70%啶蟲脒水乳劑在不同區(qū)域煙草上殘留量的研究畢業(yè)論文.doc

湖 南 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué)全日制普通本科生畢業(yè)論文(設(shè)計(jì)) 70%啶蟲脒水乳劑在不同區(qū)域煙草上殘留量的研究 study on the residual quantity of 70% acetamiprid water emulsion in different parts of tobaccothe學(xué)生姓名：石建銀 學(xué) 號(hào)：201140463131年級(jí)專業(yè)及班級(jí)：2011級(jí)環(huán)境科學(xué)（一）班指導(dǎo)老師及職稱：廖嬋娟講師 學(xué) 院：資源環(huán)境學(xué)院 湖南長(zhǎng)沙提交日期：2015年05月 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)全日制普通本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠(chéng) 信 聲 明 本人鄭重聲明：所呈交的本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是本人在指導(dǎo)老師的指導(dǎo)下，進(jìn)行研究工作所取得的成果，成果不存在知識(shí)產(chǎn)權(quán)爭(zhēng)議。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體在文中均作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。 畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）作者簽名： 年 月 日 目 錄摘 要1關(guān)鍵詞11 前言21.1 啶蟲脒的簡(jiǎn)介21.2 研究目的和意義31.2.1 研究目的31.2.2 研究意義41.3 研究?jī)?nèi)容和預(yù)期成果51.3.1 主要研究?jī)?nèi)容51.3.2 預(yù)期研究成果52 材料與方法52.1.1 主要儀器52.1.2 主要試劑52.2 田間消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)設(shè)計(jì)62.3 室內(nèi)分析實(shí)驗(yàn)62.3.1 70%啶蟲脒標(biāo)液的配制62.3.2 樣品前處理方法72.3.3 高效液相色譜條件72.3.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制72.3.5 添加回收率試驗(yàn)83 提取與凈化方法83.1 提取劑的選擇83.2 提取方法與時(shí)間的選擇83.2.1 提取方法83.2.2 提取時(shí)間93.3 提取溶劑用量的選擇93.4 樣品凈化93.5 弗羅里硅土用量93.6 洗脫劑及用量94 結(jié)果與討論104.1 檢測(cè)方法的確定104.1.1 色譜柱的選擇104.1.2 流速的確定104.1.3 柱溫的選擇104.1.4 停止和保留時(shí)間的設(shè)定104.1.5 波長(zhǎng)的確定104.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線114.3 精確度與精密度114.5 啶蟲脒在煙葉中的消解動(dòng)態(tài)124.5.1 煙葉的消解動(dòng)態(tài)結(jié)果124.5.2 煙草土壤的消解動(dòng)態(tài)結(jié)果145 結(jié)論與討論165.1 總結(jié)165.2 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)17參考文獻(xiàn)17致謝1970%啶蟲脒水乳劑在不同區(qū)域煙草上殘留量的研究 學(xué) 生：石建銀 指導(dǎo)老師：廖嬋娟(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，長(zhǎng)沙 410128) 摘 要： 本文研究并建立啶蟲脒在煙草和土壤中的殘留分析測(cè)定方法，為了了解70%啶蟲脒水乳劑在煙草種植用地施用后其有效成分啶蟲脒在煙草和土壤中的殘留消解行為，全面準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)其生態(tài)環(huán)境的安全性，為其科學(xué)、合理性使用提供科學(xué)依據(jù)。本文采用乙腈提取法提取，經(jīng)弗羅里硅土層析柱凈化，高效液相色譜（hplc法）法檢測(cè)，外標(biāo)法定量。當(dāng)添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.011.00mg/kg時(shí)，啶蟲脒在煙草中的回收率為94.81%99.36%；在煙草土壤中的回收率為81.05%-110.38%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%。該方法的靈敏度、準(zhǔn)確度及重現(xiàn)性較好，能滿足農(nóng)藥殘留分析與檢測(cè)的技術(shù)要求。研究比較了啶蟲脒在湖南長(zhǎng)沙、山東青島兩個(gè)地區(qū)煙草和煙草土壤中的消解動(dòng)態(tài)，結(jié)果表明啶蟲脒在煙草和煙草土壤中的消解動(dòng)態(tài)規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，半衰期為煙草4.5-6.8d;煙草土壤3.8-9.6d，均小于30d。 