免疫球蛋白免疫測定及臨床意義.ppt

特定蛋白（免疫球蛋白）的免疫測定方法,基本原理：免疫沉淀反應(yīng) 免疫透射比濁 免疫散射比濁,免疫沉淀反應(yīng)的發(fā)展歷史,1897年，Kraus發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)液與其相應(yīng)抗血清混合后出現(xiàn)肉眼可見的沉淀反應(yīng) 1902年Ascoli建立了環(huán)狀沉淀試驗(yàn)。 1905年Bechhold將抗體混溶在明膠中，然后再將相應(yīng)特異抗原加于其上，抗原抗體的特異結(jié)合可在明膠中出現(xiàn)沉淀。 1946年Oudin報(bào)道了試管單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)。（ 1965年Mancini又提出了平板單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)。） Grabar和Williams在1953年報(bào)道了免疫電泳。（對流免疫電泳、火箭免疫電泳和免疫固定電泳） 上述為經(jīng)典免疫沉淀試驗(yàn)發(fā)展階段，測定范圍窄（10 100 g/ml）、靈敏度低，繁瑣費(fèi)時(shí)，不能自動(dòng)化。,免疫沉淀反應(yīng)的發(fā)展歷史,1959年，Schultze等報(bào)道了透射比濁法（Transmission turbidimetry)。 1967年，Ritchie等報(bào)道了散射比濁法(nephelometry)。 1977年，Sternberg等進(jìn)一步發(fā)展建立了速率散射比濁法(Rate nephelometry)。 免疫比濁測定方法與免疫沉淀方法相比，靈敏度高，重復(fù)性好，測定范圍寬，已用于臨床體液特定蛋白含量的測定，現(xiàn)已有多種自動(dòng)化檢測儀器應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)，尤其是免疫散射比濁測定。,免疫透射比濁,基本原理：一定波長光線通過抗原抗體反應(yīng)混合液時(shí)，被其中的免疫復(fù)合物（IC）反射或遮擋、吸收而減弱。在一定范圍內(nèi)，透射光被吸收的量與免疫復(fù)合物的量呈正比，后者又與相應(yīng)抗原和抗體的量呈函數(shù)關(guān)系?？贵w量一定，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線獲知抗原的量。 由于要求抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量足夠，并且顆粒要足夠大（35100nm），本法的測定靈敏度和準(zhǔn)確度相對較低。 缺點(diǎn)：,免疫散射比濁,基本原理：光線通過檢測溶液時(shí)，被其中所含的抗原抗體復(fù)合物折射而部分偏轉(zhuǎn)，產(chǎn)生散射光。根據(jù)雷利散射公式，在一定條件下，透射光與微粒濃度成正比，散射光與微粒濃度成反比。 散射比濁可分為終點(diǎn)和速率散射比濁兩種。 光源 熒光：高壓汞燈發(fā)射，入射光波長（）355nm，散射夾角（）為90 激光：氦氖燈，=663nm，=1535 碘鎢光：碘鎢燈，=400500nm，=70,免疫散射比濁儀器,得靈、貝克曼等 美國THE BIDING SITE MINIPEPH 德國美創(chuàng)- D-dimer 武漢艾爾夫 深圳國賽,特定蛋白測定的臨床意義,D-二聚體（D-dimer）: 生理學(xué)背景：纖維蛋白溶解系統(tǒng)FDP 意義： 肺栓塞和深V血栓及A血栓的診斷 溶栓監(jiān)測,特定蛋白測定的臨床意義,血液中含有多種功能蛋白，如載體蛋白、免疫球蛋白（抗體）、酶、凝血因子等，其含量變化通常與多種疾病有密切關(guān)系。 