黃棕色 細胞核 藍色 （二）Poley 顯示缺氧心肌染色法結果：缺氧心肌 紅色 胞核 紫色 其他： 綠色七：糖類染色糖原染色：過碘酸-Schiff(PAS)染色法1 結果：糖原及其他PAS反應陽性物質 紅色 細胞核 藍色2.注意事項：過碘酸是一種氧化劑 染色前將Schiff試劑取出后，適應室溫后再進行染色八粘液物質（粘多糖）染色中性粘多糖多見于：胃粘膜的表面上皮，十二指腸腺，頜下腺，前列腺上皮，結腸的杯狀細胞。強硫酸化粘多糖多見于：皮膚，動脈和肺、軟骨、角膜及肥大細胞弱硫酸化粘多糖多見于：頜下腺、結腸、氣管、支氣管的杯狀細胞粘液物染色用于：腫瘤方面的胃癌，粘液瘤和粘液肉瘤，軟骨粘液樣纖維瘤、橫紋肌肉瘤、動脈粥樣硬化和膠原病及慢性胃炎的腸化（一）Mowry阿爾辛藍過碘酸雪夫（ABPAS）染色法 1結果： 中性粘液物質 紅色酸性粘液物質 藍色混合性粘液物質 紫紅色 2 注意事項： 切片中不能涂白膠或火棉膠 Schiff試劑保存于冰箱中備用，滴染法，用過的不能回收使用。 阿爾辛藍染色30分鐘，或更長（二）Schiff阿爾辛藍地衣紅染色法 1結果： 胃粘膜腸化生上皮和胃腸腫瘤的酸性粘多糖： 藍色 中性粘多糖： 棕色 2.注意事項： 高錳酸鉀氧化液必須新配制使用 地衣紅染色液冰箱保存，可反復使用 地衣紅染色時間4h,阿爾辛藍染色5分鐘，時間不能長。九 黑色素染色黑色素見于：惡性黑色素瘤，淋巴結腫瘤，色素性神經瘤，皮膚性淋巴結炎，皮膚異色病，紅斑狼瘡，扁平苔蘚，神經性黑色素病變，假性黑變病色素的大腸，闌尾，小腸（一）MassonFontana黑色素浸銀染色法 結果：黑色素及嗜銀細胞顆粒 黑色 膠原纖維 紅色 背景 淺黃色（二）Lillie亞鐵染色法結果：黑色素 暗綠色 背景 淺綠 肌纖維和背景 黃色注意事項： 硫酸亞鐵和鐵氰化鉀染色液需臨用時配制，不能存放， 也可使含鐵血黃素呈陽性，可用結合鐵反應法來鑒別十 含鐵血黃素染色 Perls blue(普魯士南)反應顯示三價鐵 結果：含鐵血黃素 藍色 其他組織 淺紅色 注意事項： 器皿應潔凈，操作中避免與鐵接觸，洗滌需用蒸餾水 陳舊標本染色效果不好，必要時可用0.25%高錳酸鉀處理切片20-60分鐘，再用草酸漂白。 組織固定不能使用酸性固定液。十一 膽色素染色： 三氯醋酸染色方法 結果：膽色素 綠色其他 復染的紅色或黃色 注意事項：不適用的固定液：Helly，Zenker等含鉻固定液纖維蛋白染色（一）MSB染色法（馬休黃猩紅藍法） 結果：纖維蛋白 紅色 陳舊性纖維蛋白 紫色 細胞核 藍色 紅細胞 黃色 注意事項：可以使用Masson三色法進行對照染色 亮結晶猩紅6R染料可用酸性復紅代替。（二）Gram甲紫染色法 結果：纖維蛋白 藍黑色，背景 紅色淀粉樣物質染色（一）剛果紅染色法結果： 淀粉樣物質： 紅色 細胞核 藍色注意事項： 蘇木精染色的細胞核不能深 淀粉樣物質可以結合偏光的方法得到良好的效果 ，其色彩呈綠色雙折光性。 