梁超綠康抗菌肽物質(zhì)與小豬下痢LC.ppt

抗菌肽物質(zhì)與預(yù)防小豬下痢 (文獻綜述),綠康生化股份有限公司 梁超博士 2019年6月20日 上海,1,報告人簡介,姓名: 梁超 職務(wù): 質(zhì)量與法規(guī)總監(jiān) (綠康生化股份) 學歷: 博士(美國堪薩斯州立大學) 經(jīng)歷: 美國建明工業(yè)公司 （亞洲區(qū)技術(shù)總監(jiān)） 美國雅來大藥廠 （中國區(qū)總經(jīng)理） 泰國正大生化集團 （技術(shù)顧問 ） 美國微營養(yǎng)公司 (亞太區(qū)總經(jīng)理) 論文: 30多篇 專利: 5件,2,抗菌肽是有抗菌活性的肽類化合物(馬衛(wèi)明,2019)。已有1000多種抗菌肽物質(zhì)被研究。中文報告多達4-8000份,而英文論文則接近40萬份。 有報告指出我國仔豬全年平均發(fā)病率46.5%, 因下痢致死亡率為 10.3%, 是影響中國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要因素之一 。 本文是抗菌肽物質(zhì)和小豬下痢有關(guān)的文獻綜述。,3,4,( 馬衛(wèi)明, 2019, 中國農(nóng)業(yè)大學博士論文),（ 同時具有抗菌特點及肽結(jié)構(gòu)這兩種性質(zhì)的物質(zhì) = “抗菌肽”,“肽結(jié)構(gòu)” = 幾至幾百個氨基酸呈線性或環(huán)狀聚合物,抗菌肽研究概述 (1000多種抗菌肽物質(zhì)),5,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,6,Lactoferrin (乳鐵蛋白),1959年Groves用色譜得到純的紅色的含鐵的糖蛋白 乳鐵蛋白在人乳中的濃度為1.0-3.2mg/ml，是普通牛乳中的10倍（牛乳中含量為0.02-0.35mg/ml）,而人初乳中乳鐵蛋白可達6-14mg/ml. 一般推測, 其他哺乳動物的初乳中的乳鐵蛋白也很高 乳鐵蛋白對鐵離子的吸附性超強, 一般認為它可以奪走細菌生長所需的鐵質(zhì)而抑制細菌的生長，達到防治下痢的效果。,7,8,鐵離子對母豬奶水中下痢細菌生長的影響,Growth in 12 hrs (Colony forming units),O157 E. coli Clostridium perfringens Salmonella typhimurium,Klasing & Knight, 1979,10,( 盧蓉蓉 等, 2019),LF = 乳鐵蛋白,11,( 楊安樹 等, 2019),12,( 黎觀紅, 等, 2009 ),13,( 侯振平 等, 2019 ),Liang 等(1993) 報道了人 乳鐵蛋白在啤酒酵母中的表達, 然后通過酵母轉(zhuǎn)化酶分泌信號序列將重組人乳鐵蛋白分泌至細胞外, 產(chǎn)率為 15 -20 mg/L。 Ward 等(1992)把合成乳鐵蛋白的遺傳信息轉(zhuǎn)移到曲霉菌中, 然后在適宜條件下進行培養(yǎng), 從而實現(xiàn)了乳鐵蛋白的優(yōu)化生產(chǎn), 這是通過發(fā)酵大量生產(chǎn)乳鐵蛋白的重大突破。,14,乳鐵蛋白的轉(zhuǎn)基因表達,圍產(chǎn)期中，提高母豬健康，保證乳鐵蛋白數(shù)量和質(zhì)量 在母豬產(chǎn)前14天至產(chǎn)后21天，母豬飼料中添加 250ppm MDAB(必恩迪), 能有效防治由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的乳豬腸炎 。（美國 FDA法規(guī) ， 21 CFR Ch. I 558.76, ),15,小結(jié) 1,豬母乳含有豐富的乳鐵蛋白, 是預(yù)防仔豬下痢的“抗菌肽”最佳來源 在母豬圍產(chǎn)期(產(chǎn)前-產(chǎn)后)的母豬飼料中使用抗菌肽產(chǎn)品能減少仔豬下痢現(xiàn)象, 有可能是母豬健康保證了奶水質(zhì)量和乳鐵蛋白抗菌肽含量的結(jié)果,16,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,17,豬小腸中抗菌肽研究成果舉例,18,（馬衛(wèi)明， 2019,中國農(nóng)業(yè)大學博士論文),19,( 趙燕飛 等, 2019 ),20,( 王春維,2019 ),21,( 徐軍等, 2019 ),腸膜蛋白對教槽料的影響,22,腸膜蛋白,( 司馬博鋒 等, 2019),小結(jié) 2,豬腸膜抗菌肽開發(fā)還處于研究階段. 使用豬腸膜粉(加工后副產(chǎn)品)作為腸膜抗菌肽來源養(yǎng)豬對防治仔豬下痢有一定的效果 直接使用腸膜粉(抗菌肽)存在生物安全問題 通過基因工程菌生產(chǎn)腸膜抗菌肽仍需研究,23,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,24,細菌源抗菌肽的比較,地衣芽孢菌是全球幾十個國家所批準使用的益生菌（直飼微生物）,25,FDA法規(guī)尚未批準硫粘，恩拉和那西肽作為飼料中長期添加的藥物,桿菌肽與硫粘菌素簡介,26,桿菌肽的抑菌機理及其與其它抗菌素的區(qū)別,27,( Smith & Weinberg, 1962),桿菌肽對動物結(jié)腸中產(chǎn)氣莢膜梭菌 的抑制作用,28,( Stutz, et al., 1983),29,( Nurmi & Rantala, 1974 ),兩種桿菌肽產(chǎn)品的理化差異,30,美國 FDA關(guān)于桿菌肽的法規(guī) ( 