關(guān)鍵詞：煙草；啶蟲脒；高效液相色譜法；層析柱凈化法；半衰期study on the residual quantity of 70% acetamiprid water emulsion in different parts of tobacconstudent: shi jianyininstructor: liao chanjuan(hunan agricultural university resources and environment institute, changsha 410128) abstract: in this paper, the analysis and the establishment of acetamiprid residues in tobacco and soil analysis, in order to understand 70% acetamiprid aqueous emulsion in tobacco planting after application of the effective components of acetamiprid in tobacco and soil residue degradation behaviorr, comprehensively and accurately evaluate the security of its ecological environment, and provide scientific basis for its scientific and rational use.in this paper, the extraction of acetonitrile was extracted by acetonitrile extraction, and the purification of silica soil column in the process of analysis, hplc (hplc) method and quantitative analysis of external standard.when adding mass fraction of 0.01 - 1.00 mg / kg and acetamiprid in tobacco recovery rate was 94.81% - 99.36%; in tobacco soil recovery rate for 81.05%-110.38% relative standard deviation of were less than 5%.the sensitivity, accuracy and reproducibility of the method are good, and can meet the technical requirements for pesticide residues analysis and detection.comparative study on the degradation dynamics of acetamiprid in changsha, hunan, shandong and qingdao two regions of tobacco and tobacco soil. the results showed that acetamiprid in tobacco and tobacco soil degradation dynamics conforms to the first-order kinetic equation, the half-life for tobacco 4.5-6.8d; tobacco soil 3.8-9.6d, were less then 30 day. keywords: tobacco; acetamiprid; hplc; purification chromatography; half-life 1 前言1.1啶蟲脒簡(jiǎn)介 中文通用名：啶蟲脒英文通用名：acetamiprid化學(xué)名稱：n-(n-氰基-乙亞胺基)-n-甲基-2-氯吡啶-5-甲胺分子式：c10h11cln4分子結(jié)構(gòu):密度;：1.17g/cm3沸點(diǎn)：354.40cat760mmhg 分子量：222.68農(nóng)藥有效成份類別：殺蟲劑理化性質(zhì)：外觀為白色晶體，熔點(diǎn)為101.0103.3，蒸汽壓1.3310-6帕(25)。25時(shí) 在水中的溶解度4200毫升/升，能溶于丙酮、甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氫呋喃等。在ph=7的水中穩(wěn)定，ph=9時(shí)，于45逐漸水解，在日光下穩(wěn)定。毒性： 大鼠急性口服ld50：雄217mg/kg，雌146 mg/kg；小鼠：雄198mg/kg，雌184 mg/kg； 大鼠急性經(jīng)皮ld50：雄、雌2000mg/kg性質(zhì)與作用：啶蟲脒屬硝基亞甲基雜環(huán)類化合物，是一種新型殺蟲劑，作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)突觸部位的煙堿乙酰膽堿受體，干擾昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)的刺激傳導(dǎo)，引起神經(jīng)系統(tǒng)通路阻塞，造成神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿在突觸部位的積累，從而導(dǎo)致昆蟲麻痹，最終死亡。天達(dá)藥業(yè)植保公司開發(fā)的3啶蟲脒乳油，具有觸殺、胃毒和較強(qiáng)的滲透作用，殺蟲速效，用量少、活性高、殺蟲譜廣、持效期長(zhǎng)達(dá)20天左右，對(duì)環(huán)境相容性好等。由于其作用機(jī)理與常規(guī)殺蟲劑不同，所以對(duì)有機(jī)磷、氨基甲酸酯類及擬除蟲菊酯類產(chǎn)生抗性的害蟲有特效。對(duì)人畜低毒，對(duì)天敵殺傷力小，對(duì)魚毒性較低，對(duì)蜜蜂影響小，適用于防治果樹、蔬菜等多種作物上的半翅目害蟲；用顆粒劑做土壤處理，可防治地下害蟲。使用方法：在50-100mg/l的濃度下,可有效地防治棉蚜,菜蚜、桃小食心蟲等,以500mg/l濃度施藥可防治光潛蛾、桔潛蛾以及梨小食心蟲等,并可殺卵。其它說(shuō)明: 是一種新型廣譜且具有一定殺螨活性的殺蟲劑，其作用方式為土壤和枝葉的系統(tǒng)殺蟲劑。廣泛用于水稻，尤其蔬菜、果樹、茶葉的蚜蟲、飛虱、薊馬、鱗翅目等害蟲的防治，防效在90%以上。1.2 研究目的和意義1.2.1 研究目的 隨著農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，化學(xué)農(nóng)藥的品種和數(shù)量不斷增加，化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)品已成為防治病蟲害的主要手段。近年來(lái)，在糧食、蔬菜及水果的種植過(guò)程中由于很多農(nóng)戶忽視農(nóng)藥的正確、合理使用，農(nóng)藥污染問(wèn)題時(shí)有發(fā)生，農(nóng)藥殘留量超標(biāo)相當(dāng)嚴(yán)重，并有逐年加劇的趨勢(shì)1。