無水乙醇有脫色作用，脫水后即用冷風干燥，再透明封固 （二）Jurgens甲紫染色法： 結果：淀粉樣物質 紅色或紫紅色 細胞核 藍色 真菌染色（一）Grocott六胺銀染色結果：菌絲和孢子 黑褐色， 細胞核 紅色 背景 淡綠色（二）高碘酸復紅染色法 結果：真菌 紫紅色，紅細胞 淺黃色細菌染色一 Gram堿性復紅結晶紫染色法： 結果：G+ 藍色 G，細胞核 紅色，注意事項： 苯胺油苯酚復紅液是一種不穩(wěn)定的混合液，染色液表面易產生氧化結晶，染色應適當加熱防止氧化物質污染切片。 二甲苯苯胺油分化后，必須用二甲苯洗除 結晶紫溶于乙醇，草酸銨溶于蒸餾水二 ZiehlNeelsen抗酸桿菌染色法 結果： 抗酸桿菌 紅色 背景 灰藍色注意事項： 苯酚復紅液，必須加溫37-40,時，秩序染色15-20分鐘 亞甲藍復染后用95%乙醇快速分化，防止過度脫色三 Warthinstarry胃幽門螺桿菌染色法 結果：胃幽門螺桿菌呈棕黑色或黑色，背景淡黃色 注意事項：1%硝酸銀液內1h左右（溫箱56）四 螺旋體染色 Giemsa染色法結果 螺旋體及細菌呈藍到淡紫色，細胞質呈藍色，紅細胞呈橘黃色注意事項：放入Giemsa染色工作液中需要8-18h或更長五HBsAg 染色 （一） Shikata地衣紅染色法 結果：HBsAg陽性呈棕色注意事項 高錳酸鉀須新配制 地衣紅染色液PH應為1.2-1.6（二）醛復紅改良染色法 結果：HBsAg陽性呈紫色，結締組織呈紅色，紅細胞及基質呈黃色（三）維多利亞藍染色法 結果：HBsAg陽性呈藍綠色，細胞核紅色注意事項： 維多利亞藍染液中需放置12-24h.神經組織染色神經細胞尼氏小體染色法（一）焦油紫染色法 結果：尼氏小體 紫色 膠質細胞 淡紫色 背景 無色(二) Einarson棓酸青藍染色法 結果：尼氏小體 黑藍，紫色 核 藍色 背景 淺灰色（三）甲苯胺藍染色法：結果：尼氏小體 深藍色 核 淡藍色 背景 無色神經纖維染色方法（一）Hol,mes神經纖維染色方法結果：神經纖維 黑色 背景 灰紫色（二）Bielschowsky神經纖維染色 結果：神經纖維 黑色 背景 紫色（三）Von Braunmubl神經纖維，扣結，老年斑染色方法結果：神經纖維和扣結 黑色 老年斑 黑色 背景 淺灰色（四）Eager退變神經纖維的染色方法 結果：退變神經纖維 黑色 背景 淺棕色神經髓鞘染色方法（一）Weigert髓鞘染色方法 結果：髓鞘 黑紫色， 背景：淡灰色（二）Weil髓鞘染色方法 結果：髓鞘 藍黑色， 背景：淡灰色（三）Kultshitzky髓鞘染色方法 結果： 結果：髓鞘 藍黑色， 背景：淡黃色（四）Luol fast blue 髓鞘染色方法結果：髓鞘 藍色 核仁 紫色 尼氏小體 紫色 （五）變色酸2R-亮綠髓鞘染色方法結果：神經髓鞘呈深紅色；軸索和間質呈綠色，脫髓鞘纖維不著色。注：變色酸2R染液濃度在0.30.6為好，可根據(jù)質量不同而增減。染色液置4冰箱內保存，可反復使用，用前回溫。