水五日生化需氧量(BOD5)的測定.doc

實驗五 水五日生化需氧量（BOD5）的測定1 目的1.1 理解BOD的含義及測定條件；1.2 了解水樣預(yù)處理的道理與預(yù)處理方法。2 方法原理 生物化學(xué)需氧量(BOD)定義為：在規(guī)定的條件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物質(zhì)，特別是有機(jī)物所進(jìn)行的生物化學(xué)過程所消耗的溶解氧量。該過程進(jìn)行的時間很長，如在20培養(yǎng)條件下，全過程需100天，根據(jù)目前國際統(tǒng)一規(guī)定，在201的溫度下，培養(yǎng)五天后測出的結(jié)果，稱為五日生化需氧量，記為BOD5，其單位用質(zhì)量濃度mg/L表示。對于一般生活污水和工業(yè)廢水，雖然含較多有機(jī)物，如果樣品含有足夠的微生物和具有足夠氧氣，就可以將樣品直接進(jìn)行測定，但為了保證微生物生長的需要，需加入一定量的無機(jī)營養(yǎng)鹽(磷酸鹽、鈣、鎂和鐵鹽)。 某些不含或少含微生物的工業(yè)廢水、酸堿度高的廢水、高溫或氯化殺菌處理的廢水等，測定前應(yīng)接入可以分解水中有機(jī)物的微生物，這種方法稱為接種。對于一些廢水中存在著難被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有機(jī)物或含有劇毒物質(zhì)時，可以將水樣適當(dāng)稀釋，并用馴化后含有適應(yīng)性微生物的接種水進(jìn)行接種。 一般檢測水質(zhì)的BOD5只包括含碳有機(jī)物質(zhì)氧化的耗氧量和少量無機(jī)還原性物質(zhì)的耗氧量。由于許多二級生化處理的出水和受污染時間較長的水體中，往往含有大量硝化微生物。這些微生物達(dá)到一定數(shù)量就可以產(chǎn)生硝化作用的生化過程。為了抑制硝化作用的耗氧量，應(yīng)加入適量的硝化抑制劑。3 適用范圍BOD5為21000mg/L水樣，超過1000mg/L的水樣，應(yīng)適當(dāng)稀釋。4 主要儀器及設(shè)備 使用的玻璃儀器皿在實驗前應(yīng)認(rèn)真清洗，防止油污、沾塵。玻璃器皿干燥后方能使用。 常用實驗室設(shè)備如下：4.1 生化培養(yǎng)箱 溫度控制在20l，可連續(xù)無故障運(yùn)行。4.2 充氧設(shè)備 充氧動力常采用無油空氣壓縮機(jī)(或隔膜泵、或氧氣瓶、或真空泵)。充氧流程可分為正壓、負(fù)壓充氧兩種流程。4.3 BOD培養(yǎng)瓶：容積5501mL。 4.4 樣品運(yùn)輸貯藏箱：溫度保持04。4.5 250mL溶解氧瓶或具塞試劑瓶26個。4.6 50mL滴定管2支。4.7 1mL移液管3支，25mL、100mL移液管各1支。4.8 10mL、100mL量筒各1個。4.9 250mL碘量瓶2個。5 試劑采用分析純試劑。實驗用水采用重蒸蒸餾水。5.1硫酸錳溶液將MnSO44H2O 480g或MnSO42H2O 400g溶于蒸餾水中，過濾后稀釋成100mL。 (此溶液中不能含有高價錳，試驗方法是取少量此溶液加入碘化鉀及稀硫酸后溶液不能變成黃色，如變成黃色表示有少量碘析出，即表示溶液中含有高價錳)。 MnO+2I-+6H+=I2+Mn2+3H2O5.2堿性碘化鉀溶液 溶解500g氫氧化鈉于300400mL蒸餾水中，冷至室溫。另外溶解300g碘化鉀于200mL蒸餾水中，慢慢加入已冷卻的氫氧化鈉溶液，搖勻后用蒸餾水稀釋至1000mL(強(qiáng)堿性溶液腐蝕性很大，使用時注意勿濺在皮膚或衣服上)，如有沉淀，則放置過夜取上清液，貯藏于塑料瓶或棕色試劑瓶中（用棕色試劑瓶時要用橡膠瓶塞）。5.3 濃硫酸比重1.84，強(qiáng)酸腐蝕性很大，使用注意勿濺在皮膚或衣服上。5.4 1淀粉指示液稱取2g可溶性淀粉，溶于少量蒸餾水中，用玻璃棒調(diào)成糊狀：慢慢加入(邊加邊攪拌)剛煮沸的200mL蒸餾水中，冷卻后加入0.25g水楊酸或0.8g氯化鋅ZnCl2防腐劑。