過(guò)去由于大量高毒、高污染、難降解農(nóng)藥的生產(chǎn)和使用，導(dǎo)致了大量的環(huán)境污染和食品安全問(wèn)題，為了防止這樣的現(xiàn)象繼續(xù)蔓延，開發(fā)新型低毒、低污染農(nóng)藥產(chǎn)品已經(jīng)是迫在眉睫。目前關(guān)于啶蟲脒在蔬菜、瓜果、糧食等食品生產(chǎn)活動(dòng)的殘留量測(cè)定研究十分活躍，同時(shí)也取得了相應(yīng)的研究成果，但是研究不同用藥劑量和不同使用倍數(shù)及制劑施用狀態(tài)2,3,在煙草上的殘留量報(bào)道相對(duì)較少。而且世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（fao/who）至今未對(duì)煙草中啶蟲脒的最大允許殘留量（mrl）作出規(guī)定4,5，6，目前還沒(méi)有相關(guān)的監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和限量的標(biāo)準(zhǔn)作為參照。因此本文研究的目的就是為了找到合適的高毒、高污染農(nóng)藥代替品7,8，研究其對(duì)環(huán)境的影響情況、在煙草中的殘留情況和降解機(jī)制，以及為制定啶蟲脒在煙草中最大允許殘留量標(biāo)準(zhǔn)作參照，同時(shí)對(duì)煙卷產(chǎn)品的質(zhì)量提供保證，從而保護(hù)煙卷產(chǎn)品消費(fèi)者的人身安全。1.2.2 研究意義 自2007年1月1日起我國(guó)全國(guó)禁用甲胺磷、對(duì)硫磷等五種高毒農(nóng)藥后，毒性較低、相對(duì)危害較小、效果較為理想的煙堿類殺蟲劑9,10啶蟲脒作為高毒高污染農(nóng)藥的代替品開始引起社會(huì)廣泛的關(guān)注，所以研究啶蟲脒在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的運(yùn)用具有重大的意義。啶蟲脒，是一種新型殺蟲劑11，作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)突觸部位的煙堿乙酰膽堿受體，干擾昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)的刺激傳導(dǎo)，引起神經(jīng)系統(tǒng)通路阻塞，造成神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿在突觸部位的積累，從而導(dǎo)致昆蟲麻痹，最終死亡。由于其作用機(jī)理與常規(guī)殺蟲劑不同，所以對(duì)有機(jī)磷、氨基甲酸酯類及擬除蟲菊酯類產(chǎn)生抗性的害蟲有特效。對(duì)人畜低毒，對(duì)天敵殺傷力小，對(duì)魚類毒性較低，對(duì)蜜蜂影響小，具有廣譜、速效、低毒、高活性、殺卵等特性，適用于防治果樹、蔬菜等多種作物上的半翅目害蟲12,13,14,，特別是在煙草、黃瓜等作物上的蚜蟲清除運(yùn)用的比較廣泛；另外用顆粒劑做土壤處理，可防治地下害蟲，且對(duì)環(huán)境的相容性好15，16,不易引起環(huán)境污染。研究70%啶蟲脒在煙草上的殘留對(duì)于保證煙卷產(chǎn)品質(zhì)量安全具有重要的意義17。由于目前人們對(duì)煙卷產(chǎn)品的消費(fèi)更重要的是關(guān)注它的品牌而缺少對(duì)其生產(chǎn)和制作的了解，因此人們的眼光只局限于對(duì)產(chǎn)品性能的好壞，而農(nóng)藥在煙草上使用的安全問(wèn)題不像人們對(duì)于食品安全那樣了解的深入。以前人們?cè)跓煵萆鲜褂玫霓r(nóng)藥以高毒的甲胺磷、ddt等高效殺蟲劑為主，使用這樣的農(nóng)藥對(duì)生產(chǎn)戶來(lái)說(shuō)表面上沒(méi)有太大的關(guān)系，但是甲胺磷高毒、難降解、對(duì)環(huán)境污染大、對(duì)其他生物的安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅，同時(shí)對(duì)人類消費(fèi)者也是一種潛在的安全危機(jī)18。在效益沒(méi)有得到很大的提高的同時(shí)給我們的生產(chǎn)環(huán)境帶來(lái)了嚴(yán)重的危害，這不符合新時(shí)代的可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略思想，更違背了人們對(duì)于食品安全問(wèn)題的關(guān)注意愿，在這種情況下研究和開發(fā)高效低毒生態(tài)的農(nóng)藥替代品是非常有必要的，這種運(yùn)用將來(lái)可能不僅僅局限于在煙草上的使用，還可以發(fā)展到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的各個(gè)方面，只不過(guò)在這里是以70%啶蟲脒在煙草上殘留量測(cè)定作為主要對(duì)象來(lái)研究的。研究測(cè)定70%啶蟲脒在煙草上的殘留，不僅對(duì)煙草生產(chǎn)戶在煙草生產(chǎn)過(guò)程中能幫助他們科學(xué)合理施藥、降低農(nóng)藥使用成本，更能提高煙草生產(chǎn)產(chǎn)量和質(zhì)量，獲得更高的生產(chǎn)收益19。對(duì)于消費(fèi)者而言，可以保證他們獲得高質(zhì)量的煙卷產(chǎn)品，對(duì)保障消費(fèi)者的人生安全有重大意義。 1.3 研究?jī)?nèi)容和成果1.3.1 主要研究?jī)?nèi)容 （1）通過(guò)添加回收率實(shí)驗(yàn)，研究并建立70%啶蟲脒在不同地域煙草和煙草土壤中的殘留量進(jìn)行有效分析與檢測(cè)的方法，為后續(xù)研究提供方法支撐。 （2）通過(guò)田間實(shí)驗(yàn)研究70%啶蟲脒水乳劑施用后其有效成分在不同地區(qū)煙草和土壤的殘留消解動(dòng)態(tài)，并通過(guò)70%啶蟲脒在煙草和土壤中的最終殘留量，全面正確地進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及環(huán)境安全評(píng)價(jià)，為70%啶蟲脒的生態(tài)系統(tǒng)安全性提供科學(xué)依據(jù)。