（六）Marchi退變髓鞘染色方法結果：退變髓鞘 黑色 背景 淺棕色（七）鋨酸萘胺 結果：變性髓鞘及脂肪： 黑色 正常髓鞘 紅色 紅細胞 淡紅色 結締組織 藍色神經膠質細胞染色方法 （一）Cajal 星形細胞染色方法（冷凍切片） 結果：原漿形及纖維性星形細胞 紫黑色（二）Naounenko 和 Feigin 改良的Cajal 染色方法（石蠟切片）結果：星形細胞 紫黑色 背景 粉紅色（三）Weil及Davenport 小膠質細胞及少膠質細胞染色方法 結果：神經膠質細胞及少突膠質細胞 黑色 背景 黃棕色（四）Naou menko 及Feigin 小膠質細胞石蠟切片染色方法 結果：小膠質細胞： 黑色 背景 灰色 神經內分泌細胞染色親銀反應（一）lillieMasson 二胺銀染色方法 結果：親銀細胞顆粒 黑色 細胞核 紅色 背景 淡灰黃色（二）GomoriBurtner 六胺銀法 結果：親銀細胞 黑色 背景細胞 淺紅色嗜銀反應：（一）De Grandi 改良硝酸銀反應法 結果：嗜銀細胞顆粒 棕黑色 胞核 紅色（二）堿性重氮反應： 結果：嗜銀細胞顆粒 橘紅色至紅色 細胞核 藍色 胞質 黃色 嗜鉻細胞染色（一）Giemsa 改良染色方法 結果： 嗜鉻細胞 紅色至紫紅色 皮質細胞 藍色 紅細胞 粉紅色（二）Wiesel染色方法 結果：嗜鉻細胞 黃綠色 細胞核 紅色 其他 藍色肥大細胞染色一 甲苯胺藍改良染色方法結果： 肥大細胞： 紅紫色 細胞核 藍色二 醛復紅法 結果： 肥大細胞顆粒 深紫色 紅細胞 橘黃色 其他 黃色 DNA染色（Feulgen法） 結果：DNA 紫紅色 細胞質及其他成分 綠色染色方法膠原纖維，網狀纖維軟骨，粘液，淀粉樣神經膠質纖維，肌纖維髓鞘，紅細胞結締組織染色Mallory三色藍淡藍紅黃Masson三色 綠紅黃顯示膠原纖維，網狀纖維，彈性纖維三聯(lián)染色膠原纖維網狀纖維彈性纖維肌肉和紅細胞紅黑綠黃膠原纖維染色膠原纖維細胞核和血細胞肌肉顯示膠原纖維，細胞，肌肉的染色法紅 綠黃天狼星紅苦味酸染色法紅綠 黃網狀纖維染色網狀纖維膠原纖維背景Gomori銀染色法黑 紅 黃James染色法黑紅淡黃彈性纖維染色彈力纖維細胞核粘液背景維多利亞藍染色藍紅Gomori醛復紅染色深紫紫顯示彈性，膠原纖維的雙重組合染色藍綠色膠原纖維紅色淡黃色橫紋肌組織染色橫紋肌膠原纖維，網狀纖維心?。ㄈ毖毖酰㎝allory磷鎢酸蘇木精染色法（PTAH）藍黃色或玫瑰紅色紫藍色或棕黃色早期心肌病變組織染色缺氧心肌，紅細胞正常心肌細胞核其他NagarOlsen紅黃或黃棕色藍Poley缺氧心肌染色法紅紫綠糖類染色糖原及其他PAS反應陽性物質細胞核過碘酸-Schiff(PAS)紅藍粘液物質（粘多糖）染色中性粘液物酸性粘液物混合性粘液物Mowry阿爾辛藍過碘酸雪夫（ABPAS）紅藍紫紅Schiff阿爾辛藍地衣紅棕藍黑色素染色黑色素及嗜銀細胞顆粒膠原纖維背景肌纖維MassonFontana浸銀染色黑紅淺黃Lillie亞鐵染色暗綠色淺綠黃 含鐵血黃素染色含鐵血黃素其他Perls blue(普魯士南)藍淺紅膽色素膽色素其他不適用的固定液：Helly，Zenker等含鉻固定液三氯醋酸染色方法綠紅 或 黃纖維蛋白染色纖維蛋白陳舊性纖維蛋白細胞核紅細胞背景MSB染色法（馬休黃猩紅藍法）紅紫藍黃Gram甲紫染色法藍黑紅淀粉樣物質染色淀粉樣物質細胞核剛果紅染色法紅藍Jurgens甲紫染色法紅或紫紅色藍真菌染色菌絲和孢子背景細胞核紅細胞Grocott六胺銀染色黑褐淡綠紅高碘酸復紅染色法紫紅淺黃色細菌染色幽門菌抗酸桿菌G+G 