GB28404-2012保健食品中α-亞麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的測定.pdf

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) GB 284042012 中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2012-05-17 發(fā)布 2012-07-17 實(shí)施 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 保健食品中-亞麻酸、 二十碳五烯酸、 二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的測定 GB 284042012 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 保健食品中-亞麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸 和二十二碳六烯酸的測定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了保健食品中 -亞麻酸、二十碳五烯酸（簡稱 EPA，下同） 、二十二碳五烯酸（簡稱DPA，下同）和二十二碳六烯酸（簡稱 DHA，下同）的氣相色譜測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于保健品食品中 -亞麻酸、EPA、DPA、DHA 的測定，不適用于以脂肪酸乙酯為有效成分的保健食品中 -亞麻酸、EPA、DPA、DHA 的測定。 2 原理 試樣經(jīng)酸水解后提取脂肪，其中 -亞麻酸、二十碳五烯酸（EPA） 、二十二碳五烯酸（DPA） 、二十二碳六烯酸（DHA）經(jīng)酯交換生成甲酯后，通過氣相色譜分離檢測，以保留時間定性，外標(biāo)法定量。 3 試劑和材料 注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T6682 規(guī)定的一級水。 3.1 試劑 3.1.1 氫氧化鉀（KOH） 。 3.1.2 鹽酸（HCl） 。 3.1.3 無水乙醚（C2H5OC2H5） 。 3.1.4 乙醇（CH3CH2OH）：體積分?jǐn)?shù)95。 3.1.5 石油醚：沸程 3060。 3.1.6 正己烷（CH3(CH2)4CH3） ：色譜純。 3.1.7 甲醇（CH3OH） ：色譜純。 3.1.8 無水硫酸鈉（Na2SO4） 。 3.2 試劑配制 氫氧化鉀甲醇溶液（0.5 mol/L） ：稱取2.8 g氫氧化鉀，用甲醇溶解并定容至100 mL，混勻。 3.3 標(biāo)準(zhǔn)品 3.3.1 -亞麻酸甲酯(C19H32O2)：純度99.0。 3.3.2 EPA 甲酯(C21H32O2)：純度98.5。 3.3.3 DPA 甲酯(C23H36O2)：純度98.0。 3.3.4 DHA 甲酯(C23H34O2)：純度98.5。 3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 GB 284042012 2 3.4.1 單個脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液(4.0 mg/mL)： 稱取 100.0 mg -亞麻酸甲酯、 EPA 甲酯、 DPA 甲酯、DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于 25.0 mL容量瓶中， 分別用正己烷溶解并定容至刻度， 搖勻。 此溶液應(yīng)貯存于-18冰箱中。 3.4.2 脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 （1.0 mg/mL） ： 分別吸取脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液 2.50 mL 于 10.0 mL容量瓶中，搖勻，亦為標(biāo)準(zhǔn)曲線最高濃度，臨用時配制。 3.4.3 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取脂肪酸甲酯中間液 0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL 于 10.0 mL 容量瓶中，用正己烷定容，此濃度即為 0.040 mg/mL、0.080 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液，臨用時配制。 4 儀器與設(shè)備 4.1 氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測器（FID） 。 4.2 天平：感量為 1 mg 和 0.1 mg。 4.3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 4.4 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速4000 r/min。 4.5 渦旋混合器。 4.6 恒溫水浴鍋。 5 分析步驟 5.1 試樣制備 5.1.1 試樣處理 5.1.1.1 固體試樣 稱取已粉碎混合均勻的待測試樣 0.5 g2 g（精確到 0.001 g）（含待測組分約 5 mg/g10 mg/g）加入 50 mL 比色管中，加 8 mL 水，混勻后再加 10 mL 鹽酸。將比色管放入 7080水浴中，每隔5 min10 min 以渦旋混合器混合一次，至試樣水解完全為止，約需 40 min50 min。取出比色管，加入 10 mL 乙醇，混合。冷卻至室溫后將混合物移入 100 mL 具塞量筒中，以 25 mL 無水乙醚分次洗比色管，一并倒入量筒中。密塞振搖 1 min。加入 25 mL 石油醚，密塞振搖 1 min，靜置 30min，分層，將吸出的有機(jī)層過無水硫酸鈉 （約 5 g） 濾入濃縮瓶中。 再加入 25 mL 無水乙醚密塞振搖 1 min， 25 mL石油醚，密塞振搖 1 min，靜置、分層，將吸出的有機(jī)層經(jīng)過無水硫酸鈉（約 5g）濾入濃縮瓶中，按“再加入 25 mL 無水乙醚，靜置、分層、過無水硫酸鈉”重復(fù)操作一次，將全部提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于 45減壓濃縮近干。