1.3.2 預(yù)期研究成果建立一種最低檢出濃度和添加回收率能滿足農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法要求，穩(wěn)定準(zhǔn)確可靠， 適合國(guó)內(nèi)一般實(shí)驗(yàn)室條件的煙草樣品中70%啶蟲脒的殘留量分析測(cè)定方法，通過(guò)對(duì)比性的研究70%啶蟲脒水乳劑在我國(guó)不同地區(qū)煙草及其土壤中的降解規(guī)律，為這種農(nóng)藥使用后對(duì)環(huán)境造成的影響進(jìn)行了量化評(píng)估，并為70%啶蟲脒在蔬菜、瓜果、煙草產(chǎn)品生產(chǎn)中的安全合理使用提供科學(xué)依據(jù)。2 材料與方法2.1 主要儀器和試劑2.1.1主要儀器 hp-1100或1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）紫外檢測(cè)器 ； column xb c18色譜柱（4.6m150 mm，5m） ； kq3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）； cca-20低溫冷卻水循環(huán)泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）； re-2000a型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)； shz-d(iii)循環(huán)水式真空泵(浙江黃巖求精真空泵廠)； shy-2as水浴恒溫振蕩機(jī)（江蘇環(huán)保儀器廠）； pyx-dhg-9101-1sa電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（廣東韶關(guān)科力實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）； tp-220a電子天平（湘儀天平儀器設(shè)備有限公司）； 梨形抽濾瓶，布氏漏斗，具塞磨口三角瓶等實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器設(shè)備。2.1.2 主要試劑 啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品：純度97.3%，由興農(nóng)藥業(yè)（中國(guó)）有限公司提供； 乙腈（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）； 乙腈（色譜純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）； 甲醇（色譜純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）； 甲醇（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）； 水（純凈水，娃哈哈有限責(zé)任公司）； 二氯甲烷（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）； 石油醚（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）； 無(wú)水硫酸鈉（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）； 氯化鈉（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）；2.2 田間消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)設(shè)計(jì) 按農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則要求設(shè)試驗(yàn)小區(qū)，小區(qū)面積30m2，重復(fù)3次，隨機(jī)排列，小區(qū)間設(shè)保護(hù)帶，另設(shè)對(duì)照小區(qū)。70%啶蟲脒水乳劑在煙草上防治病蟲，推薦使用制劑量：在蚜蟲發(fā)生初盛期，用4000-5000倍70%啶蟲脒水乳油噴霧劑，防治效果良好。施藥方法：兌水噴霧施藥，施藥次數(shù)2次，施藥間隔期5-7天。另設(shè)清水空白對(duì)照，處理間設(shè)保護(hù)帶。 藥劑為70%啶蟲脒水乳劑，試驗(yàn)作物為煙草，試驗(yàn)點(diǎn)選在湖南長(zhǎng)沙、山東青島、，每個(gè)小區(qū)為30 m2,每個(gè)處理重復(fù)3次。待施藥后2h、1d、3d、5d、7d、10d、14d、21d、28d、35d、42d隨機(jī)在消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)1012個(gè)采樣點(diǎn)采集1kg生長(zhǎng)正常、無(wú)病害的煙草植株（小區(qū)邊行和每行距離兩端0.5m內(nèi)不采樣），采集部位遍及植株上中下部，切碎、混勻后采用四分法留樣300g，裝入封口塑料袋中，粘好標(biāo)簽，貯存于冰柜中保存。2.3 室內(nèi)分析實(shí)驗(yàn)2.3.1 70%啶蟲脒標(biāo)液的配制用萬(wàn)分之一分析天平準(zhǔn)確稱取啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品0.0514 g（原藥濃度97.3%）于100ml容量瓶中，用丙酮定容至刻度，搖勻備用，配制成啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)貯備液，保存于04冰箱中，用時(shí)稀釋至相應(yīng)濃度。2.3.2 樣品前處理方法振蕩提?。簾熑~解凍，備用。稱取10g鮮煙葉樣品，置于干燥的250ml具塞三角瓶中，分別在三角瓶外貼好標(biāo)簽，然后向具塞三角瓶中加入50ml乙腈溶劑，蓋緊瓶塞，將其放入恒溫振蕩箱中，恒溫振蕩60min，待冷卻至常溫。抽濾：將上述處理樣品用布式漏斗減壓抽濾。用量筒量取30ml乙腈溶劑，并用膠頭滴管吸取洗滌殘?jiān)统闉V瓶?jī)?nèi)壁殘液23次，待殘?jiān)赏Ｖ钩闉V，用250ml具塞三角瓶收集濾液。萃?。簩⑸鲜鰳悠忿D(zhuǎn)移至裝有20ml石油醚的250ml分液漏斗中，搖晃混勻之后，靜置10分鐘，重復(fù)三次（前兩次用10ml石油醚萃取，第三次用20ml石油醚萃?。?。然后用250ml具塞三角瓶取全部下清液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器上于45濃縮致至近干。