背景Gram堿性復紅結晶紫染色法藍紅ZiehlNeelsen抗酸桿菌染色法紅灰藍色Warthinstarry胃幽門螺桿菌染色法棕黑或黑淡黃色染色方法 項 目螺旋體染色螺旋體細菌細胞質紅細胞Giemsa染色法藍到淡紫色藍橘黃色HBsAg 染色HBsAg顆粒細胞核紅細胞結締組織Shikata地衣紅染色棕色醛復紅改良染色法 紫色黃紅維多利亞藍染色法藍綠色紅神經細胞尼氏小體染色法尼氏小體核背景膠質細胞焦油紫染色法 紫無色淡紫Einarson棓酸青藍黑藍紫色藍淺灰色甲苯胺藍染色法深藍色淡藍無色神經纖維染色方法神經纖維背景老年斑扣結Holmes神經纖維黑 灰紫Bielschowsky神經 黑紫Von Braunmubl神經纖維，扣結，老年黑淺灰色黑Eager退變神經纖維黑色淺棕色神經髓鞘染色方法髓鞘背景核仁尼氏小體Weigert髓鞘染色方黑紫淡灰Weil髓鞘染色方法藍黑淡灰Kultshitzky髓鞘染藍黑淡黃Luol fast blue藍紫紫髓鞘脫髓鞘纖背景軸索間質變色酸2R-亮綠髓鞘深紅不著色綠色Marchi退變髓鞘染色方法黑色（退變）淺棕色鋨酸萘胺黑色（變性）紅色（正常）紅細胞（淡紅）結締組織（藍色）神經膠質細胞染色方法原漿形及纖維性星形細胞神經膠質細胞少突膠質背景小膠質細胞Cajal 星形細胞（冷凍）紫黑色改良的Cajal 染色紫黑色粉紅Weil及Davenport 小膠質細胞及少膠質細胞黑色黃棕Naou menko 及Feigin 小膠質細胞灰黑色神經內分泌細胞染色親（嗜）細胞顆粒細胞核背景胞質親銀反應lillieMasson 二胺銀黑紅淡灰黃GomoriBurtner 六胺銀法黑淺紅嗜銀反應De Grandi 改良硝酸銀反應棕黑色紅堿性重氮反應橘紅色至紅色藍色黃色嗜鉻細胞染色嗜鉻細胞皮質細胞紅細胞細胞核Giemsa 改良紅色至紫紅色藍粉紅Wiesel染色方法黃綠色藍（其他）紅色肥大細胞染色肥大細胞細胞核紅細胞其他甲苯胺藍改良紅紫色藍色醛復紅法深紫色橘黃黃DNA染色DNA 細胞質Feulgen法紫紅色綠色免疫細胞化學技術標記物應具有以下的特點： 能與抗體形成比較牢固的共價鍵結合 不影響抗體與抗原的結合 放大的效益高 發(fā)光火顯色反應要在抗原與抗體結合的原位并且鮮明，有良好的對比。理想的標記酶： 酶的活性高并且穩(wěn)定 終產物穩(wěn)定，不擴散，有良好的定位 酶與抗體和結合不影響AgAb的特異性反應 在組織與體液中不存在內源性的酶底物效果好又應用最多的是辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶異硫氰酸熒光素： 為明亮的黃綠色熒光四甲基異硫氰酸羅丹明： 為橙紅色熒光免疫組織化學主要染色方法的原理（一）直接法（又稱一步法） 特異性高，敏感性低 原理：用已知的特異性抗體與熒光素或酶結合，直接與待測組織中的抗原反應。 特點：將熒光素或酶標記在第一抗體上（二）間接法（又稱夾心法） 原理：第一步：以未標記的特異性抗體（第一抗體）與組織或細胞中的抗原反應， 洗去未與抗原結合的第一抗體后，第二步：再以熒光素或酶標記的第二抗體與第一抗體結合，如何進行顯色或熒光檢查。