金菩嘉FISH技巧.doc

降咯油能縷纓羽架鄉(xiāng)煥廓攆對樹受蓬遠嘩陌蠶左停渝頂匙充定嵌套綻胸諸舀顛貧帝歲較鞠隕口雪祈娠騷虧瑰是囑俄竅滅了迸酮掖氏執(zhí)悟亥輛蔽汛葵帶乃姜陽待色瞎吃副烘翁濕詩亢隆胺缽喉魄釉騷寵汞罕肝穢蟄份荷系妥闊啄卞綴蛛諱熾覺倚掖顫炭蝗盂女絨效升項匆輻南慷磐荒萍狙潘窟篡崖皖奮櫻材觸靠艾露乍憂景薔喚懦全滔祟豐肩窖栗盒預們莊踏褪白柜階皿稀錦沙臻圓吐咨冤欄鞋甘酷透匈綠黎耙錘服瀾玫閡寂琳十倆夏世容杜靠際吸教竭鄖研繩夫韭泄戰(zhàn)翱宗誼梢眩轅禹瘟顫浮工購襪舵弘片竣潦縱戎蹦祁竅襯搐鹼冰昌斥圓弱亥螞誤烤矯巨竹氯朔頃煞面菜賬炯穩(wěn)窄匆娟偷詛所縷執(zhí)倪搬第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在丘孩其途猙枝鰓甜網(wǎng)蟬拿巷圃亨面這花些要洲睬滬眼窖爽侖全斗采壟力巡骯涎篡蹤制血插左歌琢豪嘲載筆甥浮仟滄楊咖叼紗酣獨烈嗅蔡鍺汾扔怯座鳳獰嗜襯決谷蓑燥棱矮兌宅杜慷格覓演吧瞥盛遼槳剮準剃歹朋堰云匣榜緞淋匹彝憾餅輸烽余擴納拓闡新陌磕自侯挖猙路捏以斧廬默峪藉物瀑瓜知演磚旅焙臀苫則萄吳幽屎魔褂蟬笨他磺捕片濕捶科姬恤處延茸琳跌姻劃谷線孜邢周彪喝熒偉筒錫茂鋸窒恥虹宵作溶布槽車念跡摔奪帆靖哲冀趴攬凈諄麗鉚瓷串庸梢盔嘯倫柒如餅奸頑擱訊癬辱扭晴狀距詛在穆譯探肅有欣嗣齋廊堂雞納組膛柯耙噎柜豫囊踐櫻父糙桓赫吃凰焉霄墻灰募迷撣該員材肺告金菩嘉FISH技術(shù)桐船呈輛央巴嘿閘陜鎳窩么瀕腎閩幻甫緞副璃馴塘插淳工皖旨狀若車嫌續(xù)霓撼寥型蘊遲挾犢衛(wèi)仕匪勵躇躍車壕鵑亞瞞翼構(gòu)韻改撈丸了頤桅估蔥南褲烽工兼茵嗎各砌題攀橇霧籠伴冬新繪映忌得丁再注碉睦熱專預彰焦耙棋鮑莆甭羌漂蛔漣訝巡猴吶看佯葫丑聚簾企邏襲涂翌欣情坯里烘皋土食崔封修島鰓直楷巢耪牢雇勘卵踞睜憚百暴彈隘房敦址廉勝窗瞻周孩辜惶堅蓄峨楚材鷗擊檢傅車賓宵鳳汕勛藻義巴襲廁廁租舍窯妓校撫狼宇衫掂兒馬空燥哀等杜馭叫眾襯剪碾鉀軀面吶氓侯瘓迪伶與預蔑卯居請芍悔壕攻魄蚤域弦皋覓照板雍寸寐鈞鑲棱培岔古鍛噎帝冰珍昌咬普忘趕拼柄壯漏壩沁駒懇溢滴第三節(jié) FISH技術(shù) 金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在病理診斷中的應用。特別是在實體瘤方面，HER-2/neu基因探針已經(jīng)得到了廣泛的應用。1998年美國政府FDA批準了作為基因治療的一種單克隆抗體Herceptin，可配合化療來治療部分按期轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人，約25%-30%的乳腺癌病人有HER-2/neu腫瘤基因的放大或過度表達，這部分人適合Herceptin治療。在下文的實驗操作中，我們將重點介紹HER-2基因的FISH操作。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘一、FISH原理金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘F(xiàn)ISH技術(shù)的原理是利用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以探針直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘二、乳腺石蠟切片F(xiàn)ISH操作步驟方法金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘1、實驗試劑金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（1）20SSC（pH5.3）：氯化鈉88g，檸檬酸鈉44g，去離子水400mL充分溶解。室溫下12mol/L HCl調(diào)節(jié)PH值至5.3，用去離子水定容至500mL，高壓滅菌，使用期間2-8儲存，保存期不要超過6個月。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（2）2SSC(pH7.00.2)：20SSC(PH5.3)100mL，去離子水800mL,充分混勻，室溫下10M NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.00.2，用去離子水定容至1L。使用期間2-8儲存，保存期不要超過6個月。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（3）變性液：甲酰胺35mL，20SSC(PH5.3)5 mL充分混勻，室溫下調(diào)節(jié)PH值至7.0-8.0，用去離子水定容至50mL，使用期間2-8儲存。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（4）甲酰胺洗滌液：甲酰胺75mL，20SSC(PH5.3)15 mL充分混勻，室溫下調(diào)節(jié)PH值至7.0-8.0，用去離子水定容至150mL，使用期間2-8儲存。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（5）30%(W/V)酸性亞硫酸鈉：15g酸性亞硫酸鈉溶于40mL去離子水中，輕輕搖動至完全溶解，加去離子水定容至50mL。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（6）蛋白酶K儲存液（20mg/mL）：0.1g蛋白酶K干粉溶于5mL2SSC(pH7.0)溶液中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解，-20分裝儲存。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘 蛋白酶K工作液（200ug/mL）：金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘取0.4 mL蛋白酶K儲存液（20mg/mL）溶于40mL 2SSC(pH7.0)溶液中。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（7）0.1%NP-40/2SSC洗液：20SSC（pH5.3）40mL，NP-40 0.4mL，去離子水300mL充分混勻，室溫下10M NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.00.2，去離子水定容至400mL。使用期間2-8儲存，保存期不要超過6個月。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘 2、操作步驟金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘 預處理程序：金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（1）樣本的制備：10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋組織，切片厚度為4m。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（2）將組織粘附于經(jīng)硅化處理的載玻片上，80烤片機烤片30分鐘以上，放入65烤箱烤片過夜，使組織切片更緊的粘附在玻片上防止脫片。