21 CFR Ch. I 558.76, ),31,亞甲基水楊酸桿菌肽,國家五類新獸藥 具有“生產(chǎn)許可證”、“獸藥添字文號” 成分確定，效果明確, 暫無耐藥菌株 商品名: “必恩迪”( 含量: 15% ) 該產(chǎn)品的研究報告有: 8000多份 scholar.google/scholar?hl=zh-CN&q=Bacitracin+methylene+disalicylate&btnG=&lr=,32,33,( 陳紹峰, 2019 ) ,南京農(nóng)業(yè)大學碩士論文,硫粘菌素對內(nèi)毒素的中和作用,34,( Cooperstock, M. S., 1974),鱟試劑反應(yīng) 呈陰性,35,( 牛志強, 2019 ),36,處理 1 組：60 ppm 鹽霉素，+ 20 ppm 進口硫酸粘桿菌素 處理 2 組：60 ppm 鹽霉素，+ 20 ppm 國產(chǎn)硫酸粘桿菌素,（王寧， 2019 , 中國農(nóng)業(yè)大學碩士論文）,37,（趙志杰等, 2019 ）,小結(jié) 3,桿肽和硫粘是最常使用在仔豬料中的抗菌肽獸藥添加劑, 效果明顯和安全 由于農(nóng)業(yè)部法規(guī)限制,目前在仔豬飼料中的使用受到影響. 需要研究更好的使用方式(如配伍等) 及探討申請預(yù)防仔豬下痢的”專用配方”,38,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,39,40,( 朱伶俐, 2019 , 江南大學碩士論文 ),溶菌酶抗菌肽(Lys-Pe)對不同菌種的抑菌情況,41,( 朱伶俐, 2019 , 江南大學碩士論文 ),42,( 邵春榮 等, 2019 ),( 溶菌酶制劑由雞蛋清經(jīng)鹽析、凍干后制成,每毫克含溶菌酶1500單位。 ),43,( 邱偉海, 2019 ),44,( 朱軍英, 2009 ),45,( 張鋒,2019, 山東農(nóng)業(yè)大學碩士論文),( 開食料中添加溶菌酶可溶性粉劑（5000IU/mg），每 100kg 飼料中添加 10、5.0、2.5g；傳統(tǒng)藥物對照組每 100kg 飼料中添加強力霉素 200g；空白對照組不添加任何藥物 ),46,( 網(wǎng)絡(luò)資訊 ),小結(jié) 4,1）轉(zhuǎn)基因溶菌酶的安全性如何保證？ 2）過多的溶菌酶是否干會擾內(nèi)源溶菌酶的產(chǎn)生和分泌？ 部分人體對溶菌酶有過敏現(xiàn)象(付 琴等, 2019) , 是否有部分仔豬也會有過敏問題 ?,47,天蠶素,1975 年瑞典科學家G.Boman 等人從惜古比天蠶(Hyatophoracecropia)蛹中誘導分離得到一種殺菌肽，并將其命名為cecropin（天蠶素）。目前已經(jīng)在多種生物中發(fā)現(xiàn)了大約有 90多 種天蠶素基因。 天蠶素抗菌肽 是根據(jù) cecropin A 和 cecropin6D 設(shè)計合成的含 37 個氨基酸殘基的雜合肽, 在枯草芽孢桿菌中成功表達的基因工程產(chǎn)物 ( 王阿榮, 2019, 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學碩士論文 ) 中國知識網(wǎng)上有270多篇關(guān)于天蠶素的研究論文,48,天蠶素抗菌肽 在斷奶仔豬飼糧中的應(yīng)用效果,49,（溫劉發(fā) 等， 2019 ）,天蠶素抗菌肽由華南農(nóng)業(yè)大學蠶業(yè)服裝系黃自然教授提供,其活性為4000單位/g。,50,溫劉發(fā)等， 2019。 廣東蠶業(yè) 41( 1) : 39- 42,抗菌肽組按 2ml/kg 飼料或 0.5ml/kg 飼料的劑量。抗生素組按強力霉素 150mg/kg 及阿散酸 100mg/kg 的劑量, 混合后飼喂仔豬。,51,( 黃亞東 等, 2019 ),“天蠶素抗菌肽”對斷奶仔豬生長性能和 免疫效果的影響,52,（ 戴求仲, 2019 ),53,( 李永新, 2009 ),54,( 王阿榮, 2019, 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學碩士論文 ),試驗 I 組: 180 g/t 的天蠶素抗菌肽 試驗 II 組: 250 g/t 的天蠶素抗菌肽 試驗 III 組: 320 g/t 的天蠶素抗菌肽,55,( 杜淑環(huán), 2019 ),小結(jié) 5,天蠶素抗菌肽的效果是明顯的, 但其產(chǎn)品定位尚不明確: 新獸藥? 新飼料原料 ? 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性問題 safehoo/Essay/food/201903/263364.shtml,56,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,57,被用于防治小豬下痢的抗菌肽舉例,58,獲得免疫與固有免疫的比較 *,59,（Mukesh Pasupuleti, 2009, 瑞典 Lund 大學博士論文 ),( * 以下認知截止到目前而已 ! ),基因工程抗菌肽的問題,活性：基因工程抗菌肽活性不穩(wěn)定 毒性：有強烈的腎毒性 功能與結(jié)構(gòu)：尚需要研究 體內(nèi)穩(wěn)定性：可能被胰蛋白酶水解 耐藥性：長期使用也會產(chǎn)生 法規(guī)：暫是還沒有被“正式批準”作為飼料,60,（韓文瑜,孫長江， 2009 ）,61,gs.people/n/2019/0618/c183342-18882163.ht