特點：將熒光素或酶標記在第二抗體上優(yōu)點： 不用標記第一抗體 第一抗體的工作稀釋度高 敏感性增強 應用范圍更廣 特異性低于直接法（三）未標記抗體法 1 酶橋法 酶橋法使用的三種抗體中的第1，第3兩種抗體為同種動物所產生。 在染色的關鍵是第2抗體（橋抗體）必須以較高的濃度過量使用優(yōu)點：提高了反應的敏感性，缺點：背景染色較重。 2 PAP法 將游離酶和抗酶抗體在使用前先制成穩(wěn)定的酶抗酶抗體復合物，在稀釋后使用。PAP法的關鍵在于 PAP復合物中的抗酶抗體必須與第一抗體為同種動物所產生。 第2抗體（橋抗體）必須過量（四）親和素生物素方法 1 親和素生物素過氧化物酶復合物技術（ABC） 通過ABC復合物中親和素橋梁的作用，將ABC復合物與生物素化的抗體結合在一起，達到檢測抗原的目的。 與PAP法比較，ABC法最大的優(yōu)點是敏感性高，是PAP法的20-40倍其次是背景清晰。SP法與ABC法比較，特異性更高2 酶標親和素生物素技術（BA LAB） 制備生物素化抗體和酶標親和素，利用生物素親和素的親和作用，將酶標親和素連接到抗原抗體復合物上，以顯示被檢測的抗原。3 橋聯(lián)親和素生物素技術（BAB， BRAB） 是用生物素分別標記抗體和酶，然后以親和素為橋，將兩者連接在一起對照 常用的對照方法包括： 陽性對照，陰性對照，阻斷實驗，空白對照，替代對照，自身對照，吸收實驗陽性細胞的染色特征： 陽性細胞染色分布有3種類型：胞質，細胞核，細胞膜表面 陽性細胞可分為灶性和彌漫性 染色強度不一 可定位于單個細胞，且與陰性細胞相互交雜分布。 切片邊緣，刀痕或皺褶區(qū)域，壞死或擠壓的細胞區(qū)，膠原結締組織等表現(xiàn)為相同的染色強度，不能判斷為陽性免疫熒光細胞化學染色方法熒光抗體法：用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法熒光抗原法：用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法對照：抗原對照，抗血清對照，滅活補體對照。染色結果判讀對照試驗： 吸收實驗：應用尚無文獻報道的抗血清/自己制備的抗血清進行IHC染色時，需用相應的飽和抗原吸收血清后，在孵育標本。判斷結果的可信性（結果應為陰性） 交叉實驗 替代實驗 置換實驗 陽性對照動物實驗技術 實驗動物的抓取一 小鼠 用左手拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，其余三指和手掌心夾住背部皮膚和尾部小鼠的灌胃針長4-5cm,直徑1mm.插入深度為3-4cm,常用灌胃量0.2-0.8ml皮內注射量：最多不得超過0.05ml.皮下注射部位：背部肌內注射：股部腹腔注射：0.1-0.2ml/10g 靜脈注射：多用尾靜脈，用溫水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管擴張，4號細針一次注射量為0.05-0.1ml/10g，盡可能從尾端開始向尾根部移動注射，腦內注射：0.02-0.03ml 注射針垂直刺入2-3mm,二 大鼠 大鼠捉持方法與小鼠相似。大鼠容易被激怒咬人，捉持時左手應戴防護手套。