過(guò)柱凈化：待樣品旋干冷卻后，轉(zhuǎn)至填裝有無(wú)水硫酸鈉和5g弗羅里硅土（中間為弗羅里硅土、底部和頂部各為2cm左右的無(wú)水硫酸鈉）的層析柱中凈化。定容：用250ml具塞三角瓶收取凈化液，轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，于45濃縮至近干。待冷卻后，用2.5ml色譜甲醇定容搖勻，冷藏待測(cè)。2.3.3 高效液相色譜條件 hp-1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）紫外檢測(cè)器；色譜柱為：column xb c18色譜柱（4.6m150 mm，5m）；進(jìn)樣量10l；柱溫：30；流動(dòng)相：a水（緩沖液為色譜甲醇）-b甲醇（體積比45：55）；流速0.5ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；保留時(shí)間：10min2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制采用標(biāo)樣加入法定性、外標(biāo)法定量。首先準(zhǔn)確稱取啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)樣品0.0514g，用丙酮溶解并稀釋定容至100ml，即得到質(zhì)量濃度為500 mg/l的啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后采用梯度稀釋法配制啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度分別為0、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/l的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，并在上述高效液相色譜檢測(cè)條件下檢測(cè)，測(cè)定出標(biāo)準(zhǔn)工作溶液所對(duì)應(yīng)色譜峰的峰面積；再分別以啶蟲脒的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、相應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。2.3.5 添加回收率試驗(yàn)分別加入一定體積的啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)工作溶液至煙葉和煙草土壤的空白樣品中，使啶蟲脒質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.01、0.50、1.00mg/kg，充分搖勻后靜置30min，用2.3.2和2.3.3節(jié)的方法進(jìn)行殘留分析與檢測(cè)，分別重復(fù)5次，最后計(jì)算得出啶蟲脒在煙葉樣品中的添加回收率。3 提取與凈化方法3.1 提取劑的選擇根據(jù)啶蟲脒的分子結(jié)構(gòu)及其理化特性，分別選用乙腈，環(huán)己烷，異丙醇為提取溶劑。取已備好的空白鮮煙葉樣品 10.00g 于具塞三角瓶中，加入適量的啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液使煙葉中的添加濃度為1.0mg/kg。分別加入乙腈，環(huán)己烷，異丙醇各 50ml，振蕩60min，減壓抽濾，濾渣用 30ml 提取溶劑洗滌 23 次，合并濾液轉(zhuǎn)移至裝有20ml石油醚的250ml分液漏斗中。搖晃混勻之后，靜置10分鐘，然后用250ml具塞三角瓶取出全部的下清液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器上濃縮致至近干，再過(guò)柱、凈化、旋干，用2.5ml色譜甲醇定容，搖晃靜置一會(huì)，待hplc檢測(cè)。根據(jù)它們的提取效果來(lái)選擇合適的提取溶劑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用乙腈作為提取劑最佳，雜質(zhì)較少且穩(wěn)定，回收率能達(dá)到殘留分析的技術(shù)要求。結(jié)果見表1。表1不同提取溶劑對(duì)回收率的影響table1 the influence of different extraction agents for recovrey提取溶劑環(huán)己烷異丙醇乙腈回收率32.5103.8101.5由表1中可以看出，環(huán)己烷提取效率較差，異丙醇和乙腈均能完全提取出煙葉中的啶蟲脒,但使用異丙醇提取時(shí)，提取液雜質(zhì)較多，不利于實(shí)驗(yàn)后續(xù)分析及影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故提取劑選用乙腈提取。3.2 提取方法與時(shí)間的選擇3.2.1提取方法煙葉樣品分別采用了超聲提取法和恒溫振蕩法。按照3.1的處理方法對(duì)添加相同水平濃度的煙葉樣品進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2.表2 不同提取方式的回收率table2 differet ways of extraction recovery提取方法超聲波法恒溫振蕩法提取時(shí)間/min回收率%3025.86022.0由表2可以看出超聲提取法雖然速度快，但是在實(shí)際操作過(guò)程中，其操作不是很方便，不適合批量操作；而恒溫振蕩法不但便于批量操作并且損失較小，提取效果相差不多，故選擇恒溫振蕩法。3.2.2提取時(shí)間對(duì)煙葉樣品設(shè)置 30min、60min、120min 三種提取時(shí)間，啶蟲脒樣品在這段時(shí)間內(nèi)的提取率隨振蕩時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，但在120min時(shí)啶蟲脒提取率的增長(zhǎng)趨勢(shì)不再明顯，所以選擇合適的提取時(shí)間為60min。3.3 提取溶劑用量的選擇根據(jù) 3.1 確定的提取溶劑，向煙葉樣品中分別加入30ml、50ml、70ml、100ml 的提取溶劑，其余步驟同 3.1。根據(jù)比較不同提取溶劑用量的提取效果，選擇合適的提取溶劑用量，結(jié)果顯示用50ml提取溶劑的提取效果最好。3.4 樣品凈化采用石油醚萃取法對(duì)樣品進(jìn)行凈化。