實(shí)驗(yàn)四 動(dòng)物血液基因組DNA的提取.ppt

動(dòng)物基因組DNA的提取 常祖明 背景知識(shí) 動(dòng)物細(xì)胞中有哪些細(xì)胞器中含有DNA 與植物細(xì)胞的差別 背景知識(shí) DNA的存在形式 背景知識(shí) DNA的存在形式 背景知識(shí) DNA的存在形式 背景知識(shí) DNA的存在形式 核苷酸 雙螺旋結(jié)構(gòu) 一級(jí)結(jié)構(gòu) 核小體 二級(jí)機(jī)構(gòu) 螺線管 三級(jí)結(jié)構(gòu) 超螺旋管 四級(jí)機(jī)構(gòu) 染色體 組蛋白 DNA為白色類似石棉樣的纖維狀物 大都呈酸味 DNA是極性化合物 一般都溶于水 不溶于乙醇 氯仿等有機(jī)溶劑 它們的鈉鹽比游離酸易溶于水 在酸性溶液中 易水解 中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定 DNA的理化性質(zhì) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握CTAB法提取植物DNA的原理掌握CTAB法提取植物DNA的實(shí)驗(yàn)方法注意 此方法會(huì)把少量RNA提取出來 故后面通稱核酸的提取 實(shí)驗(yàn)原理 哺乳動(dòng)物的成熟紅細(xì)胞已經(jīng)高度分化 因而當(dāng)中沒有細(xì)胞核 無法提取DNA 禽類的血細(xì)胞則可以 禽類代謝旺盛 血液中紅細(xì)胞更多 而且紅細(xì)胞中有完整的細(xì)胞核 大量的染色體 且材料易得 經(jīng)濟(jì) 用雞血細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)材料有兩個(gè)原因 一是因?yàn)殡u血細(xì)胞核的DNA含量豐富 材料易得 二是雞血細(xì)胞極易吸水脹破 而用動(dòng)物肝臟細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)材料常常需要?jiǎng)驖{和離心 對(duì)設(shè)備要求較高 操作繁瑣 歷時(shí)較長 實(shí)驗(yàn)原理 固定 血樣采集 抗凝血 裂解細(xì)胞 蛋白質(zhì)降解 蛋白質(zhì)變性 沉淀DNA 洗滌去雜質(zhì) 普通家雞無水乙醇 檸檬酸 檸檬酸鈉 尿素 十二烷基硫酸鈉 SDS 1MTris HCl PH8 0 緩沖液 乙二胺四乙酸二鈉 EDTA 2Na 蛋白酶K Tris飽和酚 氯仿 三氯甲烷 異戊醇 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)儀器 取血針及管離心機(jī) 3臺(tái) 12管離心管 水浴鍋 65 移液槍 包括槍頭 實(shí)驗(yàn)試劑 1 75 的乙醇2 ACD抗凝劑100ml 共需48ml 每管0 8ml 3 禽血裂解液100ml 共需51ml 每管1 7ml 4 氯仿 異戊醇 24 1 共需54ml 每管1 8ml5 酚 氯仿 異戊醇 25 24 1 共需60ml 每管2ml6 TE緩沖液PH8 050ml 實(shí)驗(yàn)步驟 75 乙醇20ml 翅下取血5ml 5ml離心管 800ulACD抗凝劑 800ulACD抗凝劑 8000轉(zhuǎn)離心1分鐘 棄上清液 8000轉(zhuǎn)離心1分鐘 棄上清液 取680ul 8000轉(zhuǎn)離心1分鐘 55 水浴過夜 1700ul裂解液 10ul蛋白酶K 實(shí)驗(yàn)步驟 2ml飽和酚 搖勻至無塊狀 12000轉(zhuǎn)離心10分鐘 DNA酚蛋白層 5ml離心管 取上層透明的DNA溶液 2ml酚 氯仿 異戊醇 12000轉(zhuǎn)離心10分鐘 5ml離心管 取上層DNA液 1 8ml氯仿 異戊醇 12000轉(zhuǎn)離心10分鐘 5ml離心管 取上層DNA液 無水乙醇 75 無水乙醇 1000ulTE緩沖液 晾干 20 保存 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作 部分藥品有毒 操作中應(yīng)注意安全防護(hù) 剛投入水浴時(shí)可以稍快速的晃動(dòng) 之后的晃動(dòng)一定要輕柔 再每一次加入藥劑后 都要輕輕晃動(dòng)離心管 使之混勻 注意事項(xiàng) 思考題 本實(shí)驗(yàn)中用到的各種試劑的作用是什么 本實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行了幾次離心操作 每次的目的 實(shí)驗(yàn)安排 按照學(xué)號(hào)分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 每6人一組 一組做3管 用一個(gè)研缽 每3組共用1臺(tái)離心機(jī)同時(shí)進(jìn)行離心操作 6人一組 2013級(jí)生物技術(shù)專業(yè)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)