C反應(yīng)蛋白 (CRP) 、免疫球蛋白及亞類、補(bǔ)體C3和C4、抗鏈球溶血素O (ASO) 、類風(fēng)濕因子 (RF)、前白蛋白 (Prealbumin) 、白蛋白 (Albumin) 、微白蛋白 (Microalbumin) 2微球蛋白(2Microglobulin) 、 1抗胰蛋白酶 (1AT) 、銅藍(lán)蛋白 (Caeruloplasmin) 、結(jié)合珠蛋白 (Haptoglobin) 、轉(zhuǎn)鐵蛋白 (Transferrin) 、載脂蛋白A （APO-A1） 、載脂蛋白B （APO-B）等。,C反應(yīng)蛋白 (CRP)-超敏CRP,是一種由肝細(xì)胞合成的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，是在炎癥和組織壞死疾病的急性期出現(xiàn)于病人血清中的一種糖蛋白，它能與肺炎雙球菌的莢膜成分C-多糖蛋白質(zhì)起反應(yīng)，故稱為C-反應(yīng)蛋白。具有激活補(bǔ)體和促進(jìn)粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞吞噬作用。 正常值為：800-8000g/L。 CRP是急性時(shí)相反應(yīng)的一個(gè)極為靈敏的指標(biāo)，血漿中CRP濃度在急性心肌梗死、創(chuàng)傷、感染、炎癥、外科手術(shù)、腫癌浸潤時(shí)迅速顯著地增高，可達(dá)正常水平的2000倍。結(jié)合臨床病史，有助于隨訪病程。 特別在炎癥過程中，CRP可作為風(fēng)濕病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病等的隨訪指標(biāo)。 細(xì)菌和病毒感染鑒別，細(xì)菌感染急性期一般均增高，病毒感染多數(shù)不變。 國外有研究認(rèn)為，CRP是引發(fā)心臟病的最強(qiáng)烈的危險(xiǎn)因素，其危險(xiǎn)程度是血液中過量膽固醇的2倍。CRP含量高的人患高血壓的危險(xiǎn)率比膽固醇高的人大1倍。如果炎癥和過高的膽固醇同時(shí)出現(xiàn)的話，那么患心臟病和中風(fēng)的危險(xiǎn)率比正常的人要高出9倍。由此可見，CRP含量高和患心臟病呈正相關(guān)。 此外，最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，血中高濃度的CRP是結(jié)腸癌發(fā)病的危險(xiǎn)因素，并認(rèn)為CRP可能是結(jié)腸癌的一個(gè)早期標(biāo)志物。,免疫球蛋白及亞類,其濃度在不同年齡段有所差異，在某些疾病情況下，這些指標(biāo)的濃度將出現(xiàn)升高或降低，從而具有疾病診斷價(jià)值。 IgG：正常情況下，臍血7.617gL， 新生兒7.014.8gL， 0.56月310.0gL ，6月2歲512gL ，26歲513gL， 612歲716.5gL ，1216歲715.5gL ，成人616gL。 在慢性肝病，亞急性或慢性感染，結(jié)締組織疾病，骨髓瘤，無癥狀性單克隆病等，出現(xiàn)增高；在遺傳性或獲得性抗體缺乏癥，混合性免疫缺陷綜合癥，選擇性缺乏癥，蛋白丟失性腸病，腎病綜合癥，強(qiáng)直性肌營養(yǎng)不良，免疫抑制劑治療等降低。,免疫球蛋白及亞類,IgA：正常情況下，臍血050mgL，新生兒022mgL，0.56月3820mgL，7月2歲1401080mgL，26歲2301900mgL，612歲2902700mgL，1216歲8102320mgL，成人7603900mgL。 在慢性肝病，亞急性或慢性感染性疾?。ㄈ缃Y(jié)核、真菌感染等），自身免疫性疾病（如、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎），囊性纖維化，家族性嗜中性粒細(xì)胞減少癥，乳腺癌，腎病，骨髓瘤等情況下增高；在遺傳性或獲得性抗體缺乏癥，免疫缺陷病，選擇性缺乏癥，無球蛋白血癥，蛋白丟失性腸病，燒傷等?？