此溶液遇碘應(yīng)變?yōu)樗{(lán)色，如變成紫色表示已有部分變質(zhì)，要重新配制。5.5 (1+1)硫酸溶液將濃硫酸(比重184)與水等體積混合。5.6 2 mol/L(12 H2SO4)5.7鹽溶液下述溶液至少可穩(wěn)定一個月，應(yīng)貯存在玻璃瓶內(nèi)，置于暗處。一旦發(fā)現(xiàn)有生物滋長跡象，則應(yīng)棄去不用。5.7.1 磷酸鹽：緩沖溶液。將8.5g磷酸二氫鉀(KH2PO4)、21.75g磷酸氫二鉀（K2HPO4）、33.4g七水磷酸氫二鈉(NaH2PO47H2O)、和1.7g氯化銨（NH4Cl）溶于500mL水中，西是指1000mL。此緩沖溶液的pH應(yīng)為7.2。5.7.2 七水硫酸鎂：22.5g/L溶液將22.5g七水硫酸鎂（MgSO47H2O）溶于水中，稀釋至1000mL并混合均勻。5.7.3 氯化鈣：27.5g/L溶液將27.5g無水氯化鈣（CaCl2）（若用水合氯化鈣，要取相當(dāng)?shù)牧浚┤苡谒?，稀釋?000mL并混合均勻。5.7.4：0.25g /L溶液將0.25g六水氯化鐵（）（FeCl3H2O）溶解于水中，稀釋至1000mL并混合均勻。5.8 硫代硫酸鈉溶液C(Na2S2O3)=0.025molL 稱取6.2g硫代硫酸鈉(Na2S2O35H2O)溶于煮沸放冷的蒸餾水中，加入0.2g碳酸鈉，用水稀釋至1000mL。貯于棕色瓶中，使用前用重鉻酸鉀，C(16K2Cr2O7)=0.0250molL標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定，標(biāo)定方法如下。于250mL碘重瓶中，加入l00mL蒸餾水和1g碘化鉀，加入10.00mL 0.0250 mo1L重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，5mL 2 mol/L(12 H2SO4)硫酸溶液(5.6)，密塞，搖勻，于暗處靜置5 min后，用待標(biāo)定的硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液呈淡黃色，加入1 mL淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛好褪盡為止，記錄用量。 標(biāo)定反應(yīng)：K2Cr2O7+6KI+7H2SO4=Cr2(SO4)3+312+4K2SO4+7H2O (硫酸鉻，綠色) I2+2Na2S2O3=2NaI+Na2S4O6 (連四硫酸鈉，無色) C=10.000.0250V 式中 C硫酸鈉溶液濃度(mol/L) V硫代硫酸鈉溶液消耗量(mL)5.9 氫氧化鈉，0.5mol/L 5.10 鹽酸，0.5molL5.11 稀釋水在5-20L玻璃內(nèi)瓶裝入一定量的純水曝氣2-8h，使稀釋水的溶解氧接近飽和；曝氣后瓶口蓋上兩層干凈紗布，置于20培養(yǎng)箱中放置數(shù)小時，使水中溶解氧含量不少于8mg/L。臨用前每升水中加入四種營養(yǎng)鹽溶液(5.7.1)、(5.7.2)、(5.7.3)、(5.7.4)各lmL并混合均勻。稀釋水的pH值為7.2，應(yīng)在8h內(nèi)使用完。5.12 接種水如被檢驗樣品本身不含有足夠的適應(yīng)性微生物，應(yīng)采取下述方法獲得接種水。接種溫度應(yīng)在20l。5.12.1 城市污水，一般采用住宅區(qū)生活污水，過濾后在20培養(yǎng)箱內(nèi)放置一晝夜，取上清液作為接種水。5.12.2 待測樣品經(jīng)生化處理構(gòu)筑物的出水處的出水。5.12.3 當(dāng)工業(yè)廢水中含有難降解有機(jī)物時，取該工業(yè)廢水排放口下游3-8Km 處的水作為做接種水；如無此種水源采用馴化菌種的方法在實驗室培養(yǎng)含有適應(yīng)于待測樣品的接種水，建議采用如下方法：取中和或適當(dāng)稀釋后的該水樣進(jìn)行連續(xù)曝氣，每天加少量新鮮水樣。