將2.3.2樣品前處理方法中抽濾后的濾液轉(zhuǎn)移至裝有20ml石油醚的250ml的分液漏斗中，搖晃混勻后，靜置10min，分液漏斗中分別是上層為石油醚，下層為乙腈。此法能較好的除去濾液中的水溶性雜質(zhì)，能夠達(dá)到快速凈化的目的，且方法簡(jiǎn)便、快速，分離效果好。3.5 弗羅里硅土用量按照2.3.2樣品前處理方法處理添加相同水平濃度的煙葉樣品各取10ml樣品提取液轉(zhuǎn)移到分別裝有2g、5g、10g的層析柱中，用二氯甲烷-甲醇（體積比9:1）溶液分6次淋洗，每次10ml。收集淋洗液濃縮至近干，用色譜甲醇定容至2.5ml,進(jìn)行高效液相色譜分析。結(jié)果表明選用5g弗羅里硅土?xí)r凈化效果較好，回收率也搞高，可滿足凈化煙葉樣品的要求，故實(shí)驗(yàn)選用5g弗羅里硅土凈化樣品。3.6 洗脫溶劑及用量分別選用環(huán)己烷-異丙醇（體積比9:1）、二錄甲烷-甲醇（體積比9:1）、乙腈為洗脫劑，按照2.3.2方法所述，添加相同濃度水平的樣品進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，二氯甲烷-甲醇（體積比9:1）能洗脫完全，而且沒(méi)有其他雜質(zhì)的影響，效果較好。故用二氯甲烷-甲醇（體積比9:1）作洗脫劑，并且在試驗(yàn)中當(dāng)洗脫劑的用量為60ml是洗脫效果是最好的，所以洗脫劑的用量為60ml。4 結(jié)果與討論4.1 檢測(cè)方法的確定目前啶蟲脒原藥分析的方法主要有氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)（gc-ecd法）法20，21和高效液相色譜法22 （hplc法）。由于高效液相色譜法檢測(cè)的精確度較高，在本實(shí)驗(yàn)中更適用于啶蟲脒殘留分析的要求。而氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)（gc-ecd）方法達(dá)不到本實(shí)驗(yàn)所要求的精確度，因此對(duì)比得出本研究選用高效液相色譜法（hplc法）來(lái)對(duì)啶蟲脒的殘留量檢測(cè)。 4.1.1 色譜柱的選擇根據(jù)啶蟲脒極性強(qiáng)弱的特點(diǎn)，選擇column xb c18色譜柱，規(guī)格為4.6m150 mm，5m。4.1.2 流速的確定流速主要是由所定儀器條件下該藥物的靈敏度確定，若流速太小會(huì)有進(jìn)樣誤差，但流速太大會(huì)增加色譜柱的負(fù)載，導(dǎo)致柱子固定相流失加快，縮短柱子使用壽命。由于啶蟲脒的靈敏度較高，最后確定的流速0.5ml/min，同時(shí)選用流動(dòng)相模式，流動(dòng)相為a(水):b(甲醇)=45:55。4.1.3 柱溫的選擇柱溫低有利于分配，有利于組分的分離，但溫度過(guò)低，被測(cè)組分可能在柱中冷凝或者傳質(zhì)阻力增加，使色譜峰擴(kuò)張，甚至拖尾。柱溫高有利于傳質(zhì)，但柱溫過(guò)高時(shí)，分配系數(shù)變小，不利于分離。本文通過(guò)實(shí)驗(yàn)，測(cè)試了以下不同柱溫（15、30、45），結(jié)果表明：采用柱溫30時(shí)，既使物質(zhì)完全分離，又不使峰形擴(kuò)展、拖尾，故色譜柱溫度選用30。4.1.4 停止和保留時(shí)間的設(shè)定 實(shí)驗(yàn)進(jìn)樣中設(shè)定不同的停止時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生很大的影響，停止時(shí)間設(shè)定過(guò)短則不能完全確定出峰的完整性，從而得不到獨(dú)立完整的峰值，同時(shí)也會(huì)因?yàn)殡s質(zhì)的影響而形成誤差。停止時(shí)間設(shè)定過(guò)長(zhǎng)，會(huì)耽誤進(jìn)樣速度，影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程。通過(guò)與啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)液出峰時(shí)間的對(duì)比，將停止時(shí)間設(shè)定為15min可滿足要求，而在上機(jī)檢測(cè)時(shí)啶蟲脒的出峰時(shí)間在8.7min附近,能夠保證檢測(cè)到獨(dú)立完整的峰值而且能夠保證出峰圖形的美觀性，便于觀看。所以停止時(shí)間設(shè)定為15min。啶蟲脒的出峰時(shí)間為8.7min左右的時(shí)候，故保留時(shí)間為8.7min。4.1.5 波長(zhǎng)的確定根據(jù)啶蟲脒的光學(xué)性質(zhì)，通過(guò)對(duì)比調(diào)試不同波長(zhǎng)的上機(jī)檢測(cè)情況，發(fā)現(xiàn)波長(zhǎng)為254nm出時(shí)，出峰達(dá)到最佳效果，故選定波長(zhǎng)為254nm。4.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線定量分析采用外標(biāo)分析法。用已配好的濃度為 500mg/l 的啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)液，梯度稀釋配制 0、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/l 一系列啶蟲脒工作液，在上述色譜條件下依次進(jìn)樣測(cè)定，按進(jìn)樣濃度-色譜峰面積繪出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖，見圖 1。圖1 70%啶蟲脒的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線figure1 70% of acetamiprid standar working curve結(jié)果表明：啶蟲脒在 02.5mg/l范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)方程為：y162.28x -2.1064，r20.9995，線形良好，能滿足農(nóng)藥殘留分析與檢測(cè)技術(shù)方法的要求。4.3 精確度與精密度用煙葉及土壤空白樣品進(jìn)行3個(gè)濃度的添加回收率實(shí)驗(yàn)，煙葉及土壤中啶蟲脒的添加濃度分別為0.01、0.50、1.00 mg/kg，每一添加濃度重復(fù)5次，計(jì)算添加回收率及變異系數(shù)。