甾體激素類藥物分析藥物分析.ppt

甾體激素類藥物的分析,基本要求,結(jié)構與性質(zhì),返回主目錄,鑒別試驗,雜質(zhì)檢查,含量測定,概述,基本要求,1掌握甾體結(jié)構類藥物的結(jié)構特點與分析方法之間的關系。2掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。3掌握甾體類藥物的含量原理與方法。4熟悉甾體類藥物雜質(zhì)檢查的方法。,返回,基本結(jié)構：環(huán)戊烷駢多氫菲,A,B,C,D,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,概述,分類：,甾體激素,腎上腺皮質(zhì)激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,腎上腺皮質(zhì)激素,氫化可的松,腎上腺皮質(zhì)激素,醋酸地塞米松,腎上腺皮質(zhì)激素,曲安息龍,腎上腺皮質(zhì)激素,地塞米松磷酸鈉,雄性激素,甲睪酮,雄性激素,丙酸睪酮,蛋白同化激素,苯丙酸諾龍,孕激素,黃體酮,孕激素,醋酸甲地孕酮,雌性激素,炔雌醇,雌性激素,雌二醇,炔諾酮,此外,炔諾孕酮,返回,一、結(jié)構與性質(zhì),1.腎上腺皮質(zhì)激素,2.雄性激素及蛋白同化激素,3.孕激素,4.雌性激素,返回,二、鑒別試驗,（一）與強酸的呈色反應,甾體激素類藥物,呈色,H2SO4H3PO4HClO4HCl,（母核）,與硫酸顯色反應,顯色熒光加水稀釋,潑尼松龍深紅絮狀灰,潑尼松橙黃藍綠,炔雌醚橙紅黃綠紅色,炔雌醇橙紅黃綠絮狀玫紅,醋酸可的松黃或微褪色并澄帶橙清,(二)官能團的反應,腎上腺皮質(zhì)激素藥物,呈色,四氮唑鹽OH,1、C17醇酮基,還原性,呈色反應,此外還有斐林試液、多倫試液,甾酮類激素藥物,呈色,羰基試劑,2.C3酮基和C20酮基,常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼,具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物,呈色,亞硝基鐵氰化納間二硝基酚芳香醛,3.甲酮基,黃體酮,藍紫色,亞硝基鐵氰化納,其他甾體,淡橙色不顯色,有機氟,F,有機破壞,有機氯,Cl,4.有機鹵素,茜素氟藍硝酸亞鈰,硝酸硝酸銀,AgCl,呈色,雌激素類藥物,紅色偶氮染料,重氮苯磺酸,5.酚羥基,含炔基的甾體激素,銀鹽沉淀,硝酸銀,6.乙炔基的沉淀反應,(三)制備衍生物測定m.p.,1.縮氨基脲的生成,m.p.約180（分解）,2.酯的水解,m.p.為150156,-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結(jié)構,（四）UV法,1.結(jié)構依據(jù),240nm左右,280nm左右,2.示例,曲安西龍,丙酸倍氯米松,溶劑,甲醇,乙醇,20g/ml,濃度,20g/ml,結(jié)果判斷,在238nm處有最大吸收,在239nm處有最大吸收，A為0.570.60，在239nm與263nm處的吸收度比值為2.252.45,結(jié)構特征：酚羥基、C17OHC17乙炔基,炔雌醇,（五）IR法,1505cm-1,3505cm-1,3300cm-1,1590cm-1,3610cm-1,酚羥基,醇羥基,1615cm-1,苯環(huán)的骨架振動,黃體酮,結(jié)構特征：-3-酮、C17-酮基,1700cm-1,C=O,20位酮基,1665cm-1,3位酮基,1615cm-1,870cm-1,C-H,雙鍵,（七）TLC法,主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別,方法：對照品法要求供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同。,（八）HPLC法,主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）,方法：對照品法要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。,返回,三、特殊雜質(zhì)檢查,（一）其他甾體的檢查,檢查意義：其他甾體與甾體激素藥物結(jié)構相似，也有一定的藥理作用而又互不相同.,檢查方法（具有一定分離能力）TLC法（高低濃度對比法）HPLC法（類似高低濃度對比法）,（1）TLC法（高低濃度對比法）,判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色,例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1）濃度：3.0mg/ml對照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60g/ml層析：供試液點樣、展開、斑點檢出。對照液判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于3個，其顏色與對照液的主斑點比較，不得更深。,（2）HPLC法（主成分自身對照法）,判定方法：規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積,硒的檢查,（二）,來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫,有毒,方法,藥物,氧瓶燃燒,二氨基萘比色法測定,（三）有機溶劑殘留量的檢查,（靈敏度法）,甲醇不得出峰檢測限=3.1ng,丙酮5.0%內(nèi)標法+校正因子,以地塞米松磷酸鈉為例GC法,地塞米松磷酸鈉,檢查甲醇和丙酮,精密稱取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加內(nèi)標溶液2ml，加水稀釋至刻度，作為供試液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)與丙酮100l(79mg)置100ml量瓶中，精密加內(nèi)標溶液20ml，加水至刻度，作為對照液。照氣相色譜法測定，含丙酮不得過5.0%，并不得出現(xiàn)甲醇峰。,（二）游離磷酸鹽的檢查,地塞米松磷酸鈉,對照品比色法,供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸鉬藍：740nm對照液：同上,（對照液0.0035%KH2PO4）,返回,USP、BP、JP均采用,RPHPLC（大多內(nèi)標法）,（甾體激素類藥物常含有結(jié)構相似的其他甾體雜質(zhì)，對利用結(jié)構特征設計的比色法有干擾）,四、含量測定,測定對象：甾體激素類藥物的原料和制劑。,示例：黃體酮的含量測定色譜條件：固定相ODS，流動相甲醇-水（65:35），檢測波長254nm，內(nèi)標物己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗：n1000，R符合規(guī)定。,測定樣品：黃體酮原料、注射液。定量方法：內(nèi)標法,（二）UV法,-3-酮240nm（）,腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥,苯環(huán)280nm（）,雌激素,示例：醋酸地塞米松片的含量測定（1）配制供試液（2）測定：240nm（3）計算,腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素,C3酮基,（1）原理,異煙腙（黃）,酮基,異煙肼,-,3,C,HCl,（縮合）,（三）比色法,異煙腙（黃色）,（2）方法,對照品法,（3）討論,反應速度（反應專屬性）,A.,C3=OC17=O、C20=OC11=O不反應,反應專屬性C3酮基,B.溶劑的選擇,異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇,無水甲醇無水乙醇,C.水分、溫度、O2與光線的影響,含水量腙水解A%,不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時O2與光線無影響,t,D.酸的種類和濃度及異煙肼的濃度,腎上腺皮質(zhì)激素類,C17-醇酮基,強還原性,（1）原理,2.四氮唑比色法,三苯甲瓚深紅,H,藍四氮唑（BT）,（2）方法,對照品法,B.溶劑、水分的影響,以無醛乙醇為溶劑,C.O2與光線的影響