同時加入適量表層土壤、花園土壤或生活污水，使能適應(yīng)水樣的微生物大量繁殖。當(dāng)水中出現(xiàn)大量絮狀物，或分析其化學(xué)需氧量的降低值出現(xiàn)突變時，表明適應(yīng)的微生物已經(jīng)繁殖，可用做接種水。一般馴化過程需要3-8d。5.13 接種的稀釋水根據(jù)需要和接種水的來源，向每升稀釋水（5.11）中加入1.05.0mL接種水（5.12）中的一種。以接種的稀釋水的5天（20）耗氧量應(yīng)在0.31.0mg/L之間。6 步驟6.1 實驗前準(zhǔn)備工作6.1.1實驗前8h將生化培養(yǎng)箱接通電源，并使溫度控制在20下正常運(yùn)行。6.1.2將實驗用的稀釋水、接種水和接種的稀釋水放入培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫備選用。6.2水樣預(yù)處理6.2.1水樣的pH值不在6.57.5之間時；先做單獨(dú)試驗，確定需要的鹽酸（5.10）或氫氧化鈉溶液（5.9）體積，再中和樣品，不管有無沉淀形成。當(dāng)水樣的酸度或堿度很高，可改用高濃的堿或酸進(jìn)行中和，確保用量不少過水樣體積的0.5%。6.2.2含有少量游離氯的水樣，一般放置1-2h后，游離氯即可消失。對于游離氯在短時間內(nèi)不能消失的水樣，可加入適量的亞硫酸鈉溶液，以除去游離氯。6.2.3從水溫較低的水體中或富營養(yǎng)化的湖泊中采集的水樣，應(yīng)迅速升溫至20左右，以趕出水樣中過飽和的溶解氧。否則會造成分析結(jié)果偏低。從水溫較高的水體中或廢水排放口取樣，應(yīng)迅速使其冷卻至20左右，否則會造成分析結(jié)果偏高。6.2.4若待測水樣沒有微生物或微生物活性不足時，都要對樣品進(jìn)行接種。諸如以下幾種工業(yè)廢水：a、未經(jīng)生化處理過的工業(yè)廢水；b、高溫高壓或經(jīng)衛(wèi)生殺菌的廢水，特別要注意食品加工工業(yè)的廢水和醫(yī)院生活污水；c、強(qiáng)酸強(qiáng)堿性的工業(yè)廢水；d、高BOD5值的工業(yè)廢水；e、含銅、鋅、鉛、砷、鎘、鉻、氰等有毒物質(zhì)的工業(yè)廢水。以上的工業(yè)廢水都需采用具有足夠微生物。7 測試7.1 不經(jīng)稀釋水樣的測定溶解氧含量較高、有機(jī)物含量較少的地表水，可不經(jīng)稀釋而直接以虹吸法將約20的混勻水樣轉(zhuǎn)移入兩個溶解氧瓶內(nèi)，轉(zhuǎn)移過程應(yīng)注意不使產(chǎn)生氣泡。以同樣的操作使兩個溶解氧瓶充滿水樣后溢出少許，加塞。瓶內(nèi)不應(yīng)留有氣泡。其中一瓶隨即測定溶解氧，另一瓶的瓶口進(jìn)行水封后，放入培養(yǎng)箱中，在20培養(yǎng)5天。在培養(yǎng)過程中注意添加封口水。從開始放入培養(yǎng)箱算起，經(jīng)過5晝夜后，棄去封口水，測定剩余的溶解氧。7.2 需經(jīng)稀釋水樣的測定7.2.1 稀釋倍數(shù)的確定根據(jù)實踐經(jīng)驗，提出下述計算方法，供稀釋時參考。7.2.1.1地表水由測得的高錳酸鹽指數(shù)與一定的系數(shù)的乘積，即求的稀釋倍數(shù)。高錳酸鹽指數(shù)與系數(shù)的關(guān)系見表2-3。表2-3 由高錳酸鹽指數(shù)與系數(shù)的關(guān)系高錳酸鹽指數(shù)（mg/L）系數(shù)高錳酸鹽指數(shù)（mg/L）系數(shù)55100.2、0.31020200.4、0.60.5、0.7、1.07.2.1.2工業(yè)廢水由重鉻酸鉀法測得的COD值來確定，同程需作單個稀釋比。使用稀釋水時，由COD值分別乘以系數(shù)0.075、0.15、0.225，即獲得三個稀釋倍數(shù)。使用接種稀釋水時，則分別乘以系數(shù)0.075、0.15、0.25即獲得三個稀釋倍數(shù)。