結(jié)果如下：表3 鮮煙葉的添加回收table3 the recovery of fresh tobacco 添加回收樣品添加濃度平均峰面積平均回收率rds%鮮煙葉0.010.5131.76156.48319.320.948060.9531780.9936314.3382151.0601452.831542表4 煙草土壤的添加回收table4 the recovery of tobacco soil添加回收樣品添加濃度平均峰面積平均回收率rds%煙草土0.010.5152.14318.4724.320.8104661.058981.1038253.8492290.4752751.856193 結(jié)果表明：啶蟲脒在鮮煙葉樣品中的回收率范圍為94.81%-99.36%，相對(duì)偏差為1.06%-4.34%；在煙草土樣品中的回收率范圍為81.05%-110.38%，相對(duì)偏差為0.475%-3.85%；該方法的準(zhǔn)確度和精密度較好，能滿足農(nóng)藥殘留分析方法的要求，可用于煙葉、煙草土中啶蟲脒的殘留分析測(cè)定。4.5 啶蟲脒在煙葉中的消解動(dòng)態(tài)將70%啶蟲脒水乳劑按用量為253.125g/h在土壤上施藥一次，試驗(yàn)地分別為湖南長(zhǎng)沙，山東青島兩個(gè)地區(qū)進(jìn)行，設(shè)置不同時(shí)間進(jìn)行采集樣品，煙葉的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)樣品進(jìn)行分析測(cè)定。4.5.1 煙葉的消解動(dòng)態(tài)結(jié)果 結(jié)果如下所示：表5 （2013-2014）湖南長(zhǎng)沙、山東青島兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的煙葉樣品中啶蟲脒的消解動(dòng)態(tài)ttable5 (2013-2014)the tobacco resolution of acetamiprid dynamic in hunan changsha and shandon qingdao時(shí)間2013年長(zhǎng)沙植動(dòng)2014年長(zhǎng)沙植動(dòng)2013年山東植動(dòng)2014年山東植動(dòng)殘留量消解率殘留量消解率殘留量消解率殘留量消解率2h1d3d5d7d10d14d21d28d35d42d1.931.481.231.060.880.590.390.190.0800023.6036.3945.3454.5569.5779.9790.0195.701001002.432.381.631.380.670.500.390.180.080002.3032.8743.3272.2779.3983.6792.5196.911001001.160.980.690.4050000016.1540.6465.8181.5390.9095.621001001001000.990.980.860.670.330.180.04000001.5212.7832.1566.6382.2595.84100100100100 圖2 啶蟲脒在湖南長(zhǎng)沙、山東青島兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的煙草樣品中消解動(dòng)態(tài)圖（2013年）figure2 the tobacco resolution of acetamiprid dynamic in hunan changsha and shandon qingdao(2013)圖3 啶蟲脒在湖南長(zhǎng)沙、山東青島、兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的煙草樣品中消解動(dòng)態(tài)圖（2014年）figure3 the tobacco resolution of acetamiprid dynamic in hunan changsha and shandon qingdao(2014)從以上圖、表中可以看出，隨著時(shí)間的增加，啶蟲脒殘留量逐漸下降。啶蟲脒在煙葉中的消解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)化學(xué)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程，其相關(guān)系數(shù)均達(dá)顯著標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：(1）啶蟲脒在煙葉中的消解動(dòng)力學(xué)方程為；2013年湖南長(zhǎng)沙： ct= 1.7395e-0.1070t,半衰期（t1/2）為6.14，r2=0.9925，28天后已消解95.7%；2014年湖南長(zhǎng)沙：ct= 2.1975e-0.1228t半衰期（t1/2）為5.82， r2=0.9303 ，28天后已消解96.91% 。（2）啶蟲脒在煙葉中的消解動(dòng)力學(xué)方程為；2013年山東青島：ct = 1.2591e-0.2364t，半衰期（t1/2）為4.21，r2=0.9903，14天后已消解95.62% 。2014年山東青島：ct = 1.7411e-0.2490t，半衰期（t1/2）為4.18，r2=0.7541，14天后已消解95.84% 。說(shuō)明啶蟲脒在煙葉中的消解率在28天后能達(dá)到90%以上，對(duì)煙葉產(chǎn)品的安全沒(méi)有構(gòu)成很大影響。4.5.2 煙草土壤的消解動(dòng)態(tài)結(jié)果 結(jié)果如下所示：表6（2013-214）年湖南長(zhǎng)沙、山東青島兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的煙草土樣品中啶蟲脒的消解動(dòng)態(tài)ttable6 (2013-2014)the tobacco soil resolution of acetamiprid dynamic in hunan changsha and shandon qingdao時(shí)間2013年長(zhǎng)沙土動(dòng)殘留量2014年長(zhǎng)沙土動(dòng)殘留量2013年山東土動(dòng)殘留量2014年山東土動(dòng)殘留量2h1d3d5d7d10d14d21d28d35d42d0.1750.1690.1346000000.1940.1550.1080.0780.0750.035000000.2290.170.1480.1130.0590.0430.0410.0330.016000.155.1540.1050.0780.0570.0420.0310.0230.01300 