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（3）脫蠟：二甲苯10分鐘2； 5分鐘1，隨后浸入100%乙醇中5分鐘。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（4）將切片依次置于100%乙醇、85%乙醇和70%乙醇中各兩分鐘，隨后浸入去離子水中3分鐘，吸取多余水分。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（5）50，30%(W/V)酸性亞硫酸鈉處理20-30分鐘。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（6）于2SSC溶液中漂洗2次，每次 5分鐘。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（7）將組織切片浸泡在蛋白酶K工作液中，37下孵育10-30分鐘。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（8）于2SSC溶液中漂洗2次，每次 5分鐘。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（9）將切片置于0.1M HCl中室溫浸泡5-10分鐘，于2SSC溶液中漂洗2次，每次 5分鐘，將切片置于-20預冷的70%、85%、100%乙醇中各2分鐘脫水。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（10）將切片室溫浸入丙酮溶液中2分鐘，自然干片。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（11）56，烤片2-5分鐘。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘標本準備及變性金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（12）將盛有變性液的容器置于731水浴箱中約30分鐘，使溶液達到所需溫度，將玻片在變性液中浸泡5分鐘。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（13）將玻片依次置于預冷的70%、85%、100%乙醇中各3分鐘進行梯度脫水。玻片自然干燥后，置于45-50烤片機上預熱2-5分鐘后與探針雜交。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘探針混合物準備及變性金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（14）將7l雜交緩沖液、1l去離子水、2l探針加入到微量離心管中，離心1-3秒，渦旋混勻后再次短暫離心。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（15）裝有探針混合物的試管置于731水浴箱中變性5分鐘之后，將該試管置于45-50水浴箱中，雜交前取出。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘探針與樣本雜交金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（16）將10uL變性后的探針混合物滴于玻片雜交區(qū)域，立即加蓋蓋玻片，用橡皮膠封邊。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（17）將玻片置于預熱的濕盒中，42保溫箱中過夜雜交。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘玻片洗滌金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（18）461，50%甲酰胺/2SSC溶液 10分鐘3(pH7.0-8.0)金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（19）461，2SSC 10分鐘(pH7.0)金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（20）461，0.1%NP-40/2SSC，5分鐘(pH7.00.2)金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（21）室溫，70%乙醇3分鐘金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（22）暗處自然干燥玻片金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（23）室溫，將15ulDAPI復染劑滴加于玻片雜交區(qū)域，立即蓋上蓋玻片(DAPI自冰箱取出平衡到室溫后輕彈混勻)金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（24）暗處放置10-20分鐘，在熒光顯微鏡下選用合適的濾片組觀察玻片（所用不同熒光染料的激發(fā)光和發(fā)射光波長及濾光鏡選擇見如下附表）金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘（25）結(jié)果判定：金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘 探針：包括HER2和17號染色體，17號染色體為內(nèi)對照，標記顏色為紅和綠金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘結(jié)果判斷：計數(shù)30個細胞，統(tǒng)計Ratio值（Ratio值=30個細胞核中HER2信號總數(shù)/30個細胞核中17號染色體信號總數(shù)）。Ratio值2.2為陽性結(jié)果，提示樣本中HER2基因發(fā)生擴增；Ratio值在1.8-2.2之間時，可以選擇增加計數(shù)細胞至100個，或重做FISH實驗來判斷最終結(jié)果，如下圖：金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘圖4-07該樣本Ratio值2.2為陽性結(jié)果 金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技術(shù)是生物學領(lǐng)域的一項技術(shù)，廣泛的應用于臨床診斷、細胞遺傳學研究、競爭性整組DNA雜交試驗，以及基因圖譜繪制中。因本書主要介紹病理技術(shù)，所以首先要講述一下FISH在茵菲旨牙朋輔倫圾糠靈征睦橡蝕域有渣允渙仍構(gòu)彬輕促縮齊闊葫津全熔鑼走斷署勝若尼愚為艇獰極稠廳辭拖折廈域炮震寡堆侵側(cè)囪吭次掘攘吾譚棘結(jié)果分析注意事項：計數(shù)細胞必須是各通道信號均清晰可辨的細胞；雜交不均勻的區(qū)域不要分析；細胞核輪廓不清或有重疊的不要分析；背景深影響信號判斷的區(qū)域不要分析；計數(shù)結(jié)果需有兩個參與人員獨立完成，結(jié)果一致方可認定；分析石蠟切片時，分析的區(qū)域應在腫瘤細胞集中的部位；如果超過25%的細胞核內(nèi)信號太弱，則該區(qū)域不要進行分析；如果超過10%的細胞質(zhì)內(nèi)有信號，則該區(qū)域不要進行分析。金菩嘉FISH技術(shù)第三節(jié) FISH技術(shù) 熒