箍贵w現(xiàn)象，免疫抑制劑治療，妊娠后期等情況下降低。,免疫球蛋白及亞類,IgM：正常情況下，臍血40240mgL，新生兒50300mgL，0.56月1501090mgL，6月2歲4302390mgL，26歲5001990mgL，612歲5002600mgL，1216歲4502400mgL，成人4003450mgL。 在胎兒宮內(nèi)感染，新生兒癥群，慢性或亞急性感染，瘧疾，傳染性單核細(xì)胞增多癥，支原體肺炎，肝病，結(jié)締組織疾病，巨球蛋白血癥，無癥狀性單克隆病等情況下增高。在遺傳性或獲得性抗體缺乏癥，混合性免疫缺陷綜合癥，選擇性缺乏癥，蛋白丟失性腸病，燒傷，抗抗體綜合癥（混合性冷球蛋白血癥），免疫抑制劑治療等情況下降低。,IgG和IgA亞類,IgG有四種不同的亞類，IgA有兩種不同的亞類。每種亞類具有不同的功能，其含量過低或過高或者缺陷會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的免疫功能低下，造成相應(yīng)的疾病的發(fā)生。 兒童常見的反復(fù)呼吸道感染、經(jīng)常腹瀉、發(fā)育遲緩等癥狀以及經(jīng)常發(fā)生的許多呼吸道疾病如中耳炎、鼻竇炎、肺炎、氣管炎、慢性阻塞性肺疾病、支氣管擴(kuò)張以及哮喘等疾病，往往都與IgG或IgA亞類缺陷有關(guān)。,補(bǔ)體C3和C4,正常情況下，C3(1C-球蛋白) 8001550mgL，C4(1E-球蛋白) 130370mgL，血液補(bǔ)體含量與活度在許多病理情況下都會(huì)發(fā)生變化。所以，臨床上應(yīng)動(dòng)態(tài)觀察補(bǔ)體水平的變化。 補(bǔ)體含量下降并不一定代表免疫功能障礙或免疫缺陷，因?yàn)樵谌毖?、凝固性壞死和中毒性壞死時(shí)，組織能釋放較多的蛋白分解酶，導(dǎo)致補(bǔ)體溶血活度和補(bǔ)體組分的下降。 血補(bǔ)體濃度升高：見于各種炎癥性疾病及阻塞性黃疸，急性心肌梗塞，潰瘍性結(jié)腸炎，糖尿病，急性痛風(fēng)，急性和急性甲狀腺炎，急性風(fēng)濕熱，皮肌炎，多發(fā)性肌炎，混合性結(jié)締組織病，結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎等。,抗鏈球溶血素O (ASO),A群溶血性鏈球菌的代謝產(chǎn)物刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體。 ASO升高見于A群溶血性鏈球菌感染及感染后免疫反應(yīng)所致的疾病，如：感染性心內(nèi)膜炎、扁桃體炎、風(fēng)濕熱、鏈球菌感染后急性腎小球腎炎。ASO在溶血性鏈球菌感染后一周開始升高，46周達(dá)高峰，并持續(xù)數(shù)月，故ASO增高提示曾有溶血性鏈球菌感染，但不一定是近期感染。鏈球菌感染后ASO動(dòng)態(tài)升高，結(jié)合CRP升高及血沉陽性，有利于風(fēng)濕熱的診斷。 高膽固醇血癥、巨球蛋白血癥、多發(fā)行骨髓瘤患者，ASO也可升高。,類風(fēng)濕因子 (RF),RF是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體，RF可分為IgM、IgG、IgA、IgE四型。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者的陽性率為7080，其中尤其以病變廣泛、病情嚴(yán)重、病程長、活動(dòng)期及有關(guān)節(jié)外病變者的陽性率高、滴度高并長久存在。 除類風(fēng)濕外，還見于正常人和其他疾病，例如正常人，尤其老年人，陽性率占；各種感染性疾病如乙肝、結(jié)核病、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎和慢性支氣管炎等；結(jié)締組織病如紅斑狼瘡、干燥綜合征、皮肌炎、血管炎、硬皮病、預(yù)防接種后以及某些惡性疾病。