圖4 啶蟲脒在湖南長(zhǎng)沙、山東青島、兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的煙草土壤樣品中消解動(dòng)態(tài)圖（2013年）figure4 the tobacco soil resolution of acetamiprid dynamic in hunan changsha and shandon qingdao(2013) 圖5 啶蟲脒在湖南長(zhǎng)沙、山東青島、兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的煙草土壤樣品中消解動(dòng)態(tài)圖（2014年）figure5 the tobacco soil resolution of acetamiprid dynamic in hunan changsha and shandon qingdao(2014) 從表中可以看出，隨著時(shí)間的增加，其殘留量逐漸下降。啶蟲脒在煙草土壤中的消解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)化學(xué)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程，其相關(guān)系數(shù)均達(dá)顯著標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：（1）啶蟲脒在土壤中的消解動(dòng)力學(xué)方程為，2013年湖南長(zhǎng)沙： ct = 0.2130e-0.1312t，半衰期（t1/2）為6.12， r2=0.8066，10天后已消解100% 。2014年湖南長(zhǎng)沙： ct = 0.1798e-0.1540t，半衰期（t1/2）為3.87， r2=0.9673，10天后已消解100% 。（2）啶蟲脒在土壤中的消解動(dòng)力學(xué)方程為，2013年山東青島：ct = 0.1425e-0.0614t，半衰期（t1/2）為4.98，r2=0.8409，28天后已消解100% 。2014年山東青島：ct = 0.1184e-0.0634t，半衰期（t1/2）為5.10，r2=0.8508，28天后已消解100% ，說(shuō)明啶蟲脒在土壤中的降解性能比交好，是降解性農(nóng)藥。 從湖南長(zhǎng)沙、山東青島兩個(gè)地區(qū)的試驗(yàn)結(jié)果表明：啶蟲脒在煙草土壤中的降解速率較快；啶蟲脒在煙草中的消解狀況相對(duì)較緩，但消解情況都比較徹底，而且煙草和煙草土壤中啶蟲脒的殘留量與采樣間隔時(shí)間均呈負(fù)相關(guān)。5 結(jié)論與討論5.1 總結(jié)本文主要研究了啶蟲脒在煙草及煙草土壤中的殘留分析檢測(cè)方法，啶蟲脒在煙草及煙草土壤中的消解動(dòng)態(tài)。得出的主要結(jié)論如下：（1） 通過(guò)樣品前處理?xiàng)l件的試驗(yàn)研究，建立了啶蟲脒在煙草和煙草土壤樣品中的高效液相色譜法（hplc法）。該方法用50ml乙腈振蕩提取60 min，在上述殘留分析測(cè)定方法條件下，煙葉中70%啶蟲脒的平均添加回收率在94.81%-99.36%之間，相對(duì)偏差在 1.06%-4.34%之間；煙草土壤中70%啶蟲脒的平均添加回收率在81.05%-110.38%之間，相對(duì)偏差在0.475%-3.85%之間。（2） 高效液相相色譜儀對(duì)其的最小檢出量為 1.010-9g，煙葉中啶蟲脒的最低檢出濃度為0.05mg/kg；煙草土壤中啶蟲脒的最低檢出濃度為0.06mg/kg。該方法簡(jiǎn)便易行、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、精密度高，符合農(nóng)藥殘留量分析方法的要求。 （3）湖南長(zhǎng)沙、山東青島兩個(gè)地區(qū)，啶蟲脒煙草和煙草在土壤 中的消解規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程： ct=c0e-kt，啶蟲脒在煙草和煙草土壤中的殘留量與施藥的劑量、次數(shù)呈正相關(guān)，與采樣間隔時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。分析結(jié)果表明兩地的啶蟲脒消解狀況基本一致，能較快消解，在煙草中半衰期（t1/2）為4.21-6.14；在煙草土壤中半衰期（t1/2）為3.87-6.12，屬于易降解農(nóng)藥（半衰期t1/230天）。5.2 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn) (1）建立了一種最低檢出濃度和添加回收率能滿足農(nóng)藥殘留方法要求，穩(wěn)定準(zhǔn)確可靠，適合國(guó)內(nèi)一般實(shí)驗(yàn)室條件的土壤樣品中啶蟲脒的殘留量分析測(cè)定方法。 （2）比較性的研究了70%啶蟲脒水乳劑在我國(guó)不同地區(qū)煙草和煙草土壤中的降解規(guī)律。為這種農(nóng)藥使用后對(duì)環(huán)境造成的影響進(jìn)行了量化評(píng)估，并為70%啶蟲脒在蔬菜、瓜果尤其是在煙草生產(chǎn)中的安全合理使用提供科學(xué)依據(jù)，保證廣大人民和煙草消費(fèi)者的人身健康安全。參考文獻(xiàn)1 史長(zhǎng)生. 農(nóng)藥殘留危害以及檢測(cè)技術(shù)的分析j. 食品研究與開發(fā), 2010, 31(9): 218-221.2 rhouma a ,trid s. first report of a branch dieback of olive trees in tunisia caused by a phoma sp.j.plant di.2011:23-263 jiyeonpark,jeongheuichoi,bomeekim,jonghyoukpark,soonkilcho,m. w.ghafar,a. m.abd elaty,jaehanshim. determination of acetamiprid residu es in zucchini grown under greenhouse conditions: application to behavioral dy namicsj. biomed. chromatogr