7.2.2 稀釋操作7.2.2.1 一般稀釋法：按照選定的稀釋比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀釋水（或接種稀釋水）于1000mL量筒中，加入需要量的均勻水樣，再加入稀釋水（或接種稀釋水）至800mL，用帶膠板的玻棒小心上下攪勻。攪拌時勿使攪棒的膠板露出水面，防止產(chǎn)生氣泡。按照（7.1）相同的步驟操作，測定培養(yǎng)5天前后的溶解氧。另取兩個溶解氧瓶，用虹吸法裝滿稀釋水（或接種稀釋水）作為空白試驗，測定培養(yǎng)5天前后的溶解氧。7.2.2.2 直接稀釋法直接稀釋法是在溶解氧瓶內(nèi)直接稀釋。在已知兩個容積相同（其差1mL）的溶解氧瓶內(nèi)，用虹吸法加入部分稀釋水（或接種稀釋水），再加入根據(jù)瓶容積和稀釋比例計算出來的水樣量，然后用稀釋水（或接種稀釋水）使剛好充滿，加塞，勿留氣泡于瓶內(nèi)。7.3溶解氧的測定： 溶解氧的測定方法用碘量法（通常用疊氮化鈉改良法），詳見本書第二章實驗六 水溶解氧（DO）的測定8 計算8.1不經(jīng)稀釋直接培養(yǎng)的水樣 BODs = DO1DO2 BODs水樣的BOD5值，mgLDO1：水樣在培養(yǎng)前的溶解氧濃度，mgLDO2：水樣在培養(yǎng)五天后的溶解氧濃度，mgL8.2 經(jīng)稀釋后培養(yǎng)的水樣C1水樣在培養(yǎng)前的溶解氧濃度，mgLC2水樣在培養(yǎng)五天后的溶解氧濃度，mgLB1稀釋水（或接種稀釋水）在培養(yǎng)前的溶解氧濃度，mgLB2稀釋水（或接種稀釋水）在培養(yǎng)五天后的溶解氧濃度，mgLf1稀釋水（或接種稀釋水）在培養(yǎng)液中所占比例f2水樣在培養(yǎng)液中所占比例1注：f1、 f2的計算：例如培養(yǎng)液的稀釋比為3%，即3份水，97份稀釋水，則f1=0.97，f2=0.03。19 注意事項9.1 根據(jù)廢水濃度高低及毒性大小確定使用稀釋水、接種水還是稀釋接種水，若稀釋比大于100，將分兩步或幾步進(jìn)行稀釋。9.2 培養(yǎng)時要注意避光，防止藻類生長影響測定結(jié)果。9.3 其他注意事項參見本書第二章實驗六 水溶解氧（DO）的測定中（7.27.6）。鏈接 水溶解氧（DO）的測定碘量法1 目的1.1 掌握碘量法測定水中溶解氧的原理和方法；1.2 掌握水樣存在不同干擾物時的處理方法或選用合適的測定方法。2 原理測定水中溶解氧常用碘量法及其修正法和膜電極法。清潔水可直接采用碘量法測定。其原理是：水樣中加入硫酸錳和堿性碘化鉀，水中溶解氧將低價錳氧化成高價錳，生成四價錳的氫氧化物棕色沉淀。加酸后，氫氧化物沉淀溶解并與碘離子反應(yīng)，釋出游離碘。以淀粉作為指示劑，用硫代硫酸鈉滴定釋出的碘，卻可計算出溶解氧的含量。反應(yīng)式如下：MnSO4+2NaOH=Mn(OH)2+Na2SO4（白色）2Mn(OH)2+O2=2MnO(OH)2( 棕色，即H2MnO3亞錳酸)MnO(OH)2+2KI+2H2SO4=I2+MnSO4+K2SO4+3H2OI2+2Na2S2O3=2NaI+Na2S4O6（連四硫酸鈉）3 儀器3.1 250ml溶解氧瓶或具塞試劑瓶2個。3.2 50ml滴定管2支。3.3 1ml移液管3支，25ml、100ml移液管各1支。3.4 10ml、100ml量筒各1個。3.5 250ml碘量瓶2個。4 試劑4.1 硫酸錳溶液將MnSO44H2O 480g或MnSO42H2O 400g溶于蒸餾水中，過濾后稀釋成1000ml。 (此溶液中不能含有高價錳，試驗方法是取少量此溶液加入碘化鉀及稀硫酸后溶液不能變成黃色，如變成黃色表示有少量碘析出，即表示溶液中含有高價錳)。 Mn0+2I-+6H+=I2+Mn2+3H204.2堿性碘化鉀溶液溶解350g氫氧化鈉于300400ml蒸餾水中，冷至室溫。另外溶解300g碘化鉀于200ml蒸餾水中，慢慢加入已冷卻的氫氧化鈉溶液，搖勻后用蒸餾水稀釋至1000ml（為強(qiáng)堿性溶液，腐蝕性很大，使用時注意勿濺在皮膚或衣服上)，如有沉淀，則放過夜后，傾出上清液貯藏于塑料瓶或棕色瓶中。