用正己烷少量多次溶解濃縮物，轉(zhuǎn)移至 25 mL 容量瓶并定容，搖勻。按5.1.2 步驟甲酯化處理。 5.1.1.2 油類制品 稱取混合均勻的油類制品 0.2 g1 g（精確到 0.001 g）（含待測組分約 10 mg/g20 mg/g。 ）至 25 mL 容量瓶中，加入 5 mL 正己烷輕搖溶解，并用正己烷定容至刻度，搖勻。按 5.1.2 步驟甲酯化處理，脂肪酸乙酯型油類制品的物理鑒別參見附錄 A。 5.1.2 甲酯化 吸取待測液（5.1.1.1，5.1.1.2）2.0 mL 至 10 mL 具塞刻度試管中，加入 2.0 mL 氫氧化鉀甲醇溶液，立即移至渦旋混合器上振蕩混合 5 min，靜置 5 min，加入 6 mL 蒸餾水，上下振搖 0.5 min，靜置分層后，吸取下層液體，棄去后再反復(fù)用少量蒸餾水進(jìn)行洗滌，并用吸管棄去水層，直至洗至中性（若有GB 284042012 3 機(jī)相有乳化現(xiàn)象，以 4000 r/min 離心 10 min） ，吸取正己烷層待上機(jī)測試用。 注：如使用塑料離心管或塑料刻度試管進(jìn)行試樣處理須同步進(jìn)行空白對照試驗(yàn)。 5.2 氣相色譜參考條件 5.2.1 色譜柱: 鍵合交聯(lián)聚乙二醇固定相，柱長 30 m，內(nèi)徑 0.32 mm，膜厚 0.5 m 或同等性能的色譜柱。 5.2.2 柱溫箱溫度：起始溫度 180 ，10 /min 升溫至 220 ，再以 8 /min 升溫至 250 ，保持13 min。 5.2.3 進(jìn)樣口溫度：250 ；進(jìn)樣量 1 L，分流比 201。 5.2.4 FID 檢測器溫度：270。 5.2.5 載氣：高純氮?dú)?，流?1.0 mL/min，尾吹 25 mL/min。 5.2.6 氫氣：40 mL/min；空氣 450 mL/min。 5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 將 1 L 的標(biāo)準(zhǔn)系列各濃度溶液（3.4.2、3.4.3） ，注入氣相色譜儀中，測得相應(yīng)的峰面積或峰高，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖見附錄 B 中圖 B.1） 。 5.4 試驗(yàn)溶液的測定 將 1 L 的試樣待測液（5.1.2）注入氣相色譜儀中，以保留時間定性，測得峰面積或峰高，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中各脂肪酸甲酯的組分濃度（樣品溶液氣相色譜圖見附錄 B 中圖 B.2） 。 6 分析結(jié)果的表述 試樣中 -亞麻酸、EPA、DPA、DHA 含量按式（1）計算： 1000100mFVCXii(1) 式中： Xi試樣中-亞麻酸、EPA、DPA、DHA的含量，單位為克每百克（g/100g） ； Ci由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測定樣液中各脂肪酸甲酯的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL） ； V被測定樣液的最終定容體積，單位為毫升（mL） ； m試樣的稱樣質(zhì)量，單位為克（g） ； F各脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)，其中：-亞麻酸甲酯轉(zhuǎn)化為 -亞麻酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)為 0.9520； EPA 甲酯轉(zhuǎn)化為 EPA 脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)為 0.9557； DPA 甲酯轉(zhuǎn)化為 DPA 脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)為 0.9592；DHA 甲酯轉(zhuǎn)化為 DHA 脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)為 0.9590； 100單位轉(zhuǎn)換； 1000單位轉(zhuǎn)換。 計算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。 7 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的 10% 。 8 其他 GB 284042012 4 當(dāng)試樣量為 0.5 g， 定容體積為 25 mL， 各脂肪酸的定量限分別為 -亞麻酸 0.010 g/100g， EPA 0.018 g/100g，DPA 0.024 g/100g，DHA 0.018 g/100g。 GB 284042012 5 附錄 A 脂肪酸乙酯型油類制品的物理鑒別 稱取 1 g 樣品，加入 1.0 mL 無水乙醇，于渦旋混合器（2000 r/min）混勻 30 s，靜置，觀察油在乙醇中的溶解情況。如果油樣不溶于乙醇，出現(xiàn)明顯的油和乙醇分層的現(xiàn)象，則判斷此產(chǎn)品為脂肪酸甘油酯型油類制品，可采用本標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析；若靜置后，看不見油狀液滴，溶解完全且溶液清澈透明，可判斷此產(chǎn)品為脂肪酸乙酯型油類制品，不能使用本標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析。 GB 284042012 6 附錄 B 標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液典型氣相色譜圖 B.1 -亞麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA 甲酯、DHA 甲酯的標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，見圖 B.1。 1-亞麻酸甲酯； 2EPA 甲酯； 3DPA