在這些疾病中，的陽性率可達(dá)。因此，在RA的診斷上，一般認(rèn)為RF只有參考價(jià)值而無特異性診斷價(jià)值。,前白蛋白 (Prealbumin),為肝內(nèi)合成的糖蛋白，血中半壽期極短，故可作為營養(yǎng)不良的診斷、檢測及肝病的診斷。作為早期肝功能操作指示，比ALT特異，比白蛋白敏感。 正常參考值范圍：成年男女為250-400mg/L ；兒童 125-200mg/L PA是負(fù)性急性時(shí)相蛋白。在炎癥和惡病質(zhì)（如惡性腫瘤等）中，CRP和酸性糖蛋白升高時(shí)，PA則可見迅速降低。如果前白蛋白繼續(xù)保持低水平或進(jìn)一步降低，提示預(yù)后不良。 在腸道或腎臟的耗蛋白性病變時(shí)，血清PA濃度也會(huì)相隨降低。 何杰金氏及青春發(fā)育期少年，其血清PA 濃度升高較顯著。,白蛋白 (Albumin),正常值：35-55g/L 高：脫水和血液濃縮。降低：白蛋白合成障礙：營養(yǎng)不良、肝臟疾病、慢性消化道疾病。白蛋白消耗或丟失過多：消耗性疾病、惡病質(zhì)、腎病綜合征、急性大出血、嚴(yán)重?zé)齻?、腹水形成等。其他：妊娠晚期、遺傳性無白蛋白血癥。,2微球蛋白(2Microglobulin),2微球蛋白是體內(nèi)有核細(xì)胞產(chǎn)生的一種小分子球蛋白。正常人血液中2微球蛋白濃度很低。 血液中升高：腎小球?yàn)V過功能下降。炎癥或腫瘤。 尿液中升高：腎小管受損時(shí)，對2微球蛋白2微球蛋白的重吸收減少，尿液中2微球蛋白排出增加，測定時(shí)升高。,1抗胰蛋白酶 (1AT),1-抗胰蛋白酶是一種特異性抑制絲氨酸蛋白水解酶的蛋白酶抑制物。血液中正常值：23g/L。 缺陷通常有遺傳原因。濃度低于正常水平的30-40%時(shí)，肝臟和肺部疾病相關(guān)的臨床表現(xiàn)（肝硬化、支氣管擴(kuò)張、胰腺纖維化）才會(huì)明顯出現(xiàn)。兒童通常受到肝臟疾病影響，而成人更多的為肺部疾病。DIC、甲亢和十二指腸潰瘍等，血中1AT可減少。 升高大多數(shù)是由于感染或炎癥的急性期反應(yīng)引起。這種情況下，1-抗胰蛋白酶濃度較正常情況3倍升高。在妊娠和口服避孕藥后，1-抗胰蛋白酶也可升高。,銅藍(lán)蛋白 (Caeruloplasmin，CER),屬2糖蛋白，是鐵氧化還原酶，又稱鐵氧化酶，由肝臟合成，含68銅原子而呈藍(lán)色，故名銅藍(lán)蛋白。 升高者有妊娠、服雌性激素和甲狀腺素者、壞死、傳染（新近感染的一種指標(biāo)）。惡性腫瘤、矽肺等。CER是塵肺最靈敏的早期診斷指標(biāo)，早于肺部X線片的改變。 降低者有腎病綜合癥，低蛋白血癥（營養(yǎng)不良，胃腸道患者）、急性肝炎、嚴(yán)重肝損傷、多發(fā)性硬化等。Wilson氏?。ǜ胃]狀核變性，是一種遺傳性病變）CRE明顯減少。,轉(zhuǎn)鐵蛋白 (Transferrin，Tf),Tf是一種能結(jié)合三價(jià)鐵的糖蛋白。是血漿中主要的含鐵蛋白質(zhì)，代表了機(jī)體鐵的貯量。它負(fù)責(zé)運(yùn)輸由消化道吸收的鐵和由紅細(xì)胞降介釋放的鐵。 正常值：成人為2.20-4.0g/L；新生兒為1.30-2.75g/L 降低可見于如下疾患:急性肝炎(開始;后；)肝病(重癥肝炎肝硬化慢性肝慢遷肝急肝),腎病綜合癥、蛋白丟失癥、甲狀腺疾患。 增高可見于:妊娠、缺鐵性貧血、急肝早期。,結(jié)合珠蛋白 (Haptoglobin),結(jié)合珠蛋白又稱觸珠蛋白，主要由肝臟合成。 降低：血管內(nèi)溶血時(shí)，結(jié)合珠蛋白與紅細(xì)胞溶解釋放出來的血紅蛋白相結(jié)合，結(jié)合珠蛋白/血紅蛋白復(fù)合體很快就會(huì)從血中清除，從而導(dǎo)致結(jié)合珠蛋白濃度下降，嚴(yán)重溶血甚至可消耗光結(jié)合珠蛋白，各種溶血時(shí)血清結(jié)合珠蛋白均有降低，以血管內(nèi)