4.3 濃硫酸比重1.84，強(qiáng)酸腐蝕性很大，使用注意勿濺在皮膚或衣服上。4.4 1淀粉指示液稱取2g可溶性淀粉，溶于少量蒸餾水中，用玻璃棒調(diào)成糊狀：慢慢加入(邊加邊攪拌)剛煮沸的200mL蒸餾水中，冷卻后加入0.25g水楊酸或0.8g氯化鋅ZnCl2防腐劑。此溶液遇碘應(yīng)變?yōu)樗{(lán)色，如變成紫色表示已有部分變質(zhì)，要重新配制。4.5 (1+1)硫酸溶液將濃硫酸(比重184)與水等體積混合。4.6 硫代硫酸鈉溶液C(Na2S203)=0.025mol/L 稱取6.2g硫代硫酸鈉(Na2S2035H20)溶于煮沸放冷的蒸餾水中，加入0.2g碳酸鈉，用水稀釋至1000mL。貯于棕色瓶中，使用前用重鉻酸鉀，C(1/6K2Cr207)=0.0250mol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定，標(biāo)定方法如下。于250ml碘重瓶中，加入l00ml蒸餾水和1g碘化鉀，加入10.00ml 0.0250 mo1/L重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，5mL 2 mol/L(1/2 H2S04)，硫酸溶液，密塞，搖勻，于暗處靜置5 min后，用待標(biāo)定的硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液呈淡黃色，加入1 ml淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛好褪盡為止，記錄用量。標(biāo)定反應(yīng)：K2Cr207+6KI+7H2S04=Cr2(S04)3+3I2+4K2S04+7H20 (硫酸鉻，綠色) I2+2Na2S203=2NaI+Na2S406 (連四硫酸鈉，無色) C=10.000.0250V式中：C硫代硫酸鈉溶液濃度(mol/L)V硫代硫酸鈉溶液消耗量(ml)5 實驗步驟5.1 采樣將取樣管插入取樣瓶（溶解氧瓶）底讓水樣慢慢溢出，裝滿后再溢出半瓶左右后，取出取樣管，趕走瓶壁上可能存在的氣泡，蓋上瓶蓋(蓋下不能留有氣泡)。5.2 溶解氧的固定用移液管插入溶解氧瓶的液面下，加入lml硫酸錳溶液（4.1），2ml堿性碘化鉀溶液（4.2），蓋好瓶蓋顛倒混合數(shù)次，靜置。待棕色沉淀物降至半瓶時，再顛倒混合一次，待沉淀物降到瓶底。5.3 碘析出輕輕打開瓶塞，立即用移液管插入液面下加入1.5ml(1+1)硫酸（4.5），小心蓋好瓶塞，顛倒混合搖勻，至沉淀物全部溶解為止，放置暗處5min。5.4 滴定取100.0ml上述溶液于250ml錐形瓶中，用硫代硫酸鈉（4.6）滴定至溶液呈淡黃色，加lml淀粉溶液（4.4），繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛好褪去為止，記錄硫代硫酸鈉用量。6 計算溶解氧（O2mg/L）=CV281000/100ff=V0/(V0-V1)式中：C硫代硫酸鈉溶液濃度（mol/L）V2滴定時消耗硫代硫酸鈉體積（ml）8氧（1/2，0）摩爾質(zhì)量（g/mol）V0250（ml）V1加入MnSO4、堿性碘化鉀的體積之和（ml）7 注意事項7.1 一般規(guī)定要在取水樣后立即進(jìn)行溶解氧的測定，如果不能在取水樣處完成，應(yīng)該在水樣采取后立即加入硫酸錳及堿性碘化鉀溶液，使溶解氧“固定”在水中，其余的測定步驟可送往實驗室進(jìn)行。取樣與進(jìn)行測定時間間隔不要太長，以不超過4小時為宜。7.2 瓶中充滿水樣時，必須不留空氣泡，不然空氣泡中的氧也會氧化Mn(OH)2，使分析結(jié)果偏高。7.3 水中如果有亞硝酸鹽存在，亞硝酸氮含量大于0.1mg/L時，由于亞硝酸鹽與碘化鉀作用能析出游離碘，在反應(yīng)中析出的N0在滴定時受空氣氧化而生成亞硝酸 2NO2-十4H+2I-2NO+I2+2H2O 2 NO+O2 2NO2 2NO2+H2OHNO2+HNO3亞硝酸又會從碘化鉀中將碘析出，這樣就