另一種方法：張開左手虎口，迅速將拇指，食指插入大鼠腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中端，并使其保持仰臥位，之后調整左手拇指位置，緊抵在下頜骨上。大鼠的灌胃針長6-8cm,直徑1.2mm. 插入深度為4-6cm,常用灌胃量1-4ml皮內注射量：最多不得超過0.1ml.皮下注射部位：背部，左側下腹部肌內注射：股部腹腔注射：1-2ml/100g 靜脈注射：多用尾靜脈，用溫水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管擴張，4號細針一次注射量為0.05-0.1ml/10g，盡可能從尾端開始向尾根部移動注射，腦內注射：0.03-0.05ml 注射針垂直刺入2-3mm,三 家兔一只手抓住兔頸背部皮膚，將兔輕輕提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿勢。切不可用手握持雙耳提起兔子家兔的固定： 盒式固定：常用于經口給藥，兔耳血管注射、采血或觀察兔耳血管變化等。 臺式固定：常用于頸部，胸部手術，兔靜脈采血或測量血壓，呼吸等實驗 架式固定：常用作熱原值實驗 一次灌胃能耐受的最大容積 兔為80-150ml 貓為50-150ml皮內注射量：最多不得超過0.1ml.皮下注射部位：背部或耳根部肌內注射：兩側臀部或股部肌肉腹腔注射：5ml,部位：下腹部近腹白線左右兩側約1cm處。靜脈注射：耳緣靜脈注射腦內注射：0.05-0.1ml 注射針垂直刺入3mm,兔，貓致死法：空氣栓塞法：靜脈內注入20-40ml空氣即可致死。四 犬 要用特制的鉗式長柄犬夾夾住頸部，使犬頭向上，頸部拉直，再套上犬鏈。急性實驗用犬，可用犬夾夾住犬頸部后，將它壓倒在地，由助手將其四肢固定好。實驗需要麻醉時，把麻醉完善后的犬固定在手術臺或實驗臺上，應及時解去嘴上的帶子，以利動物呼吸，避免由于鼻腔被粘液阻塞而造成窒息。一次灌胃量不能超過200ml皮下注射部位：大腿外側肌內注射：兩側臀部或股部肌肉腹腔注射：5-10ml，部位：臍后腹白線側1-2cm靜脈注射：前肢，皮下，頭靜脈或后肢小隱靜脈注射大鼠和小鼠的采血方法1 尾尖采血 2 眼眶后靜脈叢采血 3 摘眼球采血4 斷頭采血 5 頸靜脈和頸動脈采血 6 股靜脈和股動脈采血7 心臟采血: 用左手觸摸左側第3-5肋間處，選擇心臟沖動最明顯處穿刺，一般選擇胸骨左緣外1cm第4肋間 用6號半針頭的注射器，垂直刺入心臟，可隨針接觸心臟的感覺隨時調整刺入方向和深度 豚鼠采血方法1 心臟采血 2 耳緣采血 3 足靜脈采血 兔的采血方法1 耳（中央）動脈采血 2耳緣靜脈采血 3 外頸靜脈采血 4 頸動脈采血 5 股靜脈采血 6 心臟采血（不超過20-25ml） 犬的采血方法1 前后肢皮下靜脈采血 2 股動脈采血 3 心臟采血4 頸靜脈采血 5 耳緣靜脈采血 羊的采血方法1 頸靜脈采血 2前后肢皮下靜脈采血一般一次可取50-100ml 試驗動物用藥量的確定 1 藥物劑量按mg/kg或g/kg計算 2 用藥量未知時可先用致死量的1/101/5進行嘗試。 3 動物的耐受性比人大。假設人